本发明专利技术涉及通式Ｒ－（Ｘａａ）↓［ｎ］－Ｐｒｏ－Ｘ－Ｇｌｙ－Ｓ－Ｙ－Ｚ－Ｇｌｙ－（Ｘａａ）↓［ｍ］－Ｒ１（Ⅰ）的含硫的酯肽类化合物作为底物在确定ＡＤＡＭＴＳ蛋白水解酶的活性中的用途，和发现ＡＤＡＭＴＳ蛋白水解酶调节剂，特别是抑制剂的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含硫的酯肽类化合物在确定ADAMTS蛋白水解酶活性中的用途本专利技术涉及通式为R-(XaaVPro陽X-Gly画S-Y画Z-Gly國(Xaa)m-Rl (I)的含 硫的酯肽类化合物(thiopeptolide)作为底物用于确定ADAM-TS蛋白水解 酶活性中的用途，并且涉及寻找ADAM-TS蛋白7jC解酶的调节剂，尤其是 抑制剂的方法。完整的关节软骨基质是人和动物体所有关节发挥功能具有决定意义的 先决条件，关节软骨的损伤可以导致诸如骨关节病(骨关节炎)和风湿病等 关节炎性疾病，这些疾病以患病的人或动物出现机能障碍且最终丧失活动 能力为特征。在以受损基质降解为特征的其它疾病中，还必须包括多种形式的癌症， 尤其是肿瘤的转移。已知基质金属蛋白酶(MMP)参与了软骨中的聚集蛋白聚糖和胶原的 降解。这些基质金属蛋白酶包^ilf"如基质蛋白酶类，其包含从MMP-1、 2 等直到MMP-16所有已知MMP。 另一类，称为ADAM-TS-家族的蛋白 水解酶(Nagase，H.等人。(2003)， Arthritis Research Therapy, 5， 94-103)， 同样在组织基质的降解中起到至关重要的作用，导致软骨基质的损伤。这 些蛋白水解酶的活性，特别是ADAM-TS 1、 ADAM-TS 4和ADAM-TS 5 (也称为"可聚蛋白聚糖")，是以受损的基质降解为特征的疾病(例如骨关 节病、风湿病和癌症)的病因。ADAM-TS能够特别切割蛋白聚糖，还能切 割诸如乙酰透明质酸或胶原等其它基质组分。此外，ADAM-TS 1、 4、 5 和11，还有ADAM-TS 13对炎症过程、血管发生、细胞迁移和血液凝固(或 凝血)至关重要(Apte， S. S. (2004)， The International Journal of Biochemistry & Cell Biology, 36， 981-985)。因此， 一方面能够在有患病风险或已经患病的组织(例如软骨组织或血液中)检测与疾病有关的蛋白水解酶的酶促活性是药物研究的重要任务。 而另一方面，开发能够抑制单个、多种或者所有相关蛋白水解酶的药物制 剂有特别重要的意义。通过将相应的蛋白水解酶与适当的高分子量基质组分(例如蛋白聚糖 或胶源)一起孵育，并且测量降解产物的形成，可以在体外测量有关蛋白水 解酶的酶(蛋白水解)活性。本领域技术人员可以使用通常需要复杂操作的多种方法(例如特异性 切割位点的抗体识别和质镨分析研究)用于分离和定量异质的降解产物，也 就是说，例如胶原片段和蛋白质片段.先前已有例如^f吏用重组底物确定ADAM-TS 4活性的描述，所述重组 底物包含天然聚集蛋白聚糖的球间结构域的重要结构组分。在COS细胞 中表达该分子量为72千道尔顿的重组聚集蛋白聚糖。确定可聚蛋白聚糖的 活性，在除了使用高分子量聚集蛋白聚糖分子之外，还需要更多的复杂步 骤，例如结构元件CD5信号序列、Ml单克隆抗体决定的FLAG表位、人 IgGl的铰链区、所述重组底物的cDNA，包括其载体，如在EP 0785 274 和在H6rber， Chr等人.(2000) Matrix Biology, 19， 533-543中所述。聚集蛋白聚糖分子短片段的用途也已经被公开。WO 00/05256报道这 些肽片段可能由20-40个氨基酸结构单元组成。但特别不利的是，聚集蛋 白聚糖不能转化含有少于20个氨基酸的肽。这点已可以得到证实(见实验 部分)。为确定基质蛋白酶家族中的蛋白水解酶，根据以前的技术，将低分子 量分子作为蛋白水解酶的底物切割以确定酶(蛋白水解)活性，所述^f氐分子 量分子能够较容易通过人工合成而获得，由于这些底物的特定性质，可通 过切割而释放,例如一般在可见和紫外光波长范围内的可定量的光学信号。一个众所周知的实例是(7-甲氧香豆素-4-基)乙酰 -Pro-Leu-Gly-Leu-3-(2，，4'-二硝基苯基)-L-2，3-二氨基丙酰-Ala-Arg-NH2 (Bachem， Heidelberg,德国)，由Knight, C. G.等人在(1992) FEBS， 296， 263-266中描述，其可以被特定的基质金属蛋白酶切割，并且因此释放可以用于计算酶活性的可测量的荧光信号。因此已经可以证实，应用蛋白水解酶MMP-3和MMP-8转化(7-甲氧香豆素_4-基)乙酰 - 1*0誦!^1!-0^画1^11画3國(2'，4'-二硝基苯基)丄画2，3-二#^丙酰-入13^^陽]\112是 可行的(见实^分)> 应用MMP-3和MMP-8转化此类型的许多其它底物 也是可行的。已经揭示了胶原酶和膜相关的基质金属蛋白酶可以转化来源于^s琉的 酯肽类化合物类物质的某些底物，参见EP 0149593和US 2002/0142362。 但是，N端至可聚蛋白聚糖切割位点间短至16氨基酸的肽不再发生可聚蛋 白聚糖切割。一些实验中还证实了更短链的肽，即使其包含Glu-Ala序列，也可能不 能被ADAM-TS切割。相反，已经发现其它蛋白水解酶家族的成员，例如 基质蛋白酶或组织蛋白酶，可以切割寡肽。这些实验中寡肽的应用特别受欢迎，因为它们可以通过化学合成容易 地得到。寡肽的另一个优势是可以对单独的肽结构单元进行化学修饰，例 如，也可以将其连接到那些发色团上，其允许在肽切割后可以直接或间接 进行光镨测定，例如比色法。相应地，通过比较在加入相应的蛋白水解酶抑制剂后的蛋白水解活性 与在加抑制剂之前测量的活性，可以容易地确定酶抑制剂或激活剂的效应。它的一个实例为含石危的酯肽类化合物R-Pro-X-Gly-S-Y-Z-Gly-Rl (EP 0149593)，其可以被脊推动物胶原酶切割；和乙耽-脯氨酰-亮氨酰-甘 氨酰-2-巯基4-甲基-戊酰基卜亮氨酰-甘氨酰-乙基酯(US 2002/0142362),其 可以被某些基质蛋白酶切割，从而形成能够通过已知方法(如与DTNB反 应)定量的游离的SH基团。已经发现，根据本专利技术的通式(I)的含硫的酯肽类化合物 R-(Xaa)n-Pro國X-Gly誦S-Y國Z画Gly誦(Xaa)nrRl可以被ADAM國TS蛋白水解酶 (特别是ADAM-TS1、 ADAM-TS4、 ADAM-TS5、 ADAM-TS11和/或 ADAM-TS13,尤其是ADAM-TS1、 ADAM-TS4或ADAM-TS5)切割，并 且因此能够容易地经由游离SH基团得到检测。因为现有技术报道，包含少于16个^J^酸单位的肽不能被ADAM-TS切割，这更加令人惊奇。因此，本专利技术一方面涉及以下通式(I)的含硫的酯肽类化合物或其盐作为ADAM-TS蛋白7jc解酶底物的用途，R-(Xaa)n-Pro-X-Gly-S誦Y-Z-Gly-(Xaa)m-Rl (I)，其中R是H或N-保护基团，优选a基团，特别是d-Cs-烷基的羧基基团，尤其是CrQr烷基的g基团，特别优选乙g， Xaa-任何天然存在的氨基酸，n、 m-相同或不同的0-2415之间的整数，优选0-35，特别是0-14，尤 其是O-ll，且最特别优选等于O,X-亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸， Z-亮氨酸、异亮氨酸、苯本文档来自技高网...
【技术保护点】
通式为Ｒ－（Ｘａａ）↓［ｎ］－Ｐｒｏ－Ｘ－Ｇｌｙ－Ｓ－Ｙ－Ｚ－Ｇｌｙ－（Ｘａａ）↓［ｍ］－Ｒ１（Ⅰ）的含硫的酯肽类化合物或其盐作为ＡＤＡＭ－ＴＳ蛋白水解酶底物的用途， 其中Ｒ是Ｈ或Ｎ－保护基团，优选羧基基团，特别是Ｃ↓［１］－Ｃ↓［５］－烷基的羧基基团，尤其是Ｃ↓［１］－Ｃ↓［３］－烷基的羧基基团，特别优选乙酰基， Ｘａａ是任何氨基酸， ｎ、ｍ是相同或不同的从０－２４１５的整数，优选从０－３５，特别是从０－１４， 尤其是从０－１１，且最特别优选等于０， Ｘ是亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸， Ｚ是亮氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸， Ｒ↓［１］是末端酰胺、羧基或酯基团，优选Ｃ↓［１］－Ｃ↓［５］－烷基的上述基团，尤其是 Ｃ↓［１］－Ｃ↓［３］－烷基的上述基团，特别是乙基酯， Ｓ－Ｙ＝Ｒ↓［２］－＊Ｈ－ＣＯＯ－， 其中Ｒ↓［２］是天然存在的氨基酸的侧链，特别是 －ＣＨ↓［２］ＣＨ（ＣＨ↓［３］）↓［２］， －ＣＨ（ＣＨ↓［３］）Ｃ↓［２］Ｈ↓［５］， －ＣＨ↓［２］Ｃ↓［６］Ｈ↓［５］， －ＣＨ（ＣＨ↓［３］）↓［２］，或 －ＣＨ↓［３］。...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：KU魏特曼，V耶斯克，
申请(专利权)人：塞诺菲安万特股份有限公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]
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