CRISPR/LpCas9基因编辑系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种CRISPR/LpCas9基因编辑系统及其应用，CRISPR/LpCas9基因编辑系统包括：LpCas9蛋白和sgRNA复合体，能精确定位靶向DNA序列，并产生切割，使DNA发生双链断裂损伤；所述LpCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，或者基于SEQ ID NO:2改造的sgRNA序列。本发明专利技术能有效解决spCas9应用于副干酪乳杆菌上存在的异源密码子偏好性和细胞毒性的问题；通过导入人为设计的CRISPR RNA和修复模板在细胞中或体外进行基因编辑，有效解决了菌株因自身特性或携带代表质粒较大等原因所导致的转化效率过低的问题，同时其在基因编辑领域具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
CRISPR/LpCas9基因编辑系统及其应用
本专利技术涉及基因编辑
更具体地说，本专利技术涉及一种CRISPR/LpCas9基因编辑系统及其应用。
技术介绍
CRISPR/cas9系统是细菌和古细菌中存在的一种获得性免疫系统，现已作为一种基因编辑工具被广泛的应用。在CRISPR/Cas9系统中，Cas9蛋白与crRNA及tracrRNA形成核酸蛋白复合体，通过对靶位点附近的PAM序列的识别决定crRNA与靶序列的结合。当扫描到功能性的PAM位点时，Cas9与非PAM所在链结合，检查crRNA中的间隔区与目标DNA之间的序列匹配性。如果在种子区没有发现不匹配，那么Cas9将会对DNA双链进行精准切割。研究人员将crRNA和tracrRNA融合为一条RNA，称为sgRNA，并不影响其系统效率。CRISPR系统在乳酸菌中的应用仍然受到很大限制，目前应用最广泛的CRISPR/Cas9基因编辑系统，是基于酿脓链球菌的spCas9为核心构建的，其在乳杆菌中的应用因为细胞毒性、异源蛋白密码子偏好性等的影响受到限制。另外，C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CRISPR/LpCas9基因编辑系统，基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑，其特征在于，所述CRISPR/LpCas9基因编辑系统为LpCas9蛋白和sgRNA复合体，能精确定位靶向DNA序列，并产生切割，使DNA发生双链断裂损伤；所述LpCas9蛋白具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述sgRNA具有SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，或者基于SEQ ID NO:2改造的sgRNA序列。/n

【技术特征摘要】
1.CRISPR/LpCas9基因编辑系统，基因编辑为在细胞中或体外进行基因编辑，其特征在于，所述CRISPR/LpCas9基因编辑系统为LpCas9蛋白和sgRNA复合体，能精确定位靶向DNA序列，并产生切割，使DNA发生双链断裂损伤；所述LpCas9蛋白具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列；所述sgRNA具有SEQIDNO:2所示的核苷酸序列，或者基于SEQIDNO:2改造的sgRNA序列。


2.如权利要求1所述的CRISPR/LpCas9基因编辑系统，其特征在于，所述细胞包括真核细胞和原核细胞；所述真核细胞包括哺乳动物和植物细胞；所述原核细胞包括副干酪乳杆菌。


3.如权利要求1所述的CRISPR/LpCas9基因编辑系统，其特征在于，所述LpCas9蛋白包括无切割活性、具有单链切割活性和具有双链切割活性的LpCas9蛋白变体。


4.如权利要求1所述的CRISPR/LpCas9基因编辑系统，其特征在于，所述LpCas9蛋白是原始LpCas9蛋白的DNA序列经过密码子优化处理再转录翻译得到的，检测细胞为HEK293T细胞，原始LpCas9蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示，优化处理后的LpCas9蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示。


5.如权利要求1所述的CRISPR/LpCas9基因编辑系统，其特征在于，所述sgRNA是...

【专利技术属性】
技术研发人员：逄晓阳，李伟勋，杨兰，吕加平，芦晶，张书文，朱青，徐琛，
申请(专利权)人：中国农业科学院农产品加工研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11