位点特异性偶联一个或多个肼基烟酰胺（HYNIC）部分而标记的白细胞介素-8及其在感染和炎症的诊断中的用途制造技术

白细胞介素－８或其类似物或衍生物，其经一个或多个肼基烟酰胺（ＨＹＮＩＣ）部分而标记，所述肼基烟酰胺（ＨＹＮＩＣ）部分位点特异性地偶联到一个或５个更多内部赖氨酸和／或Ｎ－末端氨基酸，用于感染和炎症的诊断。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】位点特异性偶联一个或多个肼基烟酰胺(HYNIC)部分而标记的白细胞介 素-8及其在感染和炎症的诊断中的用途本专利技术涉及新的化合物，其经 一 个或多个肼基烟酰胺 (hydrazinonicotinamide, HYNIC)部分标记，所述肼基烟酰胺部分选择性地偶 联(conjugate)到白细胞介素-8(IL-8)或其类似物或衍生物的N-末端氨基酸和/ 或一个或多个内部赖氨酸(internal lysine)。急性、亚急性和慢性感染和炎症的位置的闪烁成像检测是临床实践中的 挑战性难题，因为它对于患有传染性或炎症性疾病的患者的治疗具有重要意 义。为了允许临床医师快速地开始最合适的治疗，这些患者中炎症性病灶的 充分描绘具有临床的重要性。如果临床史和身体检查无法决定的，临床医师 可以选择几种诊断形式来确定疾病的位置、程度和严重度。新的高敏感放射 性研究如石兹共振成像和螺旋计算机化断层显象(spiral computerized tomography)能够定位相对小的病灶异常。然而，这些放射学的方法依赖形态 变化。因而它们在感染的早期阶段是较不精确的，并且对治愈的感染或手术 后(瘢痕组织)不能区别活动进程和解剖学变化。在核医学中，注射放射性标记的化合物一放射性药物，并使用专用的Y 照相机显现整个身体的放射性的分布。闪烁成像图像不取决于形态变化，但 是基于组织中的物理化学过程。因而，当形态变化还未显现时，闪烁成像技 术也可以显现早期阶段的传染性病灶。此外，闪烁成像是整个身体扫描的极 好的非侵入性方法，其可以确定整个身体的传染性或炎症性疾病的程度。人类IL-8是小的趋化性蛋白，与高亲和性与嗜中性细胞上的受体结合。 有两种天然存在的人类IL-8同工型(isoform)。最丰富的形式是单核细胞产生 的72氨基酸变体。IL-8的77氨基酸变体由内皮细胞产生，在N-末端延伸 了 5个氨基酸。在吸引和活化嗜中性细胞方面，较短的形式比较长的形式更 加有效，但两种形式在纳摩尔浓度下都是活性的。早先，仅IL-8的72氨基 酸同工型^皮用于感染和炎症成像方面的临床前和临床研究。放射性标记的 IL-8成像炎症的效果由Hay等首 次报告。在大鼠中角叉菜胶诱导的无菌炎症中，经由氯胺-T法放射性碘化的IL-8的摄取在注射后1-3小时达到峰值，此后下降。在8位糖尿病患者中的 初步研究中，这些受试者显示了 1231-11^8可以显现活性足部感染。标记方法看起来对放射性碘化的IL-8的体内生物分布具有主要影响。经 Bolton-Hunter方法标记的IL-8的闪烁成〗象特征明显地优于经非水溶性石典化 试剂(iodogen)法标记的IL-8，尽管具有相似的体外细胞结合特征。这种IL-8制品的比活 性是相对低的；123I-IL-8的成像剂量(25jag/kg)引起外周白细胞计数短暂降低 到45%，随后是几个小时的白细胞增多(注射前水平的170%)。近来，描述了使用HYNIC作为螯合剂的99mTc标记的IL-8制品的开发 。这种制品在兔的四种不同的感染和炎症才莫型中显示了感 染成像的极好的特征。在患有大肠杆菌(E.coli)诱导的肌肉内感染的兔中，脓 肺中"mTc标记的IL-8的摄取是快速和高度的。此外，99mTc标记的IL-8显 示了从非目标组织的显著的快速清除。在注射后6小时，脓肺对肌肉比例超 过200。在患有化学诱导的急性结肠炎的兔中，在注射均用"""Tc标记的IL-8或 纯化的粒细胞之后，炎性病变被闪烁成像地显现。在注射后数小时内，99mTc 标记的IL-8能充分评估炎性结肠。在结肠中炎症病灶中，，""^Tc标记的IL-8 的完全摄取比99mTc标记的粒细胞高得多。在第三项研究中，在兔的急性骨髓炎的实—验^i型中评估了 "m丁c标记的 IL-8的性能。结果与使用常规的和公认的试剂'"In-粒细胞、6"Ga-柠檬酸盐 和衡Tc-MDP(MDP-亚曱基二磷酸盐)获得的那些进行比较。在这种骨髓炎兔 模型中，""^c-IL-8清楚地描绘了骨髓炎病变。虽然"mTc-IL-8在骨髓炎区域 中的完全摄取比用"Ga-柠檬酸盐和""Tc-MDP获得的更低，但目标对背景 比例明显较高。最后，测试了 99mTc标记的IL-8在三个实验兔模型中成像肺部感染的能 力免疫削弱兔的曲霉病、免疫活性兔的肺炎球菌(格兰氏阳性)肺炎和大肠杆菌(五.co/^诱导的(革兰氏阴性)肺炎。99mTc-IL-8允许在肺部感染的三种实验 模型的每一种中肺部感染的位置和程度的早期的(注射2小时内)和极好的可 视化。在感染病灶中99mTc-IL-8的摄取一般是高的，在大肠杆菌C&co^模型 中，感染病灶中的摄取甚至超过主要的清除器官肾脏中的摄取。IL-8是促炎趋化细胞因子。对于闪烁成像目的，要给药的蛋白剂量应当 低于产生副作用的水平。显示的是，具有高比放射性(80MBq/吗)和高体外稳 定性的制品可以在使用烟酸作为共配体时制备。要给药的蛋白剂量低至70 ng/kg体重。这这种低蛋白剂量下，在人类系统中副作用不是预期的。在患 有传染性(infectous)和炎性疾病的患者中使用99mTc-IL-8的初步结果表明， 99mTc-IL-8确实可以在这些剂量水平安全地施用。99mTc-IL-8具有作为感染显象剂的良好特征在目标组织中的快速蓄积和 从血液和非目标组织的快速清除。活性主要经由肾清除，这是相对于肝脏清 除的优势。在肝脏和肠中的高活性将使得这种试剂不适合于腹部的成像。与用于感染成像的两种最常用放射性药物"Ga-柠檬酸盐和放射性标记 的白细胞相比，99mTc-IL-8提供了的几个优点。放射性核素99mTc-IL-8优于 67Ga，因为它基本上理想的物理性质(短半衰期、理想的能量和低辐射负荷)、 它的成本-有效性和一般可用性。67Ga具有更长的物理半衰期和高能Y放 射，引起高放射吸收剂量并产生较低分辨率的图像。 一般地，"Ga-柠檬酸盐 显示了相对緩慢的药物动力学。因此，放射性药物的注射和成像之间需要很 长间隔。 一般地，在注射后48和72小时之间进行67Ga成像。在使用99mTc-IL-8 给兔成像中，注射和成像之间2小时的间隔是足够的。与放射性标记的白细胞相比，99mTc-IL-8的制备是容易和快速的，在30 分钟内准备好并且不需要进一步纯化。mIn或99mTc的放射性标记的白细胞 的制备晃fr烦的、耗时的，并且在粒细胞减少患者中是不可能的。从患者采 集血液、纯化白细胞和标记这些细胞的过程需要受训的技师花费大约3小时。 细胞应当谨慎地操作以便在再注射时保持它们迁移到炎症区域的能力。此 夕卜，处理潜在地污染的血液的需要可能导致血液携带的病原体如HIV的传播 并且对工作人员和患者存在严重风险。用99mTc-IL-8体内标记白细胞的便利 方法反映了体外标记的传统方法，具有以上详述的新方法的所有益处。在迄今为止使用HYNIC作为^Tc螯合基团的进行的和公开的研究中， 一个或多个HYNIC基团被随机连接到IL-8分子的伯氨基(primary amino)。IL-8含有1个cc-氨基(N-末端)和9个s -氨基(赖氨酸侧链)。如果化学上修饰 肽的活性部位，IL-8的受体结合亲和性可能被降本文档来自技高网...

【技术保护点】
白细胞介素－８或其类似物或衍生物，其经一个或多个肼基烟酰胺（ＨＹＮＩＣ）部分而标记，所述肼基烟酰胺（ＨＹＮＩＣ）部分位点特异性地偶联到一个或多个内部赖氨酸和／或Ｎ－末端氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：休布伦南，奥托博尔曼，
申请(专利权)人：斯蒂克廷凯瑟利科大学，
类型：发明
国别省市：NL[荷兰]