氯法拉滨原料或其制剂的杂质和含量的高效液相色谱法测定方法技术

本发明专利技术公开了一种氯法拉滨原料或其制剂的杂质和含量的高效液相色谱法测定方法。该方法的色谱条件中固定相用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相采用磷酸二氢铵溶液－甲醇或磷酸二氢铵溶液－乙腈体系；采用紫外检测器，杂质测定检测波长为２１０－２１４ｎｍ；含量测定检测波长为２６１ｎｍ－２６５ｎｍ；该方法灵敏度高、专属性强，能很好地检测氯法拉滨原料或其制剂的杂质和含量。为生产进程中的质量控制分析提供了简单可靠的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药
，具体地说是采用高效液相色谱法对氯法拉滨原料或其制剂中杂质和含量的检测。
技术介绍
本专利技术中所述氯法拉滨的药品名称为通用名氯法拉滨其他名克罗拉滨英文名Clofarabine汉语拼音Lüfalabin中文化学名2-氯-9-(2-去氧-2-氟-β-D-阿拉伯呋喃)-9H-嘌呤-6-胺英文化学名2-chloro-9-(2-deoxy-2-fluoro-β-D-arabinofuranosyl)-9H-purin-6-amine化学结构式 分子式C10H11ClFN5O3分子量303.68氯法拉滨(clofarabine)属于核苷酸类似物，由美国Genzyme公司研发，2004年12月28日批准用于儿童顽固性或复发性急性淋巴细胞白血病的治疗，其商品名为CLOLAR，本品已被FDA授予罕见药物地位，用于治疗儿童急性淋巴细胞白血病(acutelymphocytic leukemia，ALL)。本品在2005年1月份已在美国首次上市。氯法拉滨作为目前唯一可以特异性用于儿童白血病的化疗药，治疗白血病总体反应率高，并且很好耐受，没有不可预知的不良反应。既可以静脉给药，也可以口服，本品为十多年来首个获准专门用于儿童的白血病治疗新药。本品2005年在美国上市，为已在国外上市销售但在国内尚未上市销售的产品，且至2006年8月未检索到有在SFDA申请的厂家及机构。杂质检查和含量测定是药品质量标准的重要组成部分，对一些特殊杂质的控制，既能保证用药的安全有效，又能考核药物的生产工艺和贮存条件。高效液相色谱法HPLC是近20年来发展起来的检测新技术，具有分离效果好，灵敏度高，分析速度快等优点，且能与多种类型的检测器联合应用，能满足大多数化合物种类的检测需要。经过文献查询，目前还没有用高效液相色谱法检测氯法拉滨原料或其制剂的杂质和含量测定的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了加强氯法拉滨原料或其制剂的质量控制，提供一种灵敏度高、分析速度快、准确度高的氯法拉滨原料或其制剂中杂质和含量的高效液相色谱法检测方法。具体的技术解决方案如下。1、氯法拉滨原料或其制剂中杂质的高效液相色谱法检测方法，包括配制供试品溶液，按照高效液相色谱法进行检测，其检测器为紫外检测器；色谱条件中固定相用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相采用磷酸盐溶液—甲醇和磷酸盐溶液—乙腈体系；检测波长为210-214nm；理论板数按氯法拉滨峰计算应不低于3000；氯法拉滨峰与各杂质峰的分离度大于1.5。具体操作步骤如下A、取氯法拉滨原料或其制剂，加流动相分别制成每1ml中含0.1～100mg氯法拉滨的供试品溶液和每1ml中含0.1～100ug的对照溶液；所述流动相为磷酸盐溶液—甲醇或乙腈的混合溶液体系；B、以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L磷酸盐溶液(以磷酸调pH至3.0)和甲醇或乙腈的混合溶液体系为流动相，0.01mol/L磷酸盐溶液和甲醇或乙腈的混合比为5-95∶95-5，检测波长为210nm-214nm，理论板数按氯法拉滨峰计算应不低于3000，氯法拉滨峰与各杂质峰的分离度大于1.5；C、取对照溶液5-50ul注入液相色谱仪，调节检测器的灵敏度，使主成分的峰高约为记录仪满量程的10～25％； D、再取上述供试品溶液和对照溶液各5-50ul分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2-5倍；按自身对照法或峰面积归一化法计算杂质。2、氯法拉滨原料或其制剂含量的高效液相色谱法检测方法，包括配制供试品溶液，按照高效液相色谱法进行检测，其检测器为紫外检测器；色谱条件中固定相用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相采用磷酸盐溶液-甲醇和磷酸盐溶液-乙腈体系；检测波长为261nm-265nm；理论板数按氯法拉滨峰计算应不低于3000；氯法拉滨峰与各杂质峰的分离度大于1.5。具体操作步骤如下A、取氯法拉滨原料或其制剂，加流动相分别制成每1ml中含0.05～50mg氯法拉滨的供试品溶液和对照溶液；所述流动相为0.01mol/L磷酸盐溶液和甲醇或乙腈按5-95∶95-5混合的溶液；B、按照高效液相色谱法进行检测，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.01mol/L磷酸盐溶液(以磷酸调pH至3.0)和甲醇为流动相，0.01mol/L磷酸盐溶液和甲醇的混合比为5-95∶95-5，检测波长为261nm-265nm，理论板数按氯法拉滨峰计算应不低于3000；C、取上述供试品溶液和对照溶液各5-50ul分别注入液相色谱仪，记录色谱图。所述流动相为0.01mol/L磷酸二氢铵溶液和甲醇按70∶30混合的溶液。所述流动相为0.01mol/L磷酸二氢铵溶液和乙腈按85∶15混合的溶液。所述流动相为0.01mol/L磷酸二氢铵溶液和甲醇按70∶30混合的溶液。所述流动相为0.01mol/L磷酸二氢铵溶液和乙腈按85∶15混合的溶液。附图说明图1氯法拉滨杂质检测对照溶液HPLC图谱，图2氯法拉滨杂质检测样品溶液HPLC图谱，图3氯法拉滨含量测定样品溶液HPLC图谱。本专利技术方法的建立过程是这样的1、仪器与试剂仪器岛津SPD-10Avp检测器，岛津LC-10ATvp泵及浙江大学N2000色谱工作站。FA1104型电子天平 PHS-3C型精密pH计(上海雷磁仪器有限公司)色谱柱Discovery C18柱，规格250×4.6mm，粒度5um试剂甲醇为MR、乙腈为MR、磷酸二氢铵为AR试剂；蒸馏水自制。2、杂质检测方法的建立(1)波长的选择取氯法拉滨样品及各中间体适量，加流动相使溶解，并稀释成约10μg/ml，在200～400nm范围内对本品进行扫描，由扫描结果可见，本品在212nm及263nm波长处有最大吸收，结合中间体的扫描图谱，我们选择使用212nm波长作为本品杂质检测的波长。(2)流动相的选择以甲醇-水为基本配比，调节甲醇与水的比例使得主峰保留时间适中，再通过加入适当的缓冲盐调节峰形，使得到理想状态。流动相的选择 由上表结果可见，以各pH值的磷酸二氢铵溶液和甲醇(70∶30)作为流动相，考察谱峰的分离情况。在流动相组分为0.01mol/L磷酸二氢铵(pH3.0)-甲醇(70∶30)时，主峰保留时间适宜，峰形好。故选择0.01mol/L磷酸二氢铵(pH3.0)-甲醇(70∶30)作为本品杂质检测的流动相。(3)分离度试验取氯法拉滨合成过程中的中间体以及异构体α、β(即氯法拉滨样品)，加流动相溶解并稀释，制成一定浓度的溶液，作为样品溶液。分别取上述溶液适量混合，摇匀后取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图，考察其分离度。结果中间体及异构体α、β(氯法拉滨)的分离度符合要求。(4)系统适应性及专属性试验①破坏性试验分别称取氯法拉滨样品约10mg或其制剂适量(约含氯法拉滨10mg)，分别置100ml量瓶中，按下述各条件配制供试品。未破坏加流动相溶解并稀释至刻度，常温避光放置4小时备用；酸破坏加0.1mol/L的盐酸溶液2ml，混匀后常温避光放置4小时，4小时后加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，备用；碱破坏加0.1mol/L的氢氧化钠溶液2ml，混匀后常温避光放置4小时，4小时后加0.1mol/L的盐酸溶液2本文档来自技高网...

【技术保护点】
氯法拉滨原料或其制剂中杂质的高效液相色谱法检测方法，包括配制供试品溶液，按照高效液相色谱法进行检测，其特征在于其检测器为紫外检测器；色谱条件中固定相用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相采用磷酸盐溶液－甲醇或磷酸盐溶液－乙腈；检测波长为２１０－２１４ｎｍ；理论板数按氯法拉滨峰计算应不低于３０００；氯法拉滨峰与各杂质峰的分离度大于１．５；　　　　具体操作步骤如下：　　　　Ａ、取氯法拉滨原料或其制剂，加流动相分别制成每１ｍｌ中含０．１～１００ｍｇ氯法拉滨的供试品溶液和每１ｍｌ中含０．１～１００ｕｇ的对照溶液；所述流动相为磷酸盐溶液－甲醇或磷酸盐溶液－乙腈的混合溶液；　　　　Ｂ、以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以０．０１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐溶液和甲醇或乙腈的混合溶液体系为流动相，０．０１ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐溶液－甲醇或磷酸盐溶液－乙腈的混合比为６０－９０∶４０－１０，检测波长为２１０ｎｍ－２１４ｎｍ，理论板数按氯法拉滨峰计算应不低于３０００，氯法拉滨峰与各杂质峰的分离度大于１．５；　　　　Ｃ、取对照溶液５－５０ｕｌ注入液相色谱仪，调节检测器的灵敏度，使主成分的峰高约为记录仪满量程的１０～２５％；　　　　Ｄ、再取上述供试品溶液和对照溶液各５－５０ｕｌ分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的２－５倍；按自身对照法或峰面积归一化法计算杂质。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郭辉，石庆平，崔爱军，
申请(专利权)人：郭辉，
类型：发明
国别省市：34[中国|安徽]