脂肽Lin-Lf4NH制造技术

本发明专利技术提供新型的脂肽Lin‑Lf4NH

【技术实现步骤摘要】
脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2及其应用
本专利技术涉及生物
，具体地说，涉及脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2及其应用。
技术介绍
乳铁蛋白肽(Lactoferricin，简写Lfcin)是乳铁蛋白在酸性环境下经胃蛋白酶作用N端释放的一段多功能抗菌肽(Gifford等，2005)，Lfcin与乳铁蛋白的功能密切相关，包含了乳铁蛋白的大部分功能域，具有强大的抗菌、抗癌、抗病毒、抗寄生虫和抗炎活性(Hao等,2018)。在许多情况下，Lfcin不仅保留了乳铁蛋白的活性，甚至比亲本蛋白的活性更强(Arias等，2014)。由牛乳铁蛋白第17-41位氨基酸残基组成的LfcinB被认为是奶牛、小鼠和山羊等多种Lfcins中最有效的(Bruni等，2016；Ulvatne等，2001)。细菌耐药性的迅速增加对抗生素构成了严重挑战，与传统抗生素相比，由于抗菌肽具有较强的抗菌活性和不同的抗菌机制，不易形成耐药性，具有成为未来抗菌药物的潜力(Andersson等，2016；Seoetal.，2012)。然而抗菌肽的临床治疗与应用仍然存在问题，为了提高Lfcins的抗菌活性，开发新的功能，对抗耐药菌的出现，需要用到包括氨基酸替代、化学修饰、环化、嵌合、聚合等多种分子设计策略(Hao等，2018；Yin等，2014)。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供新型的脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2及其应用。本专利技术构思如下：为了进一步提高多肽LfcinB4和LfcinB5的抗菌活性，本专利技术将LfcinB4和LfcinB5的N端偶联亚油酸，C端经过酰胺化修饰，获得两条脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2。随后，对Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2抗菌活性、毒性及体内药效进行评价，为新型抗菌的药物创制提供理论依据。为了实现本专利技术目的，第一方面，本专利技术提供一种脂肽Lin-Lf4NH2，其是在抗菌肽LfcinB4的N端偶联亚油酸，C端经过酰胺化修饰得到的。其序列如下：(Linoleicacid)-FKAWRWAWRWKKLAAPS-NH2(SEQIDNO:1)。脂肽Lin-Lf4NH2的结构如式(I)所示：第二方面，本专利技术提供脂肽Lin-Lf5NH2，脂肽Lin-Lf5NH2是在抗菌肽LfcinB5的N端偶联亚油酸，C端经过酰胺化修饰得到的。其序列如下：(Linoleicacid)-FKAFRWAWRWKKLAAPS-NH2(SEQIDNO:2)。脂肽Lin-Lf5NH2的结构如式(II)所示：第三方面，本专利技术提供含有脂肽Lin-Lf4NH2和/或脂肽Lin-Lf5NH2的广谱抗菌药物或组合物。第四方面，本专利技术提供含有脂肽Lin-Lf4NH2和/或脂肽Lin-Lf5NH2的防腐剂、杀菌剂或表面活性剂。第五方面，本专利技术提供脂肽Lin-Lf4NH2和/或脂肽Lin-Lf5NH2的以下任一应用：1)用于制备抗菌药物或组合物；2)用于制备防腐剂；3)用于制备杀菌剂；4)用于制备表面活性剂。所述菌包括革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。优选包括葡萄球菌属(Staphylococcus)、埃希氏菌属(Escherichia)、沙门氏菌属(Salmonella)细菌。更优选包括猪葡萄球菌(Staphylococcushyicus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、鸡白痢沙门菌(Salmonellapullorum)、肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis)。借由上述技术方案，本专利技术至少具有下列优点及有益效果：本专利技术的脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2是人工设计合成的活性多肽，包含17个氨基酸残基，带5个正电荷，N端偶联亚油酸，C端被酰胺化修饰，分子量分别为2450.09Da和2411.05Da。与母体肽Lf4NH2和Lf5NH2相比，Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2具有更高的抗菌活性和热稳定性，在低浓度范围内几乎没有细胞毒性。实验表明脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2对革兰氏阳性菌和阴性菌均具有较好的抑制作用，比母体肽的MIC值小，热稳定性好，在小鼠皮肤脓肿模型试验中能够显著降低皮肤荷菌量，减轻皮肤组织损伤，效果优于抗生素莫匹罗星，是极具应用价值的小分子脂肽，可用于制备新型抗菌抗感染药物等，应用前景广阔。附图说明图1为本专利技术脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2的质谱图。图2为本专利技术实施例3中脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2的细胞毒性。图3为本专利技术实施例5中脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2的治疗后小鼠皮肤荷菌量。图4为本专利技术实施例5中脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2的治疗后小鼠皮肤组织切片。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，所用原料均为市售商品。以下实施例中使用的实验材料：MEM高糖细胞培养液、胰蛋白酶消化液、细胞用PBS、胎牛血清及青链霉素混合液均购自美国Gibco公司，ELISA板和无菌96孔培养板购自ThermoScientific，抗生素2％莫匹罗星软膏购自中国兽医药品监察所，人类永生化表皮细胞(Hacat)购自北京协和医院，六周龄SPF级BALB/c小鼠北京维通利华试验动物有限公司。其它常规试剂采用进口分装或国产分析纯。以下实施例中涉及的培养基和缓冲液配方：MH液体培养基：2.4g溶于80mL蒸馏水中，完全溶解后定容至100mL，121℃高压灭菌20min。MH固体培养基：3.65g溶于80mL蒸馏水中，完全溶解后定容至100mL，121℃高压灭菌20min。细胞完全培养液：10％胎牛血清，100U/mL青链霉素(双抗)，90％MEM高糖基础培养液。PBS磷酸盐缓冲液：NaCl4.25g，KH2PO40.12g，Na2HPO41.825g，KCl0.1g溶于蒸馏水中，完全溶解后定容至500mL，121℃高压灭菌20min。以下实施例中涉及的菌种见表1：表1菌株及来源实施例1脂肽Lin-Lf4NH2和Lin-Lf5NH2的设计与合成多肽LfcinB4和LfcinB5的氨基酸序列分别如SEQIDNO:1和2所示，为了进一步提高LfcinB4和LfcinB5的抗菌活性，分别对两条多肽的结构进行优化设计。将Fmoc-Phe-OH、HOBT、HBTU、DIEA于DMF中溶解混匀，并与脱去Fmoc保护基的MBHA树脂进行缩合反应，得到Fmoc-Phe-resin；按照相同的方法依次缩合反应后续氨基酸，分别得到Fmoc-Lf4-resin和Fmoc-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.脂肽Lin-Lf4NH

【技术特征摘要】
1.脂肽Lin-Lf4NH2，其特征在于，脂肽Lin-Lf4NH2是在抗菌肽LfcinB4的N端偶联亚油酸，C端经过酰胺化修饰得到的。


2.脂肽Lin-Lf5NH2，其特征在于，脂肽Lin-Lf5NH2是在抗菌肽LfcinB5的N端偶联亚油酸，C端经过酰胺化修饰得到的。


3.含有权利要求1和/或权利要求2所述脂肽的广谱抗菌药物或组合物。


4.含有权利要求1和/或权利要求2所述脂肽的防腐剂、杀菌剂或表面活性剂。


5.权利要求1所述脂肽Lin-Lf4NH2，或权利要求2所述脂肽Lin-Lf5NH2的以下任一应用：
1)用于制备抗菌药物或组合物；
2)用于制备防腐剂；
3)用于制备杀...

【专利技术属性】
技术研发人员：王建华，刘鹤，毛若雨，滕达，王秀敏，杨娜，郝娅，
申请(专利权)人：中国农业科学院饲料研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11