circRNA分子表达元件及表达载体、纯化方法和应用技术

本发明专利技术公开了circRNA分子表达元件及表达载体、纯化方法和应用。所述circRNA分子表达元件，自5'端至3'端包含同源臂1、内含子1、B3序列、多克隆位点序列、CV序列和3'端内含子2、同源臂2。该circRNA分子的表达载体无需利用活细胞，直接将本载体线性化后作为模板，通过体外转录和环化合成circRNA。该纯化方法，可纯化使用circCV‑B3表达载体体外合成的circRNA分子。该表达载体可以产生高纯度的、无外源序列引入的可编码circRNA，且环化效率更高、纯化成本、免疫原性更低。在该表达载体的多克隆位点插入靶基因的核苷酸序列，得到与靶基因对应的特异性circRNA表达分子。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程，具体涉及一种circrna分子表达元件及表达载体、纯化方法和应用。

技术介绍

1、环状rna(circular rna,circrna)的特点是单链共价闭环结构。与典型线性mrna相比，circrna更为稳定，可常温保存，也可低温冷链储存。更为重要的是，circrna具有更低的免疫原性和细胞毒性。因此，人工体外合成的circrna更适合作为核酸药物用于临床治疗和医药应用。由于环状结构，可编码circrna必须引入核糖体进入位点(internal ribosomeentry sites，ires)，以及编码抗原、蛋白或短肽的开放阅读框(open reading frame，orf)。ires-orf元件是人工体外合成可编码蛋白circrna最基本的元件。

2、circrna的人工合成首先涉及环化步骤，目前化学合成法、酶连接法和核酶催化法是最常用的环化方法。其中，以一类内含子(group i intron)代表的核酶自剪切法是效率最高、操作简单以及成本最低的环化方案。该方案利用一类内含子自催化剪切其内含子并连接其外显子的原理本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种circRNA分子表达元件，其特征在于，自5'端至3'端包含同源臂1、内含子1、B3序列、多克隆位点序列、CV序列和3'端内含子2、同源臂2；

2.如权利要求1所述的表达元件，其特征在于，所述5'端内含子1的核苷酸序列为SEQID NO:1，3'内含子2的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。

3.如权利要求1所述的表达元件，其特征在于，所述5'端内含子1的5'端连接有同源臂1，所述3'端内含子2的3'端连接有同源臂2；

4.如权利要求1所述的表达元件，其特征在于，所述CV序列的核苷酸序列为SEQ ID NO:3，所述B3序列的核苷酸序列为SEQ...

【技术特征摘要】

1.一种circrna分子表达元件，其特征在于，自5'端至3'端包含同源臂1、内含子1、b3序列、多克隆位点序列、cv序列和3'端内含子2、同源臂2；

2.如权利要求1所述的表达元件，其特征在于，所述5'端内含子1的核苷酸序列为seqid no:1，3'内含子2的核苷酸序列为seq id no:2。

3.如权利要求1所述的表达元件，其特征在于，所述5'端内含子1的5'端连接有同源臂1，所述3'端内含子2的3'端连接有同源臂2；

4.如权利要求1所述的表达元件，其特征在于，所述cv序列的核苷酸序列为seq id no:3，所述b3序列的核苷酸序列为seq id no:4。

5.如权利要求1所述的表达元件，其特征在于，所述多克隆位点序列的核苷酸序列为seq id no:7。

6.如权利要求1所述的表达元件，其特征在于，所述表达元件的核苷酸序列为seq idn...

【专利技术属性】
技术研发人员：连继勤，牛盾，吴亚冉，
申请(专利权)人：中国人民解放军陆军军医大学，
类型：发明
国别省市：