本发明专利技术涉及一种测定血氨含量的方法，同时本发明专利技术还涉及血氨诊断试剂盒，属于医学检验测定技术领域。该试剂盒包括缓冲液、腺苷三磷酸、谷氨酸、丙酮酸、谷氨酰胺合成酶、丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、还原型色原体组合、稳定剂，通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生酶偶联反应，再将最终反应物置于生化分析仪下，检测主波长吸光度变化的情况，从而测算出血氨的含量大小。采用本发明专利技术完全可以通过生化分析仪器得出所需的测定结果，并且灵敏度高、精确度好，不受内外源物质的污染，便于推广应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种测定血氨含量的方法，同时本专利技术还涉及血氨诊断试剂盒，属于医学检验测定
技术介绍
氨测定的方法有微量扩散法、离子交换法、酶法和氨电极法等。目前应用最多的方法是酶法和基于离子选择电极的血氨测定仪分析法。扩散法是标本碱化后，释放出NH3，用酸滴定释放出的氨，或用Nessler反应形成棕黄色碘化双汞胺进行比色。这些方法需要碱化，内源性的氨形成造成影响，使其准确性和精密度受到影响，目前已很少应用；离子交换法比扩散法更准确，CV为8％--13％；离子选择电极法是利用NH3扩散到电极表面，引起电极的PH发生变化进行测定，该方法的CV为3.5％--4.8％，回收率高。结合我国的具体实际，应以酶法测定为实用。检索中国专利，仅查出87105593.7号专利申请公开了一种血氨测定速冻杯，却未发现比较理想的血氨测定方法。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出一种可以克服以上现有技术缺点的血氨含量的测定方法，同时给出用以实现本专利技术方法的血氨诊断试剂盒。采用该试剂盒中的试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪上进行血氨含量测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。本专利技术测定血氨含量的步骤如下1)、将样品与主要由腺苷三磷酸、谷氨酸、丙酮酸、谷氨酰胺合成酶、丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、还原型色原体组合组成的试剂混合，使之发生如下原理的反应氨+谷氨酸+腺苷三磷酸谷氨酰胺合成酶谷氨酰胺+腺苷二磷酸+磷酸根磷酸根+丙酮酸+氧+水丙酮酸氧化酶乙酰磷酸+二氧化碳+过氧化氢过氧化氢+还原型色原体组合过氧化物酶吲嗒胺色原或醌亚胺色原+水2)、检测最终反应物在主波长400-600nm吸光度上升的速度，测算出血氨的含量。通常步骤2)将最终反应物置于紫外/可见光分析仪或者半、全自动生化分析仪器下，检测主波长400-600nm吸光度上升的速度，测算出血氨的含量。以上样品与试剂的混合比例为按体积1/10到1/250，以上过程的测定温度控制在常规的20℃到50℃范围，反应时间控制在常规的2-30分钟。本专利技术应用谷氨酰胺合成酶偶联丙酮酸氧化酶、过氧化物酶等酶偶联反应以及还原型Chromogen组合系统，将无色的还原型Chromogen组合氧化成有颜色的Quioneimine(or Indamine)染料，因此测量染料含量的高低(不同染料吸收波长不同，介于400--600nm之间)可以直接反映氨含量的大小。这个酶偶联反应系统的优点有它利用将无色的还原型Chromogen组合氧化成有颜色的Quioneimine(or Indamine)染料来反映氨含量，具有灵敏度高、精确度好的优点。此酶偶联反应系统的需要先将体(血)液中原来含有的磷酸根消灭掉，否则结果会受体(血)液中不等含量的磷酸根的影响。这种消灭内源磷酸根的步骤可以通过调配双、三试剂，让血样先和试剂中第二、第三反应先作用后，再加入谷氨酰胺合成酶启动氨的作用。用于实现本专利技术方法的血氨诊断试剂盒可以是单剂，包括缓冲液 40--200mmol/l腺苷三磷酸 1--20mmol/l谷氨酸 1--30mmol/l丙酮酸 1--30mmol/l谷氨酰胺合成酶 1000--50000U/l丙酮酸氧化酶1000--50000U/l过氧化氢酶 1000--50000U/l还原型色原体组合0.1--20mmol/l稳定剂 10--80％(总体积)以上还原型色原体组合可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙(3-methyl-2-benzothiazolinone-hydrszone简称MBTH)或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒(4-aminoantipyrine)与0.1--20mmol/l以下十四种成分之一组合而成石碳酸(phenol)N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺(N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-m-anisidine简称ESPAS)N，N-双乙基-m-甲苯胺(N，N-Diethyl-m-toluidine)2，4-双氯石碳酸(2，4-Dichloriphenol)2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸(2，4，6-Tribromo-3-hydroxy- benzenesulfonic acid简称TBHB)3，5-双氯石碳酸磺酸(3，5-Dichlorophenolsulfonic acid)3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸(3，5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonicacid简称DHBS)N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐(N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine sodium简称TOOS)仨溴羟基苯甲酸(Tribromohydroxybenzoic acid)双甲基苯胺(Dimethylaniline简称DMA)N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺(N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine简称EHSPT)2，2′-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)(2，2′-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)简称ABTS4-羟基-3-甲氧基苯甲酸(Vanillic acid(4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid)简称HMB)3-甲基-乙基-羟基苯胺(3-methyl-ethyl-hydroxyaniline简称MEHA)也可以将以上单剂配成如下双剂，更有利于消除内、外源磷酸根的污染试剂I缓冲液 40--200mmol/l谷氨酸 1--30mmol/l丙酮酸 1--30mmol/l谷氨酰胺合成酶 1000--50000U/l丙酮酸氧化酶1000--50000U/l过氧化氢酶 1000--50000U/l 还原型色原体组合(一)0.1--20mmol/l稳定剂 10--80％(总体积)还原型色原体组合(一)可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒二者中之一。试剂II缓冲液 40--200mmol/l腺苷三磷酸 l--20mmol/l稳定剂 10--50mmol/l还原型色原体组合(二)0.1--20mmol/l还原型色原体组合(二)可以是0.1--20mmol/l以下十四种成分之一石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N，N-双乙基-m-甲苯胺、2，4-双氯石碳酸、2，4，6-仨溴-3-羟基-苯磺酸、3，5-双氯石碳酸磺酸、3，5-双氯-2-羟基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐、仨溴羟基苯甲酸、双甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羟基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2，2′-AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羟基苯胺。双剂的配方不仅限于上述配方，还原型色原体组合(一)及(二)可以互换位置。其中的试剂I的成分，谷氨酸可以放在试剂II，试剂II的成分，腺苷三磷酸可以放在试剂I，腺本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种测定血氨含量的方法，步骤如下：１）、将样品与主要由腺苷三磷酸、谷氨酸、丙酮酸、谷氨酰胺合成酶、丙酮酸氧化酶、过氧化氢酶、还原型色原体组合组成的试剂混合，使之发生如下反应：氨＋谷氨酸＋腺苷三磷酸谷氨酰胺合成酶谷氨酰胺＋腺苷二磷酸＋磷酸根磷酸根＋丙酮酸＋氧＋水丙酮酸氧化酶乙酰磷酸＋二氧化碳＋过氧化氢过氧化氢＋还原型色原体组合过氧化物酶吲嗒胺色原或醌亚胺色原＋水２）、检测最终反应物在主波长４００－６００ｎｍ吸光度上升的速度，测算出血氨的含量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：王尔中，
类型：发明
国别省市：32[]
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