一种6-苄基腺嘌呤半抗原、人工抗原及其在免疫检测中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种6‑苄基腺嘌呤半抗原、人工抗原及其在免疫检测中的应用。本发明专利技术通过化合物a和化合物b多步反应得到6‑苄基腺嘌呤半抗原，所得半抗原引入的手臂不仅具有活性基团，还完整保留了待测目标物的所有胺基；且使用半抗原制得的人工抗原及单克隆抗体IC50值为1.6μg/L，可快速、便捷地实现6‑BA的检测，本发明专利技术中制备的荧光定量免疫层析试纸条对6‑BA检测灵敏度为2μg/L。

【技术实现步骤摘要】
一种6-苄基腺嘌呤半抗原、人工抗原及其在免疫检测中的应用
本专利技术属于免疫检测领域，特别涉及一种6-苄基腺嘌呤半抗原、人工抗原及其在免疫检测中的应用。
技术介绍
6-苄基腺嘌呤(6-benzylarninopuring，6-BA)是第一个人工合成的细胞分裂素，为白色或类白色晶体，难溶于水，微溶于乙醇，在酸、碱中稳定，具有抑制植物叶内叶绿素、核酸、蛋白质的分解，保绿防老；将氨基酸、生长素、无机盐等向处理部位调运等多种效能，广泛用在农业、果树和园艺作物从发芽到收获的各个阶段。由于6-BA药效良好、价格低廉，被当成一种生长调节剂广泛应用于无根培植豆芽的种植中。人体摄入过多的6-BA会刺激皮肤黏膜，造成食道、胃黏膜损伤，出现恶心、呕吐等。原国家食品药品监督管理总局、农业部、国家卫生和计划生育委员会均禁止在豆芽生产过程中使用6-苄基腺嘌呤。因此加强对6-BA呤残留量监测对于保证食品质量安全十分重要。目前，用于检测6-BA的方法主要为传统的检测方法，如分光光度法、高效液相色谱法及其联用技术等，以上方法虽然可以精确定量，但由于设备仪器昂贵，检测时间长，且需专业人员操作，无法实现真正意义上的现场快速检测；另一种检测方法为免疫学检测技术，此方法具有高特异性和高选择性的特点，非常适用于复杂基质痕量组分的分离或检测，随着学科间的相互渗透，其检测方法层出不穷，应用范围亦日益扩大，与传统检测方法相比，免疫学检测技术具有经济、快速、技术要点低、操作简便等特点。但免疫分析检测技术的关键是抗原和抗体的性能决定的，而抗原和抗体的关键又是相应的半抗原，因此，要得到性能优异的抗原和抗体，半抗原的结构设计就显得尤为重要。因此需设计出具有更高识别度的完全抗原成为亟需解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种6-苄基腺嘌呤半抗原；本专利技术的另一目的在于提供上述的半抗原的制备方法；本专利技术的另一目的在于提供一种人工抗原；本专利技术的另一目的在于提供一种上述人工抗原的制备方法；本专利技术的另一目的在于提供一种6-苄基腺嘌呤单克隆抗体；本专利技术的另一目的在于提供上述6-苄基腺嘌呤单克隆抗体在ELISA检测方法中的应用；本专利技术的另一目的在于提供上述6-苄基腺嘌呤单克隆抗体在免疫层析中的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种6-苄基腺嘌呤荧光定量免疫层析试纸条。本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术的第一个方面，提供：一种6-苄基腺嘌呤半抗原，其具有式I所示的结构式：本专利技术的第二个方面，提供：上述的半抗原的制备方法，包括如下步骤：化合物a和化合物b反应得到化合物c；化合物c水解得到半抗原其中，化合物a的结构式为化合物b的结构式为化合物c的结构式为进一步地，上述制备方法，还包括以下步骤：(1)将化合物a和化合物b在甲苯条件下发生缩合、还原反应，经分离和萃取得到化合物c；(2)化合物c在强碱条件下发生水解反应，经萃取、过滤，烘干后得到半抗原。本专利技术的第三个方面，提供：一种人工抗原，该人工抗原为上述的半抗原与蛋白载体偶联得到，该人工抗原的结构式如下：其中，protein为蛋白载体。进一步地，上述蛋白载体为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白中的任意一种。本专利技术的第四个方面，提供：一种上述人工抗原的制备方法，包括如下步骤：将上述半抗原与蛋白载体连接，得到上述人工抗原其中，上述半抗原在活化剂条件下与蛋白载体连接；上述活化剂包括1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺。本专利技术的第五个方面，提供：一种6-苄基腺嘌呤单克隆抗体，使用上述的半抗原或上述人工抗原制备得到。本专利技术的第六个方面，提供：上述6-苄基腺嘌呤单克隆抗体在ELISA检测方法中的应用。本专利技术的第七个方面，提供：上述6-苄基腺嘌呤单克隆抗体在免疫层析中的应用。本专利技术的第八个方面，提供：一种6-苄基腺嘌呤荧光定量免疫层析试纸条，该试纸条中的反应膜包被有上述的人工抗原。本专利技术的有益效果是：1.本专利技术设计的6-BA半抗原引入的手臂不仅具有活性基团，还完整保留了待测目标物的所有胺基，使得半抗原与待测目标物的电子云密度一致。2.本专利技术中的6-BA人工抗原及单克隆抗体用于ELISA检测特异性强，IC50值为1.6μg/L。3.本专利技术中的6-BA人工抗原及单克隆抗体用于荧光定量免疫层析技术，可快速、便捷地实现6-BA的检测，本专利技术中制备的荧光定量免疫层析试纸条对6-BA检测灵敏度为2μg/L。附图说明图1为本专利技术的6-BA半抗原的合成线路图；图2为本专利技术的6-BA半抗原ESI-MS分析图；图3为本专利技术的6-BA人工抗原的合成线路图；图4为不同浓度的6-BA标准溶液的OD值的四参数Logistic曲线图；图5为荧光定量检测试纸条对6-BA测定结果的四参数Logistic曲线图。具体实施方式为了使本专利技术的专利技术目的、技术方案及其技术效果更加清晰，以下结合具体实施方式，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解的是，本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本专利技术，并非为了限定本专利技术。所使用的实验材料和试剂，若无特别说明，均为常规可从商业途径所获得的耗材和试剂。实施例16-BA半抗原的制备一种6-苄基腺嘌呤半抗原，所述6-苄基腺嘌呤半抗原具有式I所示的结构式：如图1所示，本专利技术的6-BA半抗原通过以下方法制备，步骤如下：(1)取2.0g(14.8mmol)化合物a，依次加入10ml甲苯和4.9g(29.6mmol)化合物b，于100～120℃反应5h以上。反应完毕，减压去溶剂，加入20ml无水乙醇溶解残余物，用冰浴冷却后，加入1.1g(29.6mmol)NaBH4，待不产气后升温到60～70℃反应2h以上。反应完毕，减压去溶剂，加入20ml纯化水，用1M的稀盐酸将水相PH值调至1～2，乙酸乙酯萃取两次，水相加入碳酸氢钠固体至PH≥8，再用二氯甲烷萃取两次，合并二氯甲烷层，减压去溶剂，得3.6g化合物c。(2)将3.6g(12.7mmol)的化合物c溶于20ml乙醇中，加入6mol/L的氢氧化锂溶液将化合物c的乙醇溶液的PH值调至12以上，室温反应15～26h，然后加入40ml纯化水，用二氯甲烷萃取两次，水相通过1M的稀盐酸将PH值调至4～5，过滤，烘干得到1.5g半抗原。对制得的半抗原进行ESI-MS分析(270.1[M+1])，结果如图2所示，制得的6-BA半抗原的结构式为实施例26-BA人工抗原的制备本专利技术中的6-BA人工抗原，其结构式为：其中，prote本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种6-苄基腺嘌呤半抗原，其特征在于，所述6-苄基腺嘌呤半抗原具有式I所示的结构式：/n

【技术特征摘要】
1.一种6-苄基腺嘌呤半抗原，其特征在于，所述6-苄基腺嘌呤半抗原具有式I所示的结构式：





2.权利要求1所述的半抗原的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)化合物a和化合物b反应得到化合物c；
2)化合物c水解得到半抗原
其中，化合物a的结构式为
化合物b的结构式为
化合物c的结构式为


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，还包括以下步骤：
(1)化合物a和化合物b在甲苯条件下发生缩合、还原反应，经分离和萃取得到化合物c；
(2)化合物c在强碱条件下发生水解反应，经萃取、过滤，烘干后得到半抗原。


4.一种人工抗原，其特征在于，所述人工抗原为权利要求1所述的半抗原与蛋白载体偶联得到，所述人工抗原的结构式如下：



其中，protein为蛋白载体。


5.根据权利要求4所述的人工...

【专利技术属性】
技术研发人员：李斌，梁科，梁巧雯，李韵婷，石松，
申请(专利权)人：广东达元绿洲食品安全科技股份有限公司，广东达元食品药品安全技术有限公司，广州达元食品安全技术有限公司，广东中检达元检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44