一种快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，其特征在于，包括：PCR反应液、Taq/UDG酶混合液、阳性对照和阴性对照，PCR反应液包括10×PCR buffer、沙眼衣原体CT的引物和探针、淋球菌NG的引物和探针、解脲脲原体UU的引物和探针、人β‑珠蛋白HBB的引物和探针、25mM MgCl

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒
本专利技术涉及一种快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，属于生物检测领域。
技术介绍
近年来泌尿生殖道感染疾病不断增多，引起感染的病原体较繁多复杂，且存在一定的无症状感染，给疾病的诊治造成困难。其中沙眼衣原体(CT)、淋球菌(NG)及解脲脲原体(UU)单独或交叉感染在临床上最为多见，也是性传播疾病的主要病原体。沙眼衣原体是衣原体的一种，有滤过性，主要通过性接触传播，临床表现特征往往是慢性过程，很多感染者无明显临床表现，但有可能引起严重的后遗症。男性感染临床表现为尿道黏液性或黏液脓性分泌物，并有尿痛、尿道不适等症状，合并症有附睾炎、前列腺炎等。女性感染主要发生宫颈炎和尿道炎，70％～90％的妇女宫颈沙眼衣原体感染无症状，可持续数月至数年，有症状发生时，可出现阴道分泌物异常，脓性白带增多。淋球菌属奈瑟菌属，是淋病的病原体。淋病是一种极容易传染和重复感染的性病，易出现合并症及后遗症，是影响全球的严重公共卫生问题。淋球菌主要通过性交传播，感染后可导致尿道炎、宫颈炎、并可能向组织内侵导致睾丸炎、附睾炎、骨盆炎症、输卵管炎、异位妊娠、不孕不育等。人类是淋球菌的天然唯一宿主，且人对淋球菌感染没有免疫能力，易感。解脲脲原体是存在于人类泌尿生殖道的一种重要病原体，主要通过性交进行传播，临床常见症状为非淋菌性尿道炎、盆腔炎、前列腺炎、阴道炎、不孕不育症等，被认为是非淋菌性尿道炎中仅次于沙眼衣原体的重要病原体。目前临床或实验室用于沙眼衣原体、淋球菌或解脲脲原体诊断的方法主要有：直接涂片法、分离培养法、免疫学方法和荧光定量PCR法等。直接涂片法因泌尿生殖道杂菌太多，特异性较低，易发生误诊和漏诊。分离培养法作为此病原体检测的金标准，但此方法分离培养操作复杂，所需时间长，不适用疾病的快速诊断和治疗。免疫学方法特异性差，敏感性低。荧光定量PCR法具有特异性强、灵敏度高、重复性好、结果精准，且无需PCR后处理，减少了产物污染问题。目前市场上已有荧光定量PCR法检测沙眼衣原体、淋球菌或解脲脲原体的试剂盒产品，但样本核酸处理过程繁琐复杂、检测耗时，且大部分是针对单项病原体的检测试剂盒，通量低、检测成本高。因此，迫切需要开发一种操作简便、快速、检测通量高、经济方便的检测泌尿生殖道病原体的试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种操作简便、快速、检测通量高、经济方便的检测泌尿生殖道病原体的试剂盒。本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供一种快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，其特征在于，包括：PCR反应液、Taq/UDG酶混合液、阳性对照和阴性对照，PCR反应液包括10×PCRbuffer、沙眼衣原体CT的引物和探针、淋球菌NG的引物和探针、解脲脲原体UU的引物和探针、人β-珠蛋白HBB的引物和探针、25mMMgCl2、dNTPs(dATP、dGTP、dCTP、dTTP、dUTP混合物)和无菌蒸馏水，沙眼衣原体CT的引物和探针、淋球菌NG的引物和探针、解脲脲原体UU的引物和探针和人β-珠蛋白HBB的引物和探针如下：沙眼衣原体CT上游引物CF：5′-CCGTCGATCATAAGGCTTGGT-3′；沙眼衣原体CT下游引物CR：5′-AGTATTTGCCGCTTTGAGTTCTG-3′；沙眼衣原体CT探针CP：5′-ATTCCCCACAGGCAGAGCTTGCAA-3′；其中5′端标记第一荧光报告基团，3′端标记第一荧光淬灭基团；淋球菌NG上游引物NF：5′-GGTGTGGAAGGCAGGAACAT-3′；淋球菌NG下游引物NR：5′-GCCTTAGTAACTGTATTGCCCGTTT-3′；淋球菌NG探针NP：5′-AGTTGACCGAGCCACCCTCAGAAGGT-3′；其中5′端标记第二荧光报告基团，3′端标记第二荧光淬灭基团；解脲脲原体UU上游引物UF：5′-GCAGCCCTCTATCCGAACTG-3′；解脲脲原体UU下游引物UR：5′-GCAAACGTGCTACAATGGCTAAT-3′；解脲脲原体UU探针UP：5′-CGCTTCATCTTACGATTTTGCAGCAGTTTG-3′；其中5′端标记第三荧光报告基团，3′端标记第三荧光淬灭基团；人β-珠蛋白上游引物HF：5′-TGAAGGCTCATGGCAAGAAAGT-3′；人β-珠蛋白下游引物HR：5′-TTGTCACAGTGCAGCTCACTCA-3′；人β-珠蛋白探针HP：5′-ACAACCTCAAGGGCACCTTTGCCAC-3′；其中5′端标记第四荧光报告基团，3′端标记第四荧光淬灭基团；第一荧光报告基团、第二荧光报告基团、第三荧光报告基团和第四荧光报告基团分别为不同的荧光报告基团，所述Taq/UDG酶混合液包括5U/μL耐热DNA聚合酶和1U/μL尿嘧啶DNA糖基化酶。其中Taq酶经过基因改造，提高了对分泌物样本中抑制因子的抵抗能力，加上程序反应时有高温步骤，可使样本核酸释放，实现对分泌物样本免核酸提取，直接进行检测。进一步，本专利技术的快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，还具有这样的特征：阴性对照为1×TE缓冲液。进一步，本专利技术的快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，还具有这样的特征：阳性对照为含有沙眼衣原体CT、淋球菌NG、解脲脲原体UU、和人β-珠蛋白的线性化重组质粒的1×TE缓冲液。进一步，本专利技术的快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，还具有这样的特征：其中沙眼衣原体CT探针的5′端标记FAM荧光报告基团，3′端标记BHQ1荧光淬灭基团。进一步，本专利技术的快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，还具有这样的特征：其中淋球菌NG探针的5′端标记JOE荧光报告基团，3′端标记BHQ1荧光淬灭基团；进一步，本专利技术的快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，还具有这样的特征：解脲脲原体UU探针的5′端标记CY5荧光报告基团，3′端标记BHQ2荧光淬灭基团；进一步，本专利技术的快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，还具有这样的特征：人β-珠蛋白HBB探针的5′端标记ROX荧光报告基团，3′端标记BHQ2荧光淬灭基团。进一步，本专利技术的快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，还具有这样的特征：判断标准为：PCR扩增试剂中Ct值≤40，依据荧光通道具体判断病原体为阳性；Ct>40时，依据荧光通道具体判断病原体为阴性。专利技术的有益效果：本专利技术采用多色荧光定量PCR技术，将样本进行1管PCR扩增，以泌尿生殖道常见的病原体CT、NG和UU为检测靶目标，实现多种病原体的同步检测，同时还通过人β-珠蛋白基因对检测过程进行质量控制，可有效实现快速对泌尿生殖道中病原体CT、NG和UU的检测，满足临床诊断需求。与现有沙眼衣原体、淋球菌或解脲脲原体核酸检测试剂盒相比，具有以下优势：(1)样本核酸不需提取，直接处理后检测，操作简便、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，其特征在于，包括：/nPCR反应液、Taq/UDG酶混合液、阳性对照和阴性对照，/nPCR反应液包括10×PCR buffer、沙眼衣原体CT的引物和探针、淋球菌NG的引物和探针、解脲脲原体UU的引物和探针、人β-珠蛋白HBB的引物和探针、25mM MgCl

【技术特征摘要】
1.一种快速检测泌尿生殖道病原体的试剂盒，其特征在于，包括：
PCR反应液、Taq/UDG酶混合液、阳性对照和阴性对照，
PCR反应液包括10×PCRbuffer、沙眼衣原体CT的引物和探针、淋球菌NG的引物和探针、解脲脲原体UU的引物和探针、人β-珠蛋白HBB的引物和探针、25mMMgCl2、dNTPs和无菌蒸馏水，
沙眼衣原体CT的引物和探针、淋球菌NG的引物和探针、解脲脲原体UU的引物和探针和人β-珠蛋白HBB的引物和探针如下：
沙眼衣原体CT上游引物CF：5′-CCGTCGATCATAAGGCTTGGT-3′；
沙眼衣原体CT下游引物CR：5′-AGTATTTGCCGCTTTGAGTTCTG-3′；
沙眼衣原体CT探针CP：5′-ATTCCCCACAGGCAGAGCTTGCAA-3′；
其中5′端标记第一荧光报告基团，3′端标记第一荧光淬灭基团；
淋球菌NG上游引物NF：5′-GGTGTGGAAGGCAGGAACAT-3′；
淋球菌NG下游引物NR：5′-GCCTTAGTAACTGTATTGCCCGTTT-3′；
淋球菌NG探针NP：5′-AGTTGACCGAGCCACCCTCAGAAGGT-3′；
其中5′端标记第二荧光报告基团，3′端标记第二荧光淬灭基团；
解脲脲原体UU上游引物UF：5′-GCAGCCCTCTATCCGAACTG-3′；
解脲脲原体UU下游引物UR：5′-GCAAACGTGCTACAATGGCTAAT-3′；
解脲脲原体UU探针UP：5′-CGCTTCATCTTACGATTTTGCAGCAGTTTG-3′；
其中5′端标记第三荧光报告基团，3′端标记第三荧光淬灭基团；
人β-珠蛋白上游引物HF：5′-TGAAGGCTCATGGCAAGAAAGT-3′；
人β-珠蛋白下游引物HR：5′-TTGTCACAGTGCAGCTCA...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈磊涛，彭令苇，李晓松，宋冬梅，
申请(专利权)人：安徽同科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34