在蛋白中高效引入赖氨酸衍生物的氨酰基-tRNA合成酶制造技术

本发明专利技术提供了在蛋白中高效引入赖氨酸衍生物的氨酰基—tRNA合成酶。具体地，本发明专利技术提供了一种突变型赖氨酰‑tRNA合成酶。相比野生型赖氨酰‑tRNA合成酶，本发明专利技术突变型赖氨酰‑tRNA合成酶可显著提高非天然氨基酸插入量和含有非天然氨基酸的目的蛋白量。此外，本发明专利技术突变型赖氨酰‑tRNA合成酶还可以提高目的蛋白的稳定性，使其不容易断裂。

【技术实现步骤摘要】
在蛋白中高效引入赖氨酸衍生物的氨酰基-tRNA合成酶
本专利技术涉及生物
，具体地涉及在蛋白中高效引入赖氨酸衍生物的氨酰基—tRNA合成酶。
技术介绍
将蛋白质中的希望的位置的氨基酸残基用通常的蛋白质合成所涉及的20种类以外的氨基酸(非天然氨基酸)替换而得到的非天然氨基酸整合蛋白质(全蛋白质)，能够成为用于蛋白质的结构功能解析的有效手段。使用源自各种生物种类的氨基酰-tRNA合成酶(aaRS)/tRNA对，已经合成了30种类以上的全蛋白质。历史最长并且应用于许多有用非天然氨基酸导入的体系为酪氨酰-tRNA合成酶(TyrRS)突变体与经琥珀抑制基因化tRNATyr对。就该方法而言，成为关键的是其正交的关系，即，真细菌、与古细菌和真核生物这两个组中的aaRS在各自的组内将tRNA氨基酰化，但不能将其它组的tRNA氨基酰化。另一方面，源自马氏甲烷八叠球菌(Methanosarcinamazei)的吡咯赖氨酰-tRNA合成酶(PylRS)和琥珀抑制基因tRNAPyl，在大肠杆菌细胞内作为具有正交性的aaRS/tRNA对而发挥功能。吡咯赖氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种突变型赖氨酰-tRNA合成酶，其特征在于，所述突变型赖氨酰-tRNA合成酶在对应于野生型赖氨酰-tRNA合成酶的氨基酸序列中第19位精氨酸(R)和/或第29位组氨酸(H)发生突变。/n

【技术特征摘要】
1.一种突变型赖氨酰-tRNA合成酶，其特征在于，所述突变型赖氨酰-tRNA合成酶在对应于野生型赖氨酰-tRNA合成酶的氨基酸序列中第19位精氨酸(R)和/或第29位组氨酸(H)发生突变。


2.如权利要求1所述的突变型赖氨酰-tRNA合成酶，其特征在于，所述突变型赖氨酰-tRNA合成酶还包括选自下组的位点发生突变：第26位异亮氨酸(I)、第122位苏氨酸(T)、第309位亮氨酸(L)、第348位半胱氨酸(C)、第384位酪氨酸(Y)、或其组合。


3.如权利要求1所述的突变型赖氨酰-tRNA合成酶，其特征在于，所述突变型赖氨酰-tRNA合成酶选自下组：
(1)氨基酸序列如SEQIDNO.:3-8任一所示的多肽；或
(2)将SEQIDNO.:3-8任一所示氨基酸序列经过一个或几个，优选1-20个、更优选1-15个、更优选1-10个、更优选1-8个、更优选1-3个、最优选1个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，具有(1)所述多肽功能的由SEQIDNO.:3-8任一所示氨基酸序列的多肽衍生的多肽。


4.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1所述的突变型赖氨酰-tRNA合成酶。


5.一种载体，其特征在于，所述载体含有如权利要求4所述的多核苷酸。


6.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞含有权...

【专利技术属性】
技术研发人员：查若鹏，吴松，张振山，刘慧玲，陈卫，
申请(专利权)人：宁波鲲鹏生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33