检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及方法技术

本发明专利技术公开了种检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E‑Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法，试剂盒包括稀释液，脱色液，染色液A，染色液B，甲醇、2%PFA，10%山羊血清，小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E‑Cadherin组成的一抗混悬液，荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔组成的二抗混悬液，DAPI封片剂；检测方法包括外周血采集，膜过滤分离，染色，判断是否存在CTC，并通过免疫荧光方法检测外周血CTC的E‑Cadherin表达情况。本专利提供的方法，不用穿刺活检获取组织标本即可检测到晚期或复发前列腺癌患者E‑Cadherin表达情况，利用微创技术，能够实现实时动态检测。

【技术实现步骤摘要】
检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及方法
本专利技术提供了一种前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒及检测方法，属于分子生物学

技术介绍
在世界范围内，前列腺癌发病率居男性恶性肿瘤第2位，癌症特异性死亡居第6位。2015中国肿瘤登记年报显示，2011年中国前列腺癌发病率居恶性肿瘤第9位，城市男性前列腺癌的发病率和死亡率在男性恶性肿瘤中分别居第6位和第9位。前列腺癌治疗的难点是转移性前列腺癌，尤其是内分泌治疗后出现的去势抵抗现象，目前转移性前列腺癌去势抵抗后的治疗手段有限，并且会出现所有的常规治疗手段（放疗、化疗、内分泌治疗、靶向治疗）都失效的情况。随着分子生物学的发展，中晚期前列腺细胞癌的免疫治疗逐渐兴起，初步的临床试验也取得了较好的疗效，目前多项III期临床试验正在开展，E-钙粘蛋白(E—Cadherin)是上皮细胞表型最经典的标志物，E-Cadherin表达的下调标志着细胞之间粘附能力的下降，因此E-Cadherin被当做鉴定前列腺癌E-Cad本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL，脱色液1mL，染色液A 0.5mL，染色液B 1mL，200μl 甲醇、200μl2%PFA，100μl10%山羊血清，小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E-Cadherin组成的一抗混悬液100μl，荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔组成的二抗混悬液100μL，DAPI封片剂；/n一抗混悬液中小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E-Cadherin分别按1:100、1:400和1:500稀释，总体积为100μL；/n二抗混悬液中荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗...

【技术特征摘要】
1.一种检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的免疫荧光试剂盒，其特征在于，包括稀释液45mL，脱色液1mL，染色液A0.5mL，染色液B1mL，200μl甲醇、200μl2%PFA，100μl10%山羊血清，小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E-Cadherin组成的一抗混悬液100μl，荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔组成的二抗混悬液100μL，DAPI封片剂；
一抗混悬液中小鼠抗CK、大鼠抗CD45和兔抗E-Cadherin分别按1:100、1:400和1:500稀释，总体积为100μL；
二抗混悬液中荧光标记的羊抗小鼠、荧光标记的羊抗大鼠、荧光标记的羊抗兔按1:500稀释。


2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液为1mmol/LEDTA+0.1%BSA+0.3%硫酸铁+0.5%蔗糖。


3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述脱色液是由95%酒精与100%二甲苯按体积比1:1组成。


4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述染色液A为DAB染色液；所述染色液B为苏木素染色液。


5.一种利用权利要求1-4任一项所述的试剂盒非诊断目的检测前列腺癌患者外周血循环肿瘤细胞E-Cadherin表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）利用膜过滤装置分离获取无法获得组织标本的晚期或复发前列腺癌患者外周血：采集无法获取组织标本的晚期或复发前列腺癌患者肘正中静脉外周血5ml；
（2）外周血样预处理：将采集的外周血样采用稀释液进行10倍稀释，稀释后加多聚甲醛固定外周血样10分钟，固定终浓度为0.25%；
（3）利用膜过滤分离肿...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文涛，李琛琛，洪瑛，侯景阳，
申请(专利权)人：山东凯歌智能机器有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37