一种用于合成生物学部件高效组装的试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了一种用于合成生物学部件高效组装的试剂盒及其使用方法，涉及合成生物学领域。试剂盒包括缓冲液、ATP、ⅡS核酸内切酶和T4DNA连接酶。本发明专利技术还提供该试剂盒的使用方法，即利用缓冲液、ATP和超纯水构建缓冲体系；加入T4DNA连接酶和ⅡS核酸内切酶，形成酶切连接体系；加入待组装部件和目标空载体，添加超纯水调整反应体系的体积；在PCR仪上进行热循环；PCR产物直接用于大肠杆菌转化，在筛选平板上选择白色抗性克隆，纯化质粒即可获得包含组装部件的目标重组载体。本发明专利技术从反应缓冲体系、ⅡS核酸内切酶活力以及部件与空载体的加入比例三方面入手进行优化，大幅度降低了合成生物学复杂通路的构建难度和成本。

【技术实现步骤摘要】
一种用于合成生物学部件高效组装的试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及合成生物学领域，尤其涉及一种用于合成生物学部件高效组装的试剂盒及其使用方法。
技术介绍
合成生物学是将现代工程学原理和方法应用到生物学形成的新研究领域，采用自下而上的方法构建人工生物体系，其目标是人造生命和高附加值产物的生物制造，已经在农作物改良、药物合成和个性化医疗等多个领域得到广泛应用。元件是合成生物学的基本单位，是一段具有特定功能的DNA序列，常见元件有启动子元件、蛋白CDS元件和终止子元件等。这些元件可以组装形成表达单元，表达单元进一步组装形成通路，不同通路可以组装形成复杂的合成生物学系统。元件、表达单元、通路和系统统称为部件，分层模块化的部件设计和标准化的部件组装方法是合成生物学的两个基石。先限制性酶切，分离目标序列后进一步连接的传统DNA重组方法操作复杂，过程冗长，难以实现标准化，组装后残留附加酶切位点等疤痕序列，难以适应合成生物学部件的高通量、并行和标准化组装要求。Gibson法可以高效实现任何序列的无痕组装，但难以实现标准化。基于ⅡS核酸内切酶的部本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种合成生物学部件组装试剂盒，其特征在于，包括缓冲液、ATP、ⅡS核酸内切酶和T4DNA连接酶。/n

【技术特征摘要】
1.一种合成生物学部件组装试剂盒，其特征在于，包括缓冲液、ATP、ⅡS核酸内切酶和T4DNA连接酶。


2.如权利要求1所述的一种合成生物学部件组装试剂盒，其特征在于，所述缓冲液是10×FastDigest缓冲液。


3.如权利要求1所述的一种合成生物学部件组装试剂盒，其特征在于，所述ⅡS核酸内切酶包括FastDigest系列ⅡS核酸内切酶Esp3I和Eco31I。


4.一种如权利要求1、2或3所述的合成生物学部件组装试剂盒的使用方法，其特征在于，所述使用方法包括以下步骤：
步骤(1)利用缓冲液、ATP和超纯水在PCR管中构建缓冲体系；
步骤(2)向步骤(1)的所述PCR管加入T4DNA连接酶和ⅡS核酸内切酶，形成酶切连接体系；
步骤(3)向步骤(2)的所述PCR管中加入待组装部件和目标空载体，添加所述超纯水调整反应体系的体积；在PCR仪上进行热循环，得到PCR产物；
步骤(4)将步骤(3)获得的所述PCR产物直接用于大肠杆菌转化，在筛选平板上选择白色抗性克隆，纯化质粒即可获得包含所述组装部件的目标重组载体。


5.如权利要求4所述的合成生物学部件组装试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述缓冲液为10×FastDigest缓冲液；所述ATP母液的浓度为10～20mM。


6.如权利要求4所述的合成生物学部件组装试剂盒的使用方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述ⅡS核酸内切酶根据所述待组装部件两侧的内切...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗志奇，徐美慧，张耀杰，唐克轩，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31