本发明专利技术公开的食物过敏原特异性ＩｇＧ ＥＬＩＳＡ检测试剂盒，包括已包被的奶类、蛋类、肉类、谷物类、坚果类、水果类、蔬菜类、水产类、豆类食物过敏原蛋白的酶标板、人ＩｇＧ标准液、酶标记抗体、ＴＭＢ底物显色液、样品稀释液、浓缩洗涤液和终止反应液。用于检测人血清中食物过敏原特异性ＩｇＧ抗体浓度，由样品血清吸光度大于ｃｕｔ－ｏｆｆ值的过敏原孔筛查致敏食物过敏原，且从标准曲线计算出样品血清中的特异性ＩｇＧ浓度，定量分级确定过敏反应程度，具有灵敏、快速、简便、稳定的优点，可应用于过敏性疾病的体外临床辅助诊断及科学研究。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及了一种定量检测人血清中食物过敏原特异性IgG的酶联免疫 吸附分析(ELISA)检测试剂盒及其生产方法，筛查确定致敏食物过敏原及过 敏反应程度。
技术介绍
过敏性疾病是现代社会中最常见的一种疾病，它是由广泛存在的过敏原引 发的，我国大约有5-10%的人受过敏原侵扰。过敏反应(allergic reaction)又 称变态反应，过敏原(allergen)又称变应原。过敏反应有两个主要类型由 IgE介导的速发型过敏反应，通常在接触过敏原后短时间立即发生，病症明显； 由IgG及其亚类IgG4介导的迟发型过敏反应，通常在接触过敏原几小时或几 天后才会出现反应症状，有长期疲劳、关节炎、荨麻疹、湿疹、头痛、肠胃功 能失调及其它慢性症状。IgG介导的过敏反应，通常是由食物过敏原引发的， 且患者皮试多呈阴性，迫切需要从众多食物中筛查出引发过敏反应的过敏原， 进而很好地对症预防和治疗(周光炎等译，2002，免疫学，PP323-369,人民卫 生出版社；Sampson HA,1999，Food allergy,partl，J Allergy Clin Immunol，103:717-728)。过敏患者摄入食物过敏原后，体内产生的IgG抗体及其亚类与脱颗粒化的 嗜碱性粒细胞及肥大巨细胞结合，活化互补的递级细胞和组织，引发过敏反应； 在过敏患者的血液中可检测出IgG及其亚类浓度的升高(Brighton WD,1980,Frequency of occurrence of IgG(S-TS),Clin Allergy, 10:97-100)。过敏患 者再次摄入食物过敏原后，提高循环血液中特异性IgG浓度，已被为减轻过敏 反应病症而进行免疫治疗患者的血清IgG浓度的检测多次证实(Kemeny DM et al ,1986,Subclass of IgG in allergic disease, Clim Allergy,16:571-574)。根据近40年来的大量研究，食物过敏原分两大类植物蛋白和动物蛋白。 由它们的结构和功能特性，含过敏原的植物蛋白的是豆科植物、树坚果、谷物、 水果、蔬菜等中的醇溶蛋白的超家族，花生、树坚果、大豆等的种子忙藏蛋白 的杯状蛋白超家族和谷物的a -淀粉酶、蛋白酶抑制剂等植物防卫系统的蛋白 家族(Breiteneder H er al,2004,A classification of plant food allergens, J Allergy Climlmmunol，113:821-830);含过敏原的动物蛋白的来源为哺乳动物的肉及乳蛋白，鸟类、鱼、甲壳动物、软体动物、两栖动物和爬行动物等的肉蛋白，来源广发、丰富；以它们为原料还生产了数不清的"营养健康食品"(Wal JM ，1999,Nahmng,43: sl68-174)，迫切需要体外检测食物过敏原。过敏反应在临床上可以通过皮肤试验以及各种体外检测方法，如放射性免 疫分析(RIA)法、免疫印迹(IS)、免疫沉淀(IP)和酶联免疫吸附分析(ELISA) 法等，结合发病症状等来确定致敏的过敏原(Sampson HA，1999,Food allergy,part2,J Allergy Clinlmmunol，l03:981-989)。 ELISA方法较RIA、 IS 、 IP 等方法安全、简单、经济快速，是世界上当前发展最快且最常用的体外检测致 敏性过敏原及其过敏程度的方法(Yunginger JW er al，2002,J Allergy Clin Immunol, 105:1077-1084)。ELISA试剂盒检测食物中过敏原蛋白所需技术，如过敏原蛋白的提纯方 法，人IgG抗体的制备、纯化，抗人IgG抗体生产提纯，酶标记抗体的制备纯 化等均已成熟(Porstmann T,kiessig ST,1992,Enzyme immunoassay techniques,An overview,J Immunol Methods, 150:5-21)为食物过敏原特异性IgG ELISA检测试 剂盒的商品化生产建立了技术基础，国外也己生产出了商品化体外检测试剂 盒，如Pharmacia公司(www.purduepharma.com)的immuno CAP 100 specific IgG kit,Biomerica公司(www.biomerica.com)的Allerquant IgG food allergy acreening ELISA kit等。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种灵敏度高、特异性强、使用方便、快速地定量 检测人血清中的食物过敏原特异性IgG ELISA检测试剂盒,用以筛查患者致敏 的食物过敏原并确定患者致敏反应的程度。本专利技术的食物过敏原特异性IgG ELISA检测试剂盒，其组成包括已包被的 奶类、蛋类、肉类、谷物类、坚果类、水果类、蔬菜类、水产类、豆类食物过 敏原蛋白的酶标板、人IgG标准液、酶标记抗体、TMB底物显色液、样品稀释液、浓縮洗涤液和终止反应液； 財已包被的奶类食物过敏原蛋白的酶标板包括牛奶、羊奶； 已包被的蛋类食物过敏原蛋白的酶标板包括家禽蛋白、家禽蛋黄； 已包被的肉类食物过敏原蛋白的酶标板包括猪肉、牛肉、羊肉、鸭肉、 鸡肉、鹅肉、火鸡肉、驴肉；已包被的谷物类食物过敏原蛋白的酶标板包括玉米、小麦、燕麦、大麦、荞麦、大米、小米；已包被的坚果类食物过敏原蛋白的酶标板包括杏仁、花生、榛子、腰果、 核桃、开心果、巴西坚果、芝麻；已包被的水果类食物过敏原蛋白的酶标板包括西瓜、菠萝、橙子、芒果、 香蕉、柑桔、胡柚、柠檬、苹果、葡萄、梨、草莓、杉^已包被的蔬菜类食物过敏原蛋白的酶标板包括芹菜、菠菜、洋葱、茄子、 大蒜、辣椒、土豆、西红柿；已包被的水产类食物过敏原蛋白的酶标板包括带鱼、黄鱼、比目鱼、三 文鱼；鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鲢鱼、虾、蟹、蚌、贻贝、牡蛎、黄鳝、鳗鱼；已包被的豆类食物过敏原蛋白的酶标板包括扁豆、蚕豆、黄豆、豌豆；酶标记抗体辣根过氧化物酶标记的抗人IgG单克隆抗体；TMB底物显色液2.08mmol/L 3， 3，， 5， 5'—四甲基联苯胺，12mmol/L 过氧化氢，10mmol/L卩一环糊精，O.lmol/L pH5.0的醋酸缓冲液。样品稀释液1Ommol/L pH7.4-7.6的磷酸盐缓冲液中含1% BSA， 0.05% Tween-20和lmg/L庆大霉素；浓縮洗涤液O.lmol/L pH7.4-7.6的磷酸盐缓冲液中含1%胎牛血清，0.5% Tween-20和20mg/L庆大霉素；终止反应液1.0mol/LH2SO4。本专利技术的食物过敏原特异性IgG ELISA检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤(1) 食物过敏原蛋白的制备将含过敏原蛋白的食物经粉碎、脱脂、提取、SDS-PAGE电泳确证、洗脱、干燥；(2) 酶标记抗体的制备用辣根过氧化物酶(Horseradishperaxidase, HRP) 标记纯化的抗人IgG抗体；(3) 配制人IgG标准液、TMB底物显色液、浓縮洗涤液和终止反应液；(4) 酶标板包被用抗人IgG抗体和食物过敏原蛋白包被酶标板，并封闭。本专利技术的试剂盒的使用方法本文档来自技高网...
【技术保护点】
食物过敏原特异性ＩｇＧ ＥＬＩＳＡ检测试剂盒，其特征在于该试剂盒组成包括：已包被的奶类、蛋类、肉类、谷物类、坚果类、水果类、蔬菜类、水产类、豆类食物过敏原蛋白的酶标板、人ＩｇＧ 标准液、酶标记抗体、ＴＭＢ底物显色液、样品稀释液、浓缩洗涤液和终止反应液； 其中： 已包被的奶类食物过敏原蛋白的酶标板包括：牛奶、羊奶； 已包被的蛋类食物过敏原蛋白的酶标板包括：家禽蛋白、家禽蛋黄； 已包被的肉类食物过敏原蛋白的酶标板包括：猪肉、牛肉、羊肉、鸭肉、鸡肉、鹅肉、火鸡肉、驴肉； 已包被的谷物类食物过敏原蛋白的酶标板包括：玉米、小麦、燕麦、大麦、荞麦、大米、小米； 已包被的坚果类食物过敏原蛋白的酶标板包括：杏仁、花生、榛子、腰果、核桃、开心果、巴西坚果、芝麻； 已包被的水果类食物过敏原蛋白的酶标板包括：西瓜、菠萝、橙子、芒果、香蕉、柑桔、胡柚、柠檬、苹果、葡萄、梨、草莓、桃； 已包被的蔬菜类食物过敏原蛋白的酶标板包括：芹菜、菠菜、洋葱、茄子、大蒜、辣椒、土豆、西红柿； 已包被的水产类食物过敏原蛋白的酶标板包括：带鱼、黄鱼、比目鱼、三文鱼；鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鲢鱼、虾、蟹、蚌、贻贝、牡蛎、黄鳝、鳗鱼； 已包被的豆类食物过敏原蛋白的酶标板包括：扁豆、蚕豆、黄豆、豌豆； 酶标记抗体：辣根过氧化物酶标记的抗人ＩｇＧ单克隆抗体； ＴＭＢ底物显色液：２．０８ｍｍｏｌ／Ｌ３，３’，５，５’－四甲基联苯胺，１２ｍｍｏｌ／Ｌ过氧化氢，１０ｍｍｏｌ／Ｌβ－环糊精，０．１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ５．０的醋酸缓冲液。 样品稀释液：１０ｍｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．４－７．６的磷酸盐缓冲液中含１％ＢＳＡ，０．０５％Ｔｗｅｅｎ－２０和１ｍｇ／Ｌ庆大霉素； 浓缩洗涤液：０．１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．４－７．６的磷酸盐缓冲液中含１％胎牛血清，０．５％Ｔｗｅｅｎ－２０和２０ｍｇ／Ｌ庆大霉素； 终止反应液：１．０ｍｏｌ／Ｌ Ｈ↓［２］ＳＯ↓［４］。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：吴善东，
申请(专利权)人：杭州浙大生科生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]
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