双特异性抗体制造技术

本发明专利技术解决的问题是提供用于预防自身免疫性疾病、抑制自身免疫性疾病的症状进展或复发和/或治疗自身免疫性疾病的新药剂。本发明专利技术的发明专利技术人已经进行了认真的研究，并且专注于PD‑1/CD3双特异性抗体作为解决此类问题的物质。此外，发明专利技术人已经证实该物质可以是可以减少不良输注反应或称为细胞因子释放综合征的不良反应的发生的配制剂。他们证实了双特异性抗体具有允许PD‑1和作为其配体的PD‑L1之间的相互作用的特征，并发现此类特征有助于其作用的增强或持续时间。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双特异性抗体
本专利技术涉及能够分别与PD-1和CD3特异性结合的双特异性抗体(以下，其缩写为“PD-1/CD3双特异性抗体”)，以及含有该双特异性抗体作为有效成分的药物组合物，及其药物治疗用途。
技术介绍
PD-1是属于免疫球蛋白家族的免疫抑制受体，并且是具有抑制通过抗原受体的刺激而活化的T细胞的免疫激活信号的功能的分子。从对PD-1敲除小鼠等的分析，已知PD-1信号在抑制自身免疫性疾病如自身免疫性扩张型心肌病、狼疮样综合征、自身免疫性脑脊髓炎、系统性红斑狼疮、移植物抗宿主病、I型糖尿病和类风湿关节炎中起重要作用。因此，指出的是，增强PD-1信号的试剂可以是自身免疫性疾病的预防或治疗剂。之前，已知识别PD-1的双特异性抗体是增强PD-1信号的试剂(专利参考文献1至3)。双特异性抗体由通过遗传工程而彼此连接的识别作为T细胞受体复合物成员的CD3的抗体的抗原识别位点和识别PD-1的抗体的抗原识别位点组成。双特异性抗体具有通过增加将PD-1带到T细胞受体复合物附近的频率来增强PD-1针对T细胞受体复合物的抑制信号的作用。此外，专利文献还指出，PD-1双特异性抗体可以用于预防或治疗自身免疫性疾病。顺便提及，在蛋白质配制剂中，已经关注施用后立即发生的称为输注反应或细胞因子释放综合征的不良反应的表达。需要减少或抑制此类反应的配制剂。在本专利技术的PD-1/CD3双特异性抗体中，充分降低了被认为是上述不良反应的原因的施用后的细胞因子产生刺激。因此，PD-1/CD3双特异性抗体有望成为抑制相关不良反应的表达的药物。迄今尚未报道具有此类特征的双特异性抗体。引文列表专利参考文献专利参考文献1：国际公开号WO2003/011911专利参考文献2：国际公开号WO2004/072286专利参考文献3：国际公开号WO2013/022091
技术实现思路
技术问题本专利技术的目的是提供一种用于预防自身免疫性疾病、抑制自身免疫性疾病的症状进展或复发和/或治疗自身免疫性疾病等的新药剂。问题的解决方案本专利技术的专利技术人已经进行了认真的研究，并且专注于本专利技术的PD-1/CD3双特异性抗体作为能够解决上述问题的试剂。本专利技术人进一步证实了PD-1/CD3双特异性抗体可以是减少称为输注反应或细胞因子释放综合征的反应的表达的试剂，并已经完成了本专利技术。此外，本专利技术的专利技术人已经发现，PD-1/CD3双特异性抗体具有允许PD-1和作为其配体的PD-L1之间的相互作用的特征，并发现此类特征有助于增强或维持PD-1/CD3双特异性抗体的作用。也就是说，本专利技术涉及以下：[1]PD-1/CD3双特异性抗体或其抗体片段，其具有与PD-1特异性结合的第一臂和与CD3特异性结合的第二臂，其中与PD-1特异性结合的第一臂含有选自以下的任一种VH：(A)重链可变区(以下，“重链可变区”可以缩写为“VH”)，其具有(a)包含SEQIDNo.6中所示的氨基酸序列的重链可变区的互补决定区1(以下，“重链可变区的互补决定区1”可以缩写为“VH-CDR1”)；(b)包含SEQIDNo.7中所示的氨基酸序列的重链可变区的互补决定区2(以下，“重链可变区的互补决定区2”可以缩写为“VH-CDR2”)；和(c)包含SEQIDNo.8中所示的氨基酸序列的重链可变区的互补决定区3(以下，“重链可变区的互补决定区3”可以缩写为“VH-CDR3”)；(B)VH，其具有(a)包含SEQIDNo.9中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；(b)包含SEQIDNo.10中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和(c)包含SEQIDNo.11中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；(C)VH，其具有(a)包含SEQIDNo.12中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；(b)包含SEQIDNo.13中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和(c)包含SEQIDNo.14中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；(D)VH，其具有(a)包含SEQIDNo.15中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；(b)包含SEQIDNo.16中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和(c)包含SEQIDNo.17中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和(E)VH，其具有(a)包含SEQIDNo.18中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；(b)包含SEQIDNo.19中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和(c)包含SEQIDNo.20中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；并且其中与CD3特异性结合的第二臂含有VH，其具有(a)包含SEQIDNo.37中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；(b)包含SEQIDNo.38中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和(c)包含SEQIDNo.39中所示的氨基酸序列的VH-CDR3。[2]根据前述项[1]的PD-1/CD3双特异性抗体或其抗体片段，其中在选自与PD-1特异性结合的第一臂中的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3的任何一个或多个VH-CDR中，一个至五个任意氨基酸残基可以分别用其他氨基酸(优选其保守氨基酸)取代；和/或在选自与CD3特异性结合的第二臂中的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3的任何一个或多个VH-CDR中，一个至五个任意氨基酸残基可以分别用其他氨基酸(优选其保守氨基酸)取代。[3]根据前述项[1]或[2]的PD-1/CD3双特异性抗体或其抗体片段，其中(i)与PD-1特异性结合的第一臂的VH具有：(a)包含SEQIDNo.6中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，(b)包含SEQIDNo.7中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和(c)包含SEQIDNo.8中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；并且(ii)与CD3特异性结合的第二臂的VH具有：(a)包含SEQIDNo.37中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，(b)包含SEQIDNo.38中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和(c)包含SEQIDNo.39中所示的氨基酸序列的VH-CDR3。[4]根据前述项[1]或[2]的PD-1/CD3双特异性抗体或其抗体片段，其中(i)与PD-1特异性结合的第一臂的VH具有：(a)包含SEQIDNo.9中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，(b)包含SEQIDNo.10中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和(c)包含SEQIDNo.11中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；并且(ii)与CD3特异性结合的第二臂的VH具有：(a)包含SEQIDNo.37中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，(b)包含SEQIDNo.38中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和(c)包含SEQIDNo.39中所示的氨基酸序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其包含与PD-1特异性结合的第一臂和与CD3特异性结合的第二臂，其中/n所述与PD-1特异性结合的第一臂包含选自以下的任一种VH：/n(A)VH，其具有/n(a)包含SEQ ID No.6中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；/n(b)包含SEQ ID No.7中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和/n(c)包含SEQ ID No.8中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；/n(B)VH，其具有/n(a)包含SEQ ID No.9中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；/n(b)包含SEQ ID No.10中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和/n(c)包含SEQ ID No.11中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；/n(C)VH，其具有/n(a)包含SEQ ID No.12中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；/n(b)包含SEQ ID No.13中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和/n(c)包含SEQ ID No.14中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；/n(D)VH，其具有/n(a)包含SEQ ID No.15中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；/n(b)包含SEQ ID No.16中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和/n(c)包含SEQ ID No.17中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和/n(E)VH，其具有/n(a)包含SEQ ID No.18中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；/n(b)包含SEQ ID No.19中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和/n(c)包含SEQ ID No.20中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和/或/n(F)VL，其具有/n(a)包含SEQ ID No.26中所示的氨基酸序列的VL-CDR1；/n(b)包含SEQ ID No.27中所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和/n(c)包含SEQ ID No.28中所示的氨基酸序列的VL-CDR3；并且/n其中所述与CD3特异性结合的第二臂包含：/n(A)VH，其具有/n(a)包含SEQ ID No.37中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；/n(b)包含SEQ ID No.38中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和/n(c)包含SEQ ID No.39中所示的氨基酸序列的VH-CDR3，和/或/n(B)VL，其具有/n(a)包含SEQ ID No.26中所示的氨基酸序列的VL-CDR1；/n(b)包含SEQ ID No.27中所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和/n(c)包含SEQ ID No.28中所示的氨基酸序列的VL-CDR3。/n...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180209 JP 2018-021498;20180816 JP 2018-1531491.分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其包含与PD-1特异性结合的第一臂和与CD3特异性结合的第二臂，其中
所述与PD-1特异性结合的第一臂包含选自以下的任一种VH：
(A)VH，其具有
(a)包含SEQIDNo.6中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；
(b)包含SEQIDNo.7中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和
(c)包含SEQIDNo.8中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；
(B)VH，其具有
(a)包含SEQIDNo.9中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；
(b)包含SEQIDNo.10中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和
(c)包含SEQIDNo.11中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；
(C)VH，其具有
(a)包含SEQIDNo.12中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；
(b)包含SEQIDNo.13中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和
(c)包含SEQIDNo.14中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；
(D)VH，其具有
(a)包含SEQIDNo.15中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；
(b)包含SEQIDNo.16中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和
(c)包含SEQIDNo.17中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和
(E)VH，其具有
(a)包含SEQIDNo.18中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；
(b)包含SEQIDNo.19中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和
(c)包含SEQIDNo.20中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；和/或
(F)VL，其具有
(a)包含SEQIDNo.26中所示的氨基酸序列的VL-CDR1；
(b)包含SEQIDNo.27中所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和
(c)包含SEQIDNo.28中所示的氨基酸序列的VL-CDR3；并且
其中所述与CD3特异性结合的第二臂包含：
(A)VH，其具有
(a)包含SEQIDNo.37中所示的氨基酸序列的VH-CDR1；
(b)包含SEQIDNo.38中所示的氨基酸序列的VH-CDR2；和
(c)包含SEQIDNo.39中所示的氨基酸序列的VH-CDR3，和/或
(B)VL，其具有
(a)包含SEQIDNo.26中所示的氨基酸序列的VL-CDR1；
(b)包含SEQIDNo.27中所示的氨基酸序列的VL-CDR2；和
(c)包含SEQIDNo.28中所示的氨基酸序列的VL-CDR3。


2.根据权利要求1的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中在选自所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH中的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3的任何一个或多个CDR中，一个至五个任意氨基酸残基可以分别用其保守氨基酸取代；和/或在选自所述与CD3特异性结合的第二臂的VH中的VH-CDR1、VH-CDR2和VH-CDR3的任何一个或多个CDR中，一个至五个任意氨基酸残基可以用其保守氨基酸取代。


3.根据权利要求1或2的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中
(i)所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH具有：
(a)所述包含SEQIDNo.6中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，
(b)所述包含SEQIDNo.7中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和
(c)所述包含SEQIDNo.8中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；并且
(ii)所述与CD3特异性结合的第二臂的VH具有：
(a)所述包含SEQIDNo.37中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，
(b)所述包含SEQIDNo.38中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和
(c)所述包含SEQIDNo.39中所示的氨基酸序列的VH-CDR3。


4.根据权利要求1或2的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中
(i)所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH具有：
(a)所述包含SEQIDNo.9中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，
(b)所述包含SEQIDNo.10中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和
(c)所述包含SEQIDNo.11中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；并且
(ii)所述与CD3特异性结合的第二臂的VH具有：
(a)所述包含SEQIDNo.37中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，
(b)所述包含SEQIDNo.38中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和
(c)所述包含SEQIDNo.39中所示的氨基酸序列的VH-CDR3。


5.根据权利要求1或2的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中
(i)所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH具有：
(a)所述包含SEQIDNo.12中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，
(b)所述包含SEQIDNo.13中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和
(c)所述包含SEQIDNo.14中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；并且
(ii)所述与CD3特异性结合的第二臂的VH具有：
(a)所述包含SEQIDNo.37中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，
(b)所述包含SEQIDNo.38中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和
(c)所述包含SEQIDNo.39中所示的氨基酸序列的VH-CDR3。


6.根据权利要求1或2的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中
(i)所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH具有：
(a)所述包含SEQIDNo.15中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，
(b)所述包含SEQIDNo.16中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和
(c)所述包含SEQIDNo.17中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；并且
(ii)所述与CD3特异性结合的第二臂的VH具有：
(a)所述包含SEQIDNo.37中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，
(b)所述包含SEQIDNo.38中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和
(c)所述包含SEQIDNo.39中所示的氨基酸序列的VH-CDR3。


7.根据权利要求1或2的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中
(i)所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH具有：
(a)所述包含SEQIDNo.18中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，
(b)所述包含SEQIDNo.19中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和
(c)所述包含SEQIDNo.20中所示的氨基酸序列的VH-CDR3；并且
(ii)所述与CD3特异性结合的第二臂的VH具有：
(a)所述包含SEQIDNo.37中所示的氨基酸序列的VH-CDR1，
(b)所述包含SEQIDNo.38中所示的氨基酸序列的VH-CDR2，和
(c)所述包含SEQIDNo.39中所示的氨基酸序列的VH-CDR3。


8.根据权利要求1至7中任一项的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH的FR1、FR2和FR3区分别对应于由具有体细胞突变的种系V基因IGHV7-4-1编码的氨基酸序列，而框架4区包含由具有体细胞突变的种系J基因JH6c编码的氨基酸序列(排除VH-CDR3区中包括的氨基酸序列)。


9.根据权利要求1至8中任一项的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH包含选自SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.4和SEQIDNo.5的任一个中所示的氨基酸序列，或与其VH氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。


10.根据权利要求1至9中任一项的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中所述与CD3特异性结合的第二臂的VH包含SEQIDNo.36中所示的氨基酸序列，或与其VH氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。


11.根据权利要求1的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH包含选自SEQIDNo.1、SEQIDNo.2、SEQIDNo.3、SEQIDNo.4和SEQIDNo.5的任一个中所示的氨基酸序列；并且所述与CD3特异性结合的第二臂的VH包含SEQIDNo.36中所示的氨基酸序列。


12.根据权利要求1或3的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH包含SEQIDNo.1中所示的氨基酸序列；并且所述与CD3特异性结合的第二臂的VH包含SEQIDNo.36中所示的氨基酸序列。


13.根据权利要求1或4的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH包含SEQIDNo.2中所示的氨基酸序列；并且所述与CD3特异性结合的第二臂的VH包含SEQIDNo.36中所示的氨基酸序列。


14.根据权利要求1或5的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH包含SEQIDNo.3中所示的氨基酸序列；并且所述与CD3特异性结合的第二臂的VH包含SEQIDNo.36中所示的氨基酸序列。


15.根据权利要求1或6的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH包含SEQIDNo.4中所示的氨基酸序列；并且所述与CD3特异性结合的第二臂的VH包含SEQIDNo.36中所示的氨基酸序列。


16.根据权利要求1或7的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中所述与PD-1特异性结合的第一臂的VH包含SEQIDNo.5中所示的氨基酸序列；并且所述与CD3特异性结合的第二臂的VH包含SEQIDNo.36中所示的氨基酸序列。


17.根据权利要求1至16中任一项的分离的PD-1/CD3双特异性单克隆抗体或其抗体片段，其中所述与PD-1特...

【专利技术属性】
技术研发人员：柴山史朗，新坊拓也，手塚智也，马克索罗斯比，科尼利斯阿德里安迪克夫，彼得福克凡罗，林斯克罗斯特，
申请(专利权)人：小野药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP