卡莫司汀原料或其制剂中杂质的高效液相色谱法检测方法技术

卡莫司汀原料或其制剂中杂质的高效液相色谱法检测方法。该方法的色谱条件中固定相用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相采用乙腈和水体系；采用紫外检测器，测定检测波长为检测波长为２０５ｎｍ－２３０ｎｍ±２ｎｍ；该方法灵敏度高、专属性强，能很好地检测氯法拉滨原料及其制剂的杂质。为生产进程中的质量控制分析提供了简单可靠的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医药
，具体地说是采用高效液相色谱法对卡莫司汀原料或其制剂中杂质的检测。
技术介绍
本专利技术中所述卡莫司汀的药品名称为通用名卡莫司汀化学名1，3-双(α-氯乙基)-1-亚硝基脲。1，3-bis(2-chloroethyl)-1-nitrosourea英文名Carmustine汉语拼音名Kamositing化学结构式 分子式C5H9Cl2N3O2分子量214.05随着医学的进步，一般性传染病的逐渐被控制，恶性肿瘤—癌症成为常见且严重威胁人类生命和生活质量的主要疾病之一。脑肿瘤又称颅内肿瘤，是一种缓慢起病逐渐加重的脑部疾病。原发于颅内者称原发性颅内肿瘤；由全身其他部位的恶性肿瘤转移至颅内者称转移性颅内肿瘤。常见的颅内肿瘤有胶质瘤、脑膜瘤及神经鞘瘤。原发性脑肿瘤的发病率为2～19/10万，约2/3为恶性。脑肿瘤无论是良性或恶性，因瘤体会占位压迫脑组织，其后果都是相似的。与全身各系统肿瘤相比，其生存期短、死亡率高，治疗困难。卡莫司汀(Carmustine，BCNU)为亚硝脲类烷化剂。现认为本品进入体内后，在生理条件下经过OH离子的作用形成异氰酸盐和重氮氢氧化物。异氰酸盐使蛋白质氨甲酰化，重氮氢氧化物生成正碳离子使生物大分子烷化。异氰酸盐可抑制DNA聚合酶，抑制DNA修复和RNA合成。产生DNA交叉链的第一步反应是使G-O6部位烷化，再在C-N1和G-N3之间以2碳键联生成链间交联。BCNU脂溶性好，能够通过血脑屏障，故对脑瘤(恶性胶质细胞瘤、星形胶质细胞瘤、室管膜瘤)、脑转移瘤和脑膜白血病有效。二十多年，在众多的II期临床研究中，使得大家对部分化疗药物，特别是卡莫司汀的潜在疗效有了充分的了解。BCNU用量为150～200mg/m2，加入到5％葡萄糖或生理盐水中快速静脉滴注，6～8周后可重复治疗。临床有效率约为50％。BCUN加上手术和放疗，可使多行性胶质母细胞瘤和间变性星形细胞瘤的中位生存期，分别提高8～12月及2～3年，其他亚硝脲类，如环己亚硝脲(CCNU)、甲环亚硝脲(MeCCNU)、嘧啶亚硝脲(ACNU)、PCNU、PCZ、二溴卫矛醇等单一化疗疗效均不及BCNU。尽管从理论上讲，合并用药可提高疗效；但II期临床研究显示，亚硝脲类与PCZ、氮烯咪胺(DTIC)、鬼臼噻吩甙(VM26)、长春新碱、5-FU合并应用时，与BCNU单一应用相比，不但不能提高疗效，反而增加毒副作用。有关物质检查是药品质量标准的重要组成部分，对一些特殊有关物质的控制，既能保证用药的安全有效，又能考核药物的生产工艺和贮存条件。高效液相色谱法HPLC是近20年来发展起来的检测新技术，具有分离效果好，灵敏度高，分析速度快等优点，且能与多种类型的检测器联合应用，能满足大多数化合物种类的检测需要。经过文献查询，目前还没有用高效液相色谱法检测卡莫司汀原料及其制剂的有关物质的报道。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种可加强卡莫司汀原料或其制剂的质量控制、分离效果好、灵敏度高、分析速度快的。本专利技术方法是，取卡莫司汀原料及其制剂，加流动相配成每1ml中含卡莫司汀0.1～20mg的供试品溶液和每1ml中含1.5～300ug的对照溶液；照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)试验，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂柱为分析柱，以水、甲醇、醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液或乙腈任意两种或以上混合溶剂为流动相，采用紫外检测器，检测波长为205nm±2nm或230nm±2nm。理论板数按卡莫司汀峰计算应不低于3000，卡莫司汀峰与各有关物质峰的分离度大于1.5，符合《中国药典》(2005年版二部)中高效液相色谱法的有关规定。取对照液5～100ul注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分的峰高约为记录仪满量程的5～30％；再取上述两种溶液各5～100ul分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2～5倍；供试品如显有关物质峰，量取各有关物质峰面积之和，与对照溶液主成分峰面积比较，即可得出各有关物质的含量。具体包括下述操作步骤A、取卡莫司汀原料或其制剂，加流动相配成每1ml中含卡莫司汀0.1～20mg的供试品溶液和每1ml中含卡莫司汀1.5～300ug的对照溶液，所述流动相为乙腈和水按40∶60混合的溶液；B、按照高效液相色谱法进行检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈和水的混合溶液为流动相，乙腈和水的混合比为40∶60，采用紫外检测器，检测波长为205nm-230nm±2nm，理论板数按卡莫司汀峰计算不低于3000，卡莫司汀峰与各有关物质峰的分离度大于1.5；C、取对照液5～100ul注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分的峰高约为记录仪满量程的5～30％；D、再取上述供试品溶液和对照溶液各5～100ul分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2～5倍；E、供试品溶液如显杂质峰，量取各杂质峰面积之和，与对照溶液主成分峰面积比较，即可得出各杂质的含量。所述流动相为甲醇和水的混合溶液，混合比为55∶45。所述流动相为浓度为0.01mol/L的醋酸盐缓冲液和乙腈的混合溶液，混合比为60∶40。所述流动相为浓度浓度为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液和乙腈的混合溶液，混合比为60∶40。所述流动相为浓度为0.01mol/L的醋酸盐缓冲液和甲醇的混合溶液，混合比为45∶55。所述流动相为浓度浓度为0.01mol/L的磷酸盐缓冲液和甲醇的混合溶液，混合比为45∶55。本专利技术方法的试验过程如下1、仪器与试剂仪器岛津SPD-10Avp检测器，岛津LC-10ATvp泵。FA1104型电子天平PHS-3C型精密pH计(上海雷磁仪器有限公司) 色谱柱Discovery C18柱，规格250×4.6mm，粒度5um试剂乙腈为MR，蒸馏水自制。2、有关物质检测方法的建立(1)波长的选择取卡莫司汀样品及各中间体适量，加流动相(流动相为乙腈和水按40∶60混合的溶液)使溶解，并稀释成约10μg/ml，在200～400nm范围内对本品进行扫描，由扫描结果可见，本品在230nm波长处有最大吸收，结合中间体的扫描图谱，我们选择使用230nm波长作为本品有关物质检测的波长。(2)流动相的选择以乙腈—水为基本配比，调节乙腈与水的比例使得到理想状态。 由上表结果可见，以乙腈和水(40∶60)作为流动相，主峰保留时间适宜，峰形好，分离完全。故选择乙腈-水(40∶60)作为本品有关物质检测的流动相。(3)分离度试验取卡莫司汀合成过程中的中间体及卡莫司汀样品，加流动相溶解并稀释，制成一定浓度的溶液，作为样品溶液。分别取上述各溶液进样，记录各自的保留时间。再分别取上述各溶液适量混合，摇匀后取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，考察分离度。结果各中间体的保留时间与卡莫司汀的保留时间有明显的区别，分离度符合要求(4)系统适应性及专属性试验①破坏性试验分别称取卡莫司汀样品约25mg及其制剂适量(约含卡莫司汀25mg)，分别置50ml量瓶中，按下述各条件配制供试品。未破坏加流动相溶解并稀释至刻度，低温(4℃)避光放置4小时备用；酸破坏加0.1mol/L的盐酸溶液2ml，混匀后低温(4℃)避光放置4小时，4小时后加0.1mol/L的氢氧化钠溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
卡莫司汀原料或其制剂中杂质的高效液相色谱法检测方法，其特征在于：包括下述操作步骤　　　　Ａ、取卡莫司汀原料或其制剂，加流动相配成每１ｍｌ中含卡莫司汀０．１～２０ｍｇ的供试品溶液和每１ｍｌ中含卡莫司汀１．５～３００ｕｇ的对照溶液，所述流动相为乙腈和水按４０∶６０混合的溶液；　　　　Ｂ、按照高效液相色谱法进行检测，　　　　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈和水的混合溶液为流动相，乙腈和水的混合比为４０∶６０，采用紫外检测器，检测波长为２０５ｎｍ－２３０ｎｍ±２ｎｍ，理论板数按卡莫司汀峰计算不低于３０００，卡莫司汀峰与各有关物质峰的分离度大于１．５；　　　　Ｃ、取对照液５～１００ｕｌ注入液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分的峰高约为记录仪满量程的５～３０％；　　　　Ｄ、再取上述供试品溶液和对照溶液各５～１００ｕｌ分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的２～５倍；　　　　Ｅ、供试品溶液如显杂质峰，量取各杂质峰面积之和，与对照溶液主成分峰面积比较，即可得出各杂质的含量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：崔爱军，石庆平，郭辉，
申请(专利权)人：崔爱军，
类型：发明
国别省市：34[中国|安徽]