本发明专利技术公开了MS‑275作用于急性心肌缺血再灌注损伤的研究方法，包括以下步骤：步骤一：通过对SD雄性大鼠进行左冠状动脉前降支结扎，建立大鼠急性MI/RI模型；步骤二：观察MS‑275在大鼠MI/RI急性期中的作用；步骤三：探讨MS‑275对大鼠MI/RI保护作用的分子机制。本研究通过建立大鼠急性MI/RI模型，并结合体内外实验，达到以下研究目的：1)观察大鼠MI/RI急性期心肌组织中组蛋白乙酰化水平、HDAC1及microRNA‑210(miR‑210)的表达；2)证实MS‑275，一种新型HDACI型选择性抑制剂，对大鼠MI/RI的保护作用及其对大鼠心肌缺血再灌注后心肌梗死区组织中组蛋白乙酰化水平、HDAC1及miR‑210表达的影响；3)从miRNA表观遗传调控的角度揭示MS‑275改善大鼠MI/RI的具体分子机制，为HDACi治疗MI/RI提供重要的理论和实验依据。
【技术实现步骤摘要】
MS-275作用于急性心肌缺血再灌注损伤的研究方法
本专利技术涉及医学
，特别是涉及MS-275作用于急性心肌缺血再灌注损伤的研究方法。
技术介绍
大量研究表明，组蛋白去乙酰化酶作为一种重要的表观遗传修饰调控因子，参与心肌缺血/再灌注损伤的发病过程。组蛋白去乙酰化酶抑制剂可干扰HDACs的功能，有效地减轻缺血/再灌注损伤，在心肌保护领域具有较广阔的治疗前景。然而，这种保护效应所涉及的具体分子机制研究较少。
技术实现思路
为了克服上述问题，本专利技术提供了MS-275作用于急性心肌缺血再灌注损伤的研究方法。本专利技术所采用的技术方案是：MS-275作用于急性心肌缺血再灌注损伤的研究方法，包括以下步骤：步骤一：通过对SD雄性大鼠进行左冠状动脉前降支结扎，建立大鼠急性MI/RI模型；步骤二：观察MS-275在大鼠MI/RI急性期中的作用；步骤三：探讨MS-275对大鼠MI/RI保护作用的分子机制。其中，步骤一包括：将SD雄性大鼠72只随机分为4组，每组18只：其中第一组为假手术组(Sham组)，只穿线不结扎；第二组为缺血30分钟组(I30min组)；第三组为缺血30分钟再灌注60分钟组(I/R60min组)；第四组为缺血30分钟再灌注2小时组(I/R120min组)；实验结束后，处死大鼠，分离心脏，留取心肌梗死区组织标本，切片染色观察心肌梗死范围及心肌梗死区细胞组织形态变化，并通过免疫组化、组蛋白乙酰化检测试剂盒及real-timePCR等技术检测组蛋白乙酰化水平、HDAC1及miR-210的表达改变。其中，步骤二包括：将SD雄性大鼠90只随机分为3组，每组30只：第一组为假手术组(Sham组)，只穿线不结扎，分别于手术前24小时、1小时腹腔注射溶媒DMSO；第二组为心肌缺血/再灌注组(I/R组)，分别于手术前24小时、1小时腹腔注射溶媒DMSO；第三组为心肌缺血/再灌注+HDACI预处理组(I/R+MS-275组)，分别于手术前24小时、1小时腹腔注射MS-275(10mg/kg)；缺血/再灌注时间为30min/120min，实验过程中监测各组大鼠血流动力学及心律失常情况；实验结束后，处死大鼠，分离心脏，留取心肌梗死区组织标本，切片染色观察心肌梗死范围及心肌梗死区细胞组织形态变化，并检测组蛋白乙酰化水平、HDAC1及miR-210的表达改变。其中，步骤三包括：利用生物信息学、双荧光素酶报告基因系统、干扰过表达等方法，筛选并鉴定miR-210的下游靶基因FOXO3A；MS-275处理H9c2细胞株，检测处理前后miR-210启动子区组蛋白H4ac水平、miR-210和FOXO3A的表达以及细胞凋亡情况；分析大鼠缺血再灌注心肌梗死区组织中miR-210与FOXO3A表达的相关性；通过靶基因回复性实验证实miR-210/FOXO3A介导MS-275的心肌保护作用。本专利技术的优点如下：本研究通过建立大鼠急性MI/RI模型，并结合体内外实验，达到以下研究目的：1)观察大鼠MI/RI急性期心肌组织中组蛋白乙酰化水平、HDAC1及microRNA-210(miR-210)的表达；2)证实MS-275，一种新型HDACI型选择性抑制剂，对大鼠MI/RI的保护作用及其对大鼠心肌缺血再灌注后心肌梗死区组织中组蛋白乙酰化水平、HDAC1及miR-210表达的影响；3)从miRNA表观遗传调控的角度揭示MS-275改善大鼠MI/RI的具体分子机制，为HDACi治疗MI/RI提供重要的理论和实验依据。具体实施方式下面对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术并不局限于这些内容。实施例MS-275作用于急性心肌缺血再灌注损伤的研究方法，包括以下步骤：步骤一：通过对SD雄性大鼠进行左冠状动脉前降支结扎，建立大鼠急性MI/RI模型：将SD雄性大鼠72只随机分为4组，每组18只：其中第一组为假手术组(Sham组)，只穿线不结扎；第二组为缺血30分钟组(I30min组)；第三组为缺血30分钟再灌注60分钟组(I/R60min组)；第四组为缺血30分钟再灌注2小时组(I/R120min组)；实验结束后，处死大鼠，分离心脏，留取心肌梗死区组织标本，切片染色观察心肌梗死范围及心肌梗死区细胞组织形态变化，并通过免疫组化、组蛋白乙酰化检测试剂盒及real-timePCR等技术检测组蛋白乙酰化水平、HDAC1及miR-210的表达改变。步骤二：观察MS-275在大鼠MI/RI急性期中的作用：将SD雄性大鼠90只随机分为3组，每组30只：第一组为假手术组(Sham组)，只穿线不结扎，分别于手术前24小时、1小时腹腔注射溶媒DMSO；第二组为心肌缺血/再灌注组(I/R组)，分别于手术前24小时、1小时腹腔注射溶媒DMSO；第三组为心肌缺血/再灌注+HDACI预处理组(I/R+MS-275组)，分别于手术前24小时、1小时腹腔注射MS-275(10mg/kg)；缺血/再灌注时间为30min/120min，实验过程中监测各组大鼠血流动力学及心律失常情况；实验结束后，处死大鼠，分离心脏，留取心肌梗死区组织标本，切片染色观察心肌梗死范围及心肌梗死区细胞组织形态变化，并检测组蛋白乙酰化水平、HDAC1及miR-210的表达改变；步骤三：探讨MS-275对大鼠MI/RI保护作用的分子机制：利用生物信息学、双荧光素酶报告基因系统、干扰过表达等方法，筛选并鉴定miR-210的下游靶基因FOXO3A；MS-275处理H9c2细胞株，检测处理前后miR-210启动子区组蛋白H4ac水平、miR-210和FOXO3A的表达以及细胞凋亡情况；分析大鼠缺血再灌注心肌梗死区组织中miR-210与FOXO3A表达的相关性；通过靶基因回复性实验证实miR-210/FOXO3A介导MS-275的心肌保护作用。结果：LAD结扎再松开成功建立大鼠MI/RI模型；与I30min组相比，I/R120min可显著降低大鼠心肌梗死区组织总组蛋白H4ac水平(I/R120min组vsI30min组＝0.9745±0.1247vs1.8090±0.1796，P<0.01)，促进HDAC1的蛋白表达(P＝0.001)，同时抑制miR-210的表达(I/R120min组vsI30min组＝4.5480±0.7486vs12.4100±1.9640，P<0.01)。MS-275缺血前预处理可明显降低大鼠心肌I/R引起的心动过速、室性早搏和室颤等心律失常的发生率(P<0.01)，显著改善心室功能受损，减少心肌梗死面积(I/R+MS-275组vsI/R组＝30.76±2.0780vs46.80±3.0590，P<0.01)；与I/R组相比，I/R+MS-275组大鼠心肌组织H4ac水平显著升高(P<0.001)，HDAC1水平显著降低(P<0.001)，活性明显被抑制(I/R+MS-275组vsI/R组＝3092±189.7vs5163±231.2，P<本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.MS-275作用于急性心肌缺血再灌注损伤的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤一：通过对SD雄性大鼠进行左冠状动脉前降支结扎，建立大鼠急性MI/RI模型；/n步骤二：观察MS-275在大鼠MI/RI急性期中的作用；/n步骤三：探讨MS-275对大鼠MI/RI保护作用的分子机制。/n
【技术特征摘要】
1.MS-275作用于急性心肌缺血再灌注损伤的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：通过对SD雄性大鼠进行左冠状动脉前降支结扎，建立大鼠急性MI/RI模型；
步骤二：观察MS-275在大鼠MI/RI急性期中的作用；
步骤三：探讨MS-275对大鼠MI/RI保护作用的分子机制。
2.根据权利要求1所述的MS-275作用于急性心肌缺血再灌注损伤的研究方法，其特征在于：所述的步骤一包括：将SD雄性大鼠72只随机分为4组，每组18只：其中第一组为假手术组(Sham组)，只穿线不结扎；第二组为缺血30分钟组(I30min组)；第三组为缺血30分钟再灌注60分钟组(I/R60min组)；第四组为缺血30分钟再灌注2小时组(I/R120min组)；实验结束后，处死大鼠，分离心脏，留取心肌梗死区组织标本，切片染色观察心肌梗死范围及心肌梗死区细胞组织形态变化，并通过免疫组化、组蛋白乙酰化检测试剂盒及real-timePCR等技术检测组蛋白乙酰化水平、HDAC1及miR-210的表达改变。
3.根据权利要求1所述的MS-275作用于急性心肌缺血再灌注损伤的研究方法，其特征在于：所述的步骤二包括：将SD雄性大鼠90只随机分为3组，每组30只：第一组为假...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭斌，李朵，徐军美，
申请(专利权)人：中南大学湘雅二医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。