本发明专利技术提供一种用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及控制系统。其中用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物包括SEQ ID NO:01至SEQ ID NO:50所示的引物。本发明专利技术提供的所述用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及控制系统，解决了以下现有的技术问题:1.现有技术主要检测TERT基因启动子的点突变，检测范围有限；2.实时荧光定量PCR检测、基因芯片只能检测已知位点；3.Sanger测序检验长度小于800bp的范围；4.检测多个位点时操作繁琐、费用高；5.不能检测低频突变。
【技术实现步骤摘要】
用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及控制系统
本专利技术涉及基因测序领域，具体涉及一种用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及控制系统。
技术介绍
TERT（telomerasereversetranscriptase,端粒酶逆转录酶）是指的端粒酶里面具有逆转录酶活性的催化亚基，是端粒酶的重要催化部分，影响着端粒的调控机理，从而维持细胞的永生化和致癌。TERT基因位于第5号染色体，其转录本NM_001193376.1具有15个外显子，外显子全长3275bp，TERT基因突变在黑色素瘤、脂肪瘤、肝细胞瘤、神经胶质瘤等恶性肿瘤中都有一定的检出率，且阳性患者的预后大多不良，是相关肿瘤的生物标记。关于TERT基因的突变，目前已知研究较多的是能够增强TERT启动子活性的C228T和C250T两个点突变。现有技术的TERT基因突变检测多为针对TERT基因启动子活性的C228T和C250T位点进行检测，存在以下局限性：1.实时荧光定量PCR检测和基因芯片检测，不能检测未知位点；2.Sanger测序的检测位点局限在800bp以内；3.涉及多个位点检测时，原有技术操作繁琐、费用高；4.不能检测低频突变。
技术实现思路
为解决现有技术的TERT基因突变检测多为针对TERT基因启动子活性的C228T和C250T位点进行检测，存在多种局限性的技术问题，本专利技术提供一种解决上述问题的用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物、试剂及控制系统。用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物包括SEQIDNO：01~SEQIDNO：50所示的全部引物。用于TERT基因全外显子二代测序的试剂包括上述的多重PCR引物组合物以及二代测序所需试剂。引物组合物在进行多重PCR扩增前，先将SEQIDNO：01~SEQIDNO：02、SEQIDNO：05~SEQIDNO：06、SEQIDNO：09~SEQIDNO：14、SEQIDNO：19~SEQIDNO：20、SEQIDNO：23~SEQIDNO：30、SEQIDNO：41~SEQIDNO：48所示的引物记为A类；将SEQIDNO：03~SEQIDNO：04、SEQIDNO：07~SEQIDNO：08、SEQIDNO：15~SEQIDNO：18、SEQIDNO：21~SEQIDNO：22、SEQIDNO：31~SEQIDNO：40、SEQIDNO：49~SEQIDNO：50所示的引物记为B类；将所述A类、所述B类分别取2ul等比混合、分别补水至200ul后，再分别按相对应的体系进行多重PCR扩增，产物加于一管，进行凝胶电泳鉴定产物长度可直接用于IonProton后，进行后续实验。用于TERT基因全外显子二代测序的控制系统包括：检测模块，采用上文所述的用于TERT基因全外显子二代测序的试剂进行多重PCR二代测序；显示模块，将检测结果转换为可视化数据，并将可视化的数据于显示设备进行展示；分析模块：基于预设的质控程序对检测结果进行验证，并将验证结果于同一显示设备进行展示。其中，运行所述检测模块包括以下步骤：步骤一：将全部的引物分为两组，分别震荡混匀备用；步骤二：两组引物分别进行多重PCR扩增；步骤三：两组引物共同进行凝胶电泳；步骤四：文库构件，包括PCR产物纯化、末端修复、接头连接、片段筛选、文库PCR扩增、文库扩增产物纯化；步骤五：测定DNA产物浓度；步骤六：将扩增子碱基数*给定的深度，按计算结果将样品混合后稀释到上机浓度；步骤七：油包水扩增、末班序列富集；步骤八：基于IonProton测序仪进行测序，获得检测结果。所述显示模块将步骤八中的检测结果转化为包括“5号染色体概图”、“测序结果”、“参考序列”三项数据的图表。所述分析模块直接以所述显示模块转化得到的图表为原始数据，与预设的数据进行对比，并向所述显示模块输出检测结果。相较于现有技术，通过采用本专利技术提供的所述用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物，基于二代测序的平台，利用靶向扩增技术进行多重PCR，实现了对TERT基因的全外显子二代测序，具有以下优点：1.能够100%覆盖TERT基因的全外显子区域，能够全面、准确的检测待测样本TERT基因的突变情况；2.能够检测出Sanger测序、实时荧光定量PCR、基因芯片所不能检测出的低频突变，具有较高的学术价值，能更好地服务于临床。由于本专利技术提供的所述用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物中引物量较大，在本专利技术提供的所述用于TERT基因全外显子二代测序的方法中，将引物分为两类组合，分别进行多重PCR扩增，解决了引物间相互影响，以及因GC含量不同，导致同等条件下扩增效率会不一的问题。附图说明图1是多重PCR法TERT二代测序结果概图；图2是多重PCR法TERT二代测序结果细节图。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，所描述的实施例仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。实施例1：用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物包括SEQIDNO：01~SEQIDNO：50所示的全部引物。将50条引物按照每管100p的标准稀释，并将其中SEQIDNO：01~SEQIDNO：02、SEQIDNO：05~SEQIDNO：06、SEQIDNO：09~SEQIDNO：14、SEQIDNO：19~SEQIDNO：20、SEQIDNO：23~SEQIDNO：30、SEQIDNO：41~SEQIDNO：48所示的引物记为A类；将SEQIDNO：03~SEQIDNO：04、SEQIDNO：07~SEQIDNO：08、SEQIDNO：15~SEQIDNO：18、SEQIDNO：21~SEQIDNO：22、SEQIDNO：31~SEQIDNO：40、SEQIDNO：49~SEQIDNO：50所示的引物记为B类。取一个新的1.5ml离心管，将标记为A类的每种引物分别加入2ul，补水至总体积为200ul，记为A类组合物。再另取一个新的1.5ml离心管，将标记为B类的每种引物分别加入2ul，补水至总体积为200ul，记为B类组合物。A类组合物、B类组合物分别震荡混匀后，于-20℃保存备用。用于TERT基因全外显子二代测序的试剂包括上述多重PCR引物组合物及二代测序所需的试剂，具体的内容在以下用于TERT基因全外显子二代测序的方法中说明。用于TERT基因全外显子二代测序的方法为采用上述的试剂对TERT基因全外显子进行二代测序，包括以下步骤：1、多重PCR扩增，包括：1.1、提供多重PCR扩增体系：A管：加入A类组合物5ul，及缓冲液等其他试剂。B管：加本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物，其特征在于：包括SEQID NO:01至SEQ ID NO:50所示的引物。/n
【技术特征摘要】
1.一种用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物，其特征在于：包括SEQIDNO:01至SEQIDNO:50所示的引物。
2.一种用于TERT基因全外显子二代测序的试剂，其特征在于：包括权利要求1所述的用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物及二代测序所需试剂。
3.根据权利要求1或2所述的用于TERT基因全外显子二代测序的多重PCR引物组合物，其特征在于：
所述多重PCR引物组合物通过如下处理方法获得：
将SEQIDNO：01~SEQIDNO：02、SEQIDNO：05~SEQIDNO：06、SEQIDNO：09~SEQIDNO：14、SEQIDNO：19~SEQIDNO：20、SEQIDNO：23~SEQIDNO：30、SEQIDNO：41~SEQIDNO：48所示的引物记为A类；
将SEQIDNO：03~SEQIDNO：04、SEQIDNO：07~SEQIDNO：08、SEQIDNO：15~SEQIDNO：18、SEQIDNO：21~SEQIDNO：22、SEQIDNO：31~SEQIDNO：40、SEQIDNO：49~SEQIDNO：50所示的引物记为B类；
将所述A类、所述B类分别混合，分别进行多重PCR扩增处理后，产物加于一管，共同进行凝胶电泳鉴定多重PCR的产物长度可直接用于测序仪后，进行后续实验。
4.一种用于TERT基因全外显子二代测序的控制系统，其特征在于，包括：...
【专利技术属性】
技术研发人员：周梅华，余艳，周鹏涛，龚强，李慧源，
申请(专利权)人：长沙金域医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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