本发明专利技术属生化检验领域，涉及一种检测人外周静脉血单核细胞（ＰＭＮ）中谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量的方法，包括稀释，分离，沉淀静脉血后，用紫外分光光度仪于波长３１２－４７０ｎｍ处，测定光密度值，计算ＰＭＮ细胞中的ＧＳＨ含量。本方法的关键是，在肿瘤患者进行治疗方案选择前，对患者个体进行ＧＳＨ定量测定，根据患者外周血单核细胞内的ＧＳＨ含量，选择适宜的治疗方案，并预测其疗效。根据本方法检测结果，患者可选择在进行放疗或化疗同时，采用降低ＧＳＨ的药物，以促使细胞内的ＧＳＨ含量下降，使肿瘤细胞的敏感性增加，疗效提高。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属生化检验领域，涉及一种检测人外周静脉血单核细胞(PMN)中谷胱甘肽含量的方法。
技术介绍
二十一世纪恶性肿瘤的发病率和死亡率仍然很高，而临床上常用的放射治疗和化学药物治疗的方案，基本上是按照恶性肿瘤的种类及部位，采用常规的统一方案，没有考虑到不同患者个体之间的差异，特别是影响肿瘤细胞对射线和化疗药物敏感性的人体内生物小分子物质谷胱甘肽(Glutathionine，简称GSH)。谷胱甘肽存在于人外周静脉血单核细胞中，是人体内重要的生物小分子物质，它与患者的放射治疗和化学药物治疗疗效密切相关。但是每种不同类型的肿瘤以及每个患者个体之间的GSH差异较大，因此在接受基本上统一的放射和化疗治疗方案时，所获得的疗效可以相差较大。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，进一步可用于检测所制订的治疗恶性肿瘤的方案是否恰当，和预测所制订的治疗恶性肿瘤的方案其疗效如何。本专利技术通过检测人外周静脉血单核细胞中谷胱甘肽(GSH)含量.可进行指导制订临床恶性肿瘤治疗方案和预测其疗效指标。本专利技术方法的关键是，在肿瘤患者进行治疗方案选择前，对接受治疗的个体分别进行GSH定量的测定，根据患者的外周血单核细胞内的GSH含量高低状况，选择适宜的治疗方案，并预测其疗效。若患者的外周血单核细胞内的GSH含量高，则表明其肿瘤细胞对射线的敏感性差、对化疗药物会产生多药耐药性，则预测其疗效较差，所说的病例可选择在进行放疗或化疗同时，采用降低GSH的药物，以促使细胞内的GSH含量下降，使肿瘤细胞的敏感性增加，疗效提高。本专利技术方法其中检测外周血单核细胞内的GSH含量的方法通过下述步骤施行1.取肿瘤患者静脉血于加有抗凝剂的试管中，加生理盐水稀释。另取两支试管，每管加淋巴细胞分离液，将上述稀释血样加到分离液上层，2500-3500转/分，离心后分成四层血浆层、界面层即PMN层、分离液层、红细胞层。2.吸取界面层即PMN层于离心管内，加PBS液，1500-4000转/分，离心，取沉淀即PMN细胞，加PBS精确稀释，PMN细胞计数，再1500-4000转/分，离心，弃PBS液，沉淀为PMN备用，放入4℃冰箱保存。3.取上述沉淀PMN细胞加水，加硫代水杨酸溶解使蛋白沉淀，吸至指性管，10500-15000转/分，离心去蛋白，取上清液，用紫外分光光度仪于波长在312-470nm处.进行测定，测得的光密度值(OD)，进行计算得到在PMN细胞中的GSH含量。采用本专利技术方法，对非小细胞肺癌两组外周血单核细胞GSH含量变化情况进行治疗方案选择，A组化疗前采用降低GSH的药物，B组不采用降低GSH的药物，通过对每个患者治疗前的PMN细胞中GSH含量的测定并对于含量高的患者，采用降低GSH的药物后，再进行常规化疗，使患者的治疗疗效得到提高。表1是非小细胞肺癌两组外周血单核细胞GSH含量变化情况。表2.非小细胞肺癌两组化疗的疗效比较。表1 P＝0.0835 表2 具体实施方式实施例1 检测外周血单核细胞内的GSH含量取肿瘤患者静脉血3～4毫升于加有抗凝剂的试管中，加生理盐水1∶2进行稀释。另取两支试管，每管加淋巴细胞分离液(密度1.077)4ml，再将上述稀释的血样立即缓慢加到分离液上层(两层之间使其成一清晰的界面)，2500-3500转/分，离心15min，离心后分成四层血浆层、界面层即PMN层、分离液层、红细胞层。小心吸取界面层即PMN层于10ml离心管内，加PBS液至5-15ml，1500-4000转/分，离心10-25min，取沉淀即PMN细胞，加PBS精确稀释至10ml，进行PMN细胞计数，再1500-4000转/分，离心10-25min，弃PBS液，沉淀为PMN备用，放入4℃冰箱保存。取上述的沉淀PMN细胞加0.75ml水加0.25ml硫代水杨酸溶解使蛋白沉淀，吸至1ml指性管，10500-15000转/分，2-4分钟离心去蛋白，取上清液，用紫外分光光度仪于波长在312-470nm处，进行测定，测得的光密度值(OD)，进行计算得到在PMN细胞中的GSH含量。实施例2不同癌症患者的GSH差异性随机获取已经临床确实的非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌患者各100例(男女均有)，年龄在18～75岁之间，分别取静脉血3～4毫升于加有抗凝剂的试管中，加生理盐水1∶2进行稀释，定量测定外周血单核细胞中GSH，另取两支试管，每管加淋巴细胞分离液(密度1.077)4ml，再将上述稀释的血样立即缓慢加到分离液上层(两层之间使其成一清晰的界面)，2500-3500转/分，离心15min，离心后分成四层血浆层、界面层即PMN层、分离液层、红细胞层。小心吸取界面层即PMN层于10ml离心管内，加PBS液至10ml，3000转/分，离心10min，取沉淀即PMN细胞，加PBS精确稀释至10ml，进行PMN细胞计数，再3000转/分，离心10min，弃PBS液，沉淀为PMN备用，放入4℃冰箱保存。取上述的沉淀PMN细胞加0.75ml水加0.25ml硫代水杨酸溶解使蛋白沉淀，吸至1ml指性管，12000转/分，2-4分钟离心去蛋白，取上清液，用紫外分光光度仪于波长在420nm处，进行测定，测得的光密度值(OD)，进行计算得到在PMN细胞中的GSH含量。经过统计处理后得到上述3种临床常见癌症患者的GSH含量分别如下非小细胞肺癌 1.58±2.86×10-12μmol/细胞乳腺癌2.47±3.31×10-12μmol/细胞卵巢癌3.23±4.42×10-12μμmol/细胞上述3种临床常见癌症中，以卵巢癌患者的GSH含量为高。实施例3所选患者均采用本专利技术方法检测人外周静脉血单核细胞中谷胱甘肽含量1、陈××，男，46岁，非小细胞肺癌，鳞癌，X线检查肿瘤大小为10×8.2cm2，并有淋巴结和骨转移。化疗前其外周血单核细胞中GSH为0.9880×10-12μmol/细胞，低于非小细胞肺癌的平均值，预示陈××所患的非小细胞肺癌对化疗药物的敏感性较好。2001年9月入院治疗，在进行常规化疗前，用抑制GSH合成酶的药物，使其GSH含量下降至0.3065×10-12μmol/细胞(下降61.68％)，治疗后X线检查肿瘤大小为5.5×3.8cm2，缩小74.5％，达到部分缓解(PR)，疗效明显。2、××，男，46岁，非小细胞肺癌，化疗前其外周血单核细胞中GSH为0.9880×10-12μmol/细胞，外周血单核细胞中GSH 0.9880，上升，治疗后SD3、许××，女，62岁，乳腺癌(左右双乳肿瘤)，伴腋下及锁骨淋巴结转移。住院进行化疗，乳腺部肿瘤大小右乳6×4cm2，左乳2×2cm2；转移淋巴结大小2×2.5cm2。化疗前外周血单核细胞中GSH为2.1130×10-12μmol/细胞，属平均水平，预示有一定的疗效。在进行常规化疗前，用抑制GSH合成酶的药物，使其GSH含量下降至1.4350×10-12μmol/细胞(下降32.08％)后观察疗效，应该更佳。治疗后检查肿瘤大小分别为右乳2×2cm2(缩小83.3％)左乳1×1.5cm2(缩小62.5％)，疗效明显，达到部分缓解(PR)。4、××，女，62岁，乳腺癌。化疗前外周血单核细胞中GSH为2.1130×10-12μmo本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测人外周静脉血单核细胞中谷胱甘肽（ＧＳＨ）含量的方法，其特征是在肿瘤患者进行治疗方案选择前，对接受治疗的个体分别进行ＧＳＨ定量的测定，根据患者的外周血单核细胞内的ＧＳＨ含量高低状况，选择治疗方案，并预测其疗效；所述的检测人外周静脉血单核细胞中ＧＳＨ含量的方法，包括下述步骤： １）取肿瘤患者静脉血３～４毫升于加有抗凝剂的试管中，加生理盐水１∶２进行稀释； 另取两支试管，每管加淋巴细胞分离液（密度１．０７７）４ｍｌ，再将上述稀释的血样加到分离液上层，２５００－３５００转／分，离心１５ｍｉｎ，离心后分成四层：血浆层、界面层即ＰＭＮ层、分离液层、红细胞层； ２）吸取界面层于１０ｍｌ离心管内，加ＰＢＳ液至５－１５ｍｌ，１５００－４０００转／分，离心１０－２５ｍｉｎ，取沉淀细胞，加ＰＢＳ精确稀释至１０ｍｌ，进行ＰＭＮ细胞计数，再１５００－４０００转／分，离心１０－２５ｍｉｎ，弃ＰＢＳ液，沉淀为ＰＭＮ备用，放入４℃冰箱保存； ３）取上述沉淀细胞加０．７５ｍｌ水加０．２５ｍｌ硫代水杨酸溶解使蛋白沉淀，吸至１ｍｌ指性管，１０５００－１５０００转／分，２－４分钟离心去蛋白，取上清液，用紫外分光光度仪于波长在３１２－４７０ｎｍ处，测定光密度值（ＯＤ），计算得到ＰＭＮ细胞中的ＧＳＨ含量。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：金一尊，
申请(专利权)人：上海中敏新技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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