检测rs1766位点多态性的试剂及其应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学和医学领域，涉及一种检测rs1766位点多态性的试剂及其应用。通过该位点基因型的检测结果来预测1型糖尿病(T1DM)、成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)或2型糖尿病(T2DM)的患病风险。本发明专利技术还公开了相应的检测试剂盒，该试剂盒含有扩增rs1766位点的引物以及检测该位点基因型的测序引物。利用本发明专利技术检测rs1766位点的基因型，方法简单易行,快速高效，成本低廉,为糖尿病的诊断和治疗提供了一个简捷的新途径。

【技术实现步骤摘要】
检测rs1766位点多态性的试剂及其应用
：本专利技术涉及分子生物学和医学领域，涉及人HLA基因的单核苷酸多态性位点rs1766的检测试剂，及其在制备糖尿病相关性风险评估试剂中的应用。
技术介绍
：糖尿病是一种以血糖水平升高为特征的一组异质性疾病。1型糖尿病和2型糖尿病表现出明显不同的病理生理过程。1型糖尿病(T1DM)是由T淋巴细胞介导的对胰岛β细胞破坏而导致胰岛素绝对缺乏的器官特异性自身免疫性疾病，胰岛素的缺乏不仅导致葡萄糖产生过多和细胞对葡萄糖的摄取减少，同时也使得脂肪分解和脂肪酸氧化增加，从而导致糖尿病酮症酸中毒。相反的，2型糖尿病(T2DM)的特征包括外周组织胰岛素抵抗，胰岛素缺乏相对较少或没有胰岛素缺乏，虽然其特异性病因不明，但T2DM与胰岛细胞的自身免疫无关。然而，在一些研究中，10％左右的T2DM表型患者在诊断时已证实了胰岛自身免疫，这一特殊亚型称为成人隐匿性自身免疫糖尿病。成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)是一种由成人发病、存在糖尿病相关自身抗体、诊断后一段时间内不需要胰岛素治疗的自身免疫性糖尿病，是成人型自身免疫性糖尿病中最常见的一种。糖尿病被认为是由遗传因素和环境因素共同作用导致的复杂遗传病。越来越多的研究者们将目光聚集在了遗传因素对糖尿病发生发展的作用。HLA基因又称为人类主要组织相容性复合体，位于第6对染色体的短臂上，整个复合体上有近60个基因座，根据编码分子特性的不同，可将整个复合体的基因分成三类：I类、II类、III类。II类基因区位于着丝点的近端，是结构最为复杂的一个区，主要由DR、DQ、DP三个亚区构成，每个亚区又有若干个位点，其中本专利技术研究的rs1766位点就是II类基因上DQ亚区的一个位点。到目前为止，已有的研究支持LADA和T1DM之间存在相同的易感基因，但是，与T1DM相比，遗传易感基因对LADA的影响更小。近年来，全球T1DM及LADA的发病率呈逐年递增势态，世界各国糖尿病的发病率差异较大。庞大的人口基数、逐渐增加的发病率加之严重的临床结局，使得糖尿病成为中国重大公共卫生问题之一。为了最终实现治疗LADA及T1DM，本领域迫切需要寻求LADA及T1DM的易感基因，并开发检测LADA和T1DM易感基因的方法、试剂盒，以及相关治疗药物,以达到早期诊断以及治疗LADA及T1DM的目的。
技术实现思路
本专利技术的首要目的是提供一种检测rs1766位点多态性的试剂在制备预测糖尿病患病风险制剂中的应用。该多态性位点是首次被发现与糖尿病患病风险相关，且该位点基因型用于判定LADA或T1DM患病风险，预测准确性高，可信度大。进一步的，本专利技术所述的糖尿病分型包括：T1DM或LADA。进一步的，所述的rs1766位点多态性为：GG,AG或AA。本专利技术发现携带rs1766AA基因型的人群中正常人人数远高于LADA或者T1DM患者人数，提示AA基因型患LADA或者T1DM的风险低，另外两种基因型GG和AG均以AA基因型为参比。本专利技术以T1DM病例和正常对照各500例左右进行rs1766基因型频率比较试验发现：携带rs1766GG基因型的人群，其患T1DM的风险显著升高，比值比OR＝20.791，是AA基因型的20.791倍；AG基因型的比值比OR＝2.366，是AA基因型风险的2.366倍，且p值均小于0.05，具有显著性差异。同样，以LADA病例和正常对照各500例左右进行rs1766基因型频率比较试验发现携带rs1766GG基因型的人群，其患LADA的风险显著升高，比值比OR＝6.598，是AA基因型的6.598倍；AG基因型的比值比OR＝1.944，是AA基因型风险的1.944倍，且p值均小于0.05，具有显著性差异。进一步的，本专利技术得到的结论为糖尿病患病风险为：GG＞AG＞AA，确切的说应该是患LADA或者T1DM风险为：GG＞AG＞AA。上述检测rs1766位点多态性的试剂可以预测以下几种情形：(1)用于预测未出现糖尿病临床症状的普通人患LADA或者T1DM的风险。(2)用于预测出现糖尿病临床症状但尚未确诊糖尿病的人患LADA或T1DM的风险。(3)用于预测确诊糖尿病，但尚未确诊具体是哪一种糖尿病的患者患LADA或者T1DM的风险。本专利技术的第二个目的是提供一种检测rs1766位点多态性的试剂在制备预测糖尿病分型患病风险制剂中的应用。该多态性位点是首次发现能够用于预测区分LADA或T1DM和T2DM，且该位点用于判定的标准为基因型，预测准确性高，可信度大。进一步的，糖尿病分型包括：T1DM，T2DM和LADA。进一步的，所述的rs1766位点多态性为：GG,AG或AA。由于携带rs1766AA基因型的人群中T2DM患者人数远高于LADA或T1DM患者人数，提示AA基因型患LADA或T1DM而不是T2DM的概率低，另外两种基因型GG和AG均以AA基因型为参比。本专利技术以T1DM病例和T2DM病例各500例左右进行基因型频率比较试验发现：携带rs1766GG基因型的人群，其患T1DM而不是T2DM的概率显著升高，比值比OR为9.604,是AA基因型患T1DM而不是T2DM的概率的9.604倍，且p值小于0.05，具有显著性差异。但AG基因型比值比OR为1.602，P值大于0.05，差异不显著，因此，rs1766AG基因型不足以判断患T1DM而不是T2DM的概率。本专利技术以T2DM病例和LADA病例各500例左右进行rs1766基因型频率比较试验发现：携带rs1766GG基因型的人群，其患LADA而不是T2DM的概率显著升高，比值比OR为3.048，是AA基因型患LADA而不是T2DM的概率的3.048倍，且p值小于0.05，具有显著性差异。但AG基因型比值比OR为1.316，P值大于0.05，差异不显著，因此，rs1766AG基因型不足以判断患LADA而不是T2DM的概率。进一步的，本专利技术得到结论为：在区分LADA或T1DM和T2DM时，患T1DM或LADA而非T2DM的概率rs1766位点GG＞AA基因型。上述检测rs1766位点多态性的试剂能够预测以下几种情形：(1)用于预测未出现糖尿病临床症状的普通人患LADA或T1DM而不是T2DM的概率。(2)用于预测出现糖尿病临床症状但尚未确诊糖尿病的人患LADA或T1DM而不是T2DM的概率。(3)用于预测确诊糖尿病，但尚未确诊具体是哪一种糖尿病的患者患LADA或T1DM而不是T2DM的概率。本专利技术的第三个目的是提供一种预测糖尿病患病风险的试剂盒。该试剂盒是基于本专利技术新发现的与预测糖尿病患病风险的SNP位点而设计的，预测准确性高，可信度大。该试剂盒具体为检测rs1766位点多态性的试剂。进一步的，所述的试剂盒：包含特异性扩增rs1766位点的引物以及测序引物。进一步的，优选扩增引物序列为：F：GGTCATCTCCTTTCATCCCCA,见本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测rs1766位点多态性的试剂在制备预测糖尿病患病风险制剂中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.检测rs1766位点多态性的试剂在制备预测糖尿病患病风险制剂中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的糖尿病分型包括：T1DM或LADA。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的rs1766位点多态性为：GG,AG或AA。


4.根据权利要求1或2或3所述的应用，其特征在于，糖尿病患病风险为：GG＞AG＞AA。


5.检测rs1766位点多态性的试剂在制备预测糖尿病分型患病风险制剂中的应用。


6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，糖尿病分型包括：T1DM，T2DM和LADA。


7.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：周智广，谢志国，黄干，李霞，罗说明，林健，肖扬，夏影，
申请(专利权)人：中南大学湘雅二医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43