RORCE2基因作为药物靶点在制备Th17细胞相关疾病药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种以RORCE2基因作为药物靶点在制备Th17细胞相关疾病药物中的应用，RORCE2基因的序列如SEQ ID NO.3所示。这种所述Th17细胞相关疾病为Th17细胞过度激活导致的炎症性疾病。如实验性自身免疫性脑炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、哮喘及同种排斥反应。实验显示在敲除RORCE2或者抑制RORCE2的作用时，脾CD4

【技术实现步骤摘要】
RORCE2基因作为药物靶点在制备Th17细胞相关疾病药物中的应用
本专利技术属于医药生物分子
，涉及RORCE2基因作为药物靶点在制备Th17细胞相关疾病药物中的应用。
技术介绍
适应性免疫应答在维持机体免疫自稳和清除病原体等异物等过程中至关重要，它的失调将导致多种自身免疫性或慢性炎症性疾病的发生。实验性自身免疫性脑炎(Experimentalautoimmuneencephalitis，EAE)和胶原诱导关节炎(Collageninducedarthritis，CIA)就是两种因为适应性免疫应答失调导致的小鼠自身免疫病的经典模型。以往认为Thl细胞功能失调是引起这两种自身免疫病的主要原因，但是，研究表明IFN-γ缺陷鼠或IFN-γR缺陷鼠无IFN-γ信号，仍可发生自身免疫病，甚至对自身免疫病更易感，这说明除产生IFN-γ的Th1细胞外，还有另一种(些)Th细胞亚群参与诱导自身免疫病。后来实验证实了体内确实存在一群CD4+T细胞有此功能，这类效应CD4+T细胞分泌的细胞因子以IL-17为主，即被命名为Thl7细胞。它代表一类不同于Th1或Th2的CD4+Th细胞亚群，具有很强的促炎症作用，并与多种自身免疫病的发生和发展有关。因此我们对于Th17细胞的研究将对于人类多种疾病发病机制的阐明及其防治措施的建立起着极其重大的意义。Th17细胞可以产生多种细胞因子，其中最主要的是IL-17，此外还有IL-22、GM-CSF、IL-6和TNF等。IL-17是一种具有促炎作用的细胞因子，其家族包括6个成员(IL-17A-F)，通常所指的IL-17即IL-17A。当IL-17与其受体IL-17R结合并被激活时，导致趋化因子、集落刺激因子和粘附分子的表达或释放，招募和激活炎症细胞尤其是嗜中性粒细胞，从而介导炎症，影响感染、肿瘤和自身免疫的病理过程。许多炎症性疾病，如类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、哮喘及同种排斥反应患者血清和病变组织中均能检测到IL-17。除此以外，IL-17还参与中性粒细胞的增殖、成熟和趋化，对T细胞的活化起协同刺激作用，并能促进树突状细胞的成熟。同时，Th17细胞产生的另一细胞因子IL-22也参与了Th17细胞的效应功能，其与IL-17协同作用，可以增强炎症反应并造成组织损伤。IL-17与IL-22共同表达被认为是自身攻击性(autoaggressive)T细胞和促炎症T细胞的标志。以上研究结果提示，Th17细胞在多种疾病的发病过程中具有重要作用。目前研究发现，RORγt(retinoid-relatedorphanreceptorgammaT)是Th17细胞分化的关键转录因子，其表达依赖于IL-6和TGF-β。RORγt基因在人类基因组中位于1号染色体，在小鼠中位于3号染色体，其编码蛋白为一种DNA结合型转录因子。RORγt在Th17细胞分化中起着非常重要的作用，其可以作为染色体重塑因子(chromatinremodelingfactor)开放IL-17基因座，并使其它因子直接结合到IL-17启动子上。进一步研究发现，在体外，RORγt基因敲除的CD4+T细胞IL-17的表达量急剧减少；而通过基因转染使RORγt过表达的CD4+T细胞不需要外来细胞因子即可表达IL-17。RORγt基因缺陷小鼠Thl7细胞缺陷，小鼠易于感染，EAE发病时间延迟，病情减轻。由此可以看出，RORγt在Th17细胞的增殖、分化和发育中扮演着非常重要的作用。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种以RORCE2基因作为药物靶点在制备Th17细胞相关疾病药物中的应用，还提供RORCE2基因作为靶点在制备小鼠模型中的应用，以及小鼠模型构建的方法。为达到上述目的，本专利技术提供如下技术方案：1、RORCE2基因作为药物靶点在制备Th17细胞相关疾病药物中的应用，所述RORCE2基因的序列如SEQIDNO.3所示。进一步，所述Th17细胞相关疾病为Th17细胞过度激活导致的炎症性疾病。进一步，所述Th17细胞相关疾病为实验性自身免疫性脑炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、哮喘。进一步，所述药物能预防、抵抗或者治疗Th17细胞相关疾病。2、RORCE2基因作为药物靶点在制备Th17细胞相关疾病药物中的应用，所述药物以RORCE2基因为靶点，抑制或者调控RORγt基因表达。所述RORCE2基因的序列如SEQIDNO.3所示。敲除或者抑制RORCE2的作用可明显降低Th17细胞的频率，RORCE2基因可以作为靶点应用在Th17细胞过度激活导致的炎症性疾病，如实验性自身免疫性脑炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、哮喘。3.RORCE2基因作为靶点在制备小鼠模型中的应用，所述RORCE2基因的序列如SEQIDNO.3所示。进一步，所述应用为敲除小鼠RORCE2基因，并对繁殖的子代小鼠进行基因型鉴定，最终得到稳定的纯合系RORCE2基因敲除小鼠。4.一种小鼠模型，敲除小鼠RORCE2基因，并对繁殖的子代小鼠进行基因型鉴定，最终得到稳定的纯合系RORCE2基因敲除小鼠，所述RORCE2基因的序列如SEQIDNO.3所示。进一步，所述小鼠模型的小鼠脾脏CD4+T细胞在体外诱导分化成为Th17细胞的频率低，Th17细胞中RORγt的平均荧光强度下降，以及细胞分泌的IL-17A明显减少；而Th1和Th2的体外分化无变化。5.一种小鼠模型的构建方法，敲除小鼠RORCE2基因，并对繁殖的子代小鼠进行基因型鉴定，最终得到稳定的纯合系RORCE2基因敲除小鼠，所述RORCE2基因的序列如SEQIDNO.3所示。本专利技术的有益效果在于：本专利技术从多角度发现并证明了序列RORCE2对RORγt启动子活性有显著地增强作用，在敲除RORCE2或者抑制RORCE2的作用时，脾CD4+T淋巴细胞中RORγt和IL-17AmRNA的相对表达量都显著降低；且Th17细胞的频率和Th17细胞中RORγt的平均荧光强度明显低于WT小鼠；但并不影响Th1、Th2细胞的分化，也不影响IFN-γ从Th1细胞的分泌、IL-4从Th2细胞的分泌。还进一步发现并证明Sox5可介导RORCE2上3号检测位点(testsite3，TS3)和RORγt启动子之间的相互作用。这对于Th17细胞相关疾病的临床预防和治疗又增加了一个可靠的新的靶点，在预防或治疗上提供新的药物制备方向。本专利技术提供的RORCE2基因敲除的小鼠模型构建方法得到的小鼠模型，其脾CD4+T淋巴细胞中RORγt和IL-17AmRNA的相对表达量都显著降低；且Th17细胞的频率和Th17细胞中RORγt的平均荧光强度明显低于WT小鼠；但并不影响Th1、Th2细胞的分化，也不影响IFN-γ从Th1细胞的分泌、IL-4从Th2细胞的分泌。更进一步在RORCE2-KO小鼠与对照的WT小鼠建立EAE疾病模型中显示RORCE2-KO小鼠发病时间更晚，疾病程度更轻，临床评分更低，HE和LFB本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.RORCE2基因作为药物靶点在制备Th17细胞相关疾病药物中的应用，其特征在于，所述RORCE2基因的序列如SEQ ID NO.3所示。/n

【技术特征摘要】
20200509 CN 20201038727991.RORCE2基因作为药物靶点在制备Th17细胞相关疾病药物中的应用，其特征在于，所述RORCE2基因的序列如SEQIDNO.3所示。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Th17细胞相关疾病为Th17细胞过度激活导致的炎症性疾病。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述Th17细胞相关疾病为实验性自身免疫性脑炎、类风湿性关节炎、多发性硬化症、系统性红斑狼疮、哮喘。


4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物能预防、抵抗或者治疗Th17细胞相关疾病。


5.根据权利要求1-4任一项所述的RORCE2基因作为靶点在制备Th17细胞相关疾病药物中的应用，其特征在于，所述药物以RORCE2基因为靶点，抑制或者调控RORγt基因表达。


6.RORCE2基因作为靶点在制备小鼠模型中的应用，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩超，田易，董惠，卫志远，孙怡，吴玉章，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学，
类型：发明
国别省市：重庆;50