一种筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法及其使用的试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法及其使用的试剂盒。该方法如下步骤：检测待测奶牛的基因型为基因型I、基因型II还是基因型III，基因型I的奶牛牛乳中乳铁蛋白含量小于基因型II的奶牛，基因型II的奶牛牛乳中乳铁蛋白含量小于基因型III的奶牛，基因型I的奶牛、基因型II的奶牛和基因型III的奶牛基于T53538908A SNP的基因型分别为TT纯合型、TA杂合型和AA纯合型，T53538908ASNP为奶牛基因组第22条染色体第53538908位核苷酸。采用本发明专利技术提供的方法可以筛选牛乳中乳铁蛋白含量较高的奶牛个体且具有较高的准确率。本发明专利技术对建立高品质奶牛群体具有重大的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法及其使用的试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法及其使用的试剂盒。
技术介绍
LTF基因(Genebank号为280846)编码的乳铁蛋白是乳汁中具有天然活性的非血红素铁结合糖蛋白，主要由乳腺上皮细胞表达和分泌，是乳汁中的重要营养成分之一。乳铁蛋白具有广泛的生物学活性，参与铁的转运，并在先天免疫系统中起着重要的作用，且被证明对某些癌细胞具有抑制作用。因此，乳铁蛋白是一种极具开发潜力的食品添加剂。乳铁蛋白是婴幼儿所需的重要营养成分，已在婴幼儿配方奶粉中被广泛使用。研究表明，乳铁蛋白可以降低婴幼儿和儿童的腹泻发病率、呼吸道感染发病率，促进神经发育，还可以在婴儿的脑发育等过程中起重要作用。然而，乳铁蛋白在牛乳中的含量较低，每毫升牛乳仅含0.02-0.35mg。由于牛乳中的天然乳铁蛋白的含量极低，所以天然乳铁蛋白作为食品添加剂和营养强化剂的价格仍较为昂贵。LTF基因在许多研究中被证明与奶牛的生产性能有关。2010年，O’HalloranF等人发现LTF基因上位于转录起始位点上游-28bp的SNP突变(A/C)对牛乳中的乳蛋白量有一定影响。2015年，MaoY等的研究表明LTF基因上位于转录起始位点上游-270bp从T到C的SNP突变对产奶量、乳脂率和乳蛋白率均有正向的影响，而位于-190bp从G到A的突变则对乳脂率和乳蛋白率有不利的影响。2017年，VialeE等发现LTF基因上SNP(rs43765462)与荷斯坦奶牛的乳脂率性状正相关。2018年，RaschiaM等人发现LTF基因上SNP(rs43706485)与奶牛的305天产奶量有潜在的相关性。研究还表明，牛乳中乳铁蛋白的含量与乳蛋白的含量具有正相关性。因此，通过发掘LTF基因上影响产奶性状的重要遗传变异，将其应用于奶牛育种，可以同时达到提高奶牛的生产性能和牛乳中乳铁蛋白含量的效果。单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism，SNP)是指在基因组水平上单个核苷酸的突变所引起的DNA序列多态性的遗传标记，仅涉及到单个碱基的变异。迄今为止，许多SNP被证明通过改变氨基酸序列、产生新的可变剪切体等调控途径影响人类疾病的发生和动植物重要经济性状的表型。目前，SNP的检测方法主要包括DNA测序、转录组测序、SNP芯片等。RNA-seq技术，即转录组测序技术，为一种借助二代高通量测序方法对细胞或组织中的总RNA进行测序的技术。它可以对细胞或组织中基因的表达情况进行检测，同时可以通过与参考基因组序列的比对检测到群体中存在的重要遗传变异。目前，RNA-seq技术已经广泛应用在动植物重要经济性状的研究中，在奶牛产奶性状的研究中也发挥了重要作用，目前许多研究报道挖掘了一批重要的产奶性状候选功能基因。
技术实现思路
本专利技术的目的是筛选不同乳铁蛋白含量的奶牛。本专利技术首先保护筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法。本专利技术所保护的筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法，具体可为方法一，可包括如下步骤：检测待测奶牛的基因型为基因型I、基因型II还是基因型III，“基因型I的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型II的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型III的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量；所述基因型I的奶牛为基于T53538908ASNP的基因型为TT纯合型的奶牛；所述基因型II的奶牛为基于T53538908ASNP的基因型为TA杂合型的奶牛；所述基因型III的奶牛为基于T53538908ASNP的基因型为AA纯合型的奶牛；T53538908ASNP为奶牛基因组第22条染色体第53538908位核苷酸。本专利技术所保护的筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法，具体可为方法二，可包括如下步骤：检测待测奶牛的基因型为基因型I还是基因型III，“基因型I的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型III的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量；所述基因型I的奶牛为基于T53538908ASNP的基因型为TT纯合型的奶牛；所述基因型III的奶牛为基于T53538908ASNP的基因型为AA纯合型的奶牛；T53538908ASNP为奶牛基因组第22条染色体第53538908位核苷酸。本专利技术所保护的筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法，具体可为方法三，可包括如下步骤：检测待测奶牛基因组中是否含有SEQIDNO：1所示的DNA片段1、SEQIDNO：2所示的DNA片段2、SEQIDNO：3所示的DNA片段3、SEQIDNO：4所示的DNA片段4、SEQIDNO：5所示的DNA片段5和SEQIDNO：6所示的DNA片段6，然后进行如下判断：如果待测奶牛基因组中含有所述DNA片段1、所述DNA片段3和/或所述DNA片段5，且不含有所述DNA片段2、所述DNA片段4和/或所述DNA片段6，则待测奶牛的基因型为基因型I；如果待测奶牛基因组中含有所述DNA片段1、所述DNA片段3和/或所述DNA片段5，且含有所述DNA片段2、所述DNA片段4和/或所述DNA片段6，则待测奶牛的基因型为基因型II；如果待测奶牛基因组中含有所述DNA片段2、所述DNA片段4和/或所述DNA片段6，且不含有所述DNA片段1、所述DNA片段3和/或所述DNA片段5，则待测奶牛的基因型为基因型III；“基因型I的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型II的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型III的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量。本专利技术所保护的筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法，具体可为方法四，可包括如下步骤：检测待测奶牛基因组中是否含有SEQIDNO：1所示的DNA片段1、SEQIDNO：2所示的DNA片段2、SEQIDNO：3所示的DNA片段3、SEQIDNO：4所示的DNA片段4、SEQIDNO：5所示的DNA片段5和SEQIDNO：6所示的DNA片段6，然后进行如下判断：如果待测奶牛基因组中含有所述DNA片段1、所述DNA片段3和/或所述DNA片段5，且不含有所述DNA片段2、所述DNA片段4和/或所述DNA片段6，则待测奶牛的基因型为基因型I；如果待测奶牛基因组中含有所述DNA片段2、所述DNA片段4和/或所述DNA片段6，且不含有所述DNA片段1、所述DNA片段3和/或所述DNA片段5，则待测奶牛的基因型为基因型III；“基因型I的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型III的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量。上述任一所述方法中，所述“检测待测奶牛基因组中是否含有DNA片段1、DNA片段2、DNA片段3、DNA片段4、DNA片段5和DNA片段6”、所述“检测待测奶牛的基因型为基因型I、基因型II还是基因型III”或所述“检测待测奶牛的基因型为基因型I还是基因型III”的方法可为a1)或a2)：a1)直接测序；a2)以待测奶牛的基因组DNA为模板，采用引物对1、引物对2和/或引物对3进行PCR扩增，之后测序；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法，包括如下步骤：检测待测奶牛的基因型为基因型I、基因型II还是基因型III，“基因型I的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型II的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型III的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量；/n所述基因型I的奶牛为基于T53538908A SNP的基因型为TT纯合型的奶牛；/n所述基因型II的奶牛为基于T53538908A SNP的基因型为TA杂合型的奶牛；/n所述基因型III的奶牛为基于T53538908A SNP的基因型为AA纯合型的奶牛；/nT53538908A SNP为奶牛基因组第22条染色体第53538908位核苷酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法，包括如下步骤：检测待测奶牛的基因型为基因型I、基因型II还是基因型III，“基因型I的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型II的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型III的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量；
所述基因型I的奶牛为基于T53538908ASNP的基因型为TT纯合型的奶牛；
所述基因型II的奶牛为基于T53538908ASNP的基因型为TA杂合型的奶牛；
所述基因型III的奶牛为基于T53538908ASNP的基因型为AA纯合型的奶牛；
T53538908ASNP为奶牛基因组第22条染色体第53538908位核苷酸。


2.一种筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法，包括如下步骤：检测待测奶牛的基因型为基因型I还是基因型III，“基因型I的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型III的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量；
所述基因型I的奶牛为基于T53538908ASNP的基因型为TT纯合型的奶牛；
所述基因型III的奶牛为基于T53538908ASNP的基因型为AA纯合型的奶牛；
T53538908ASNP为奶牛基因组第22条染色体第53538908位核苷酸。


3.一种筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法，包括如下步骤：检测待测奶牛基因组中是否含有SEQIDNO：1所示的DNA片段1、SEQIDNO：2所示的DNA片段2、SEQIDNO：3所示的DNA片段3、SEQIDNO：4所示的DNA片段4、SEQIDNO：5所示的DNA片段5和SEQIDNO：6所示的DNA片段6，然后进行如下判断：
如果待测奶牛基因组中含有所述DNA片段1、所述DNA片段3和/或所述DNA片段5，且不含有所述DNA片段2、所述DNA片段4和/或所述DNA片段6，则待测奶牛的基因型为基因型I；
如果待测奶牛基因组中含有所述DNA片段1、所述DNA片段3和/或所述DNA片段5，且含有所述DNA片段2、所述DNA片段4和/或所述DNA片段6，则待测奶牛的基因型为基因型II；
如果待测奶牛基因组中含有所述DNA片段2、所述DNA片段4和/或所述DNA片段6，且不含有所述DNA片段1、所述DNA片段3和/或所述DNA片段5，则待测奶牛的基因型为基因型III；
“基因型I的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型II的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型III的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量。


4.一种筛选不同乳铁蛋白含量奶牛的方法，包括如下步骤：检测待测奶牛基因组中是否含有SEQIDNO：1所示的DNA片段1、SEQIDNO：2所示的DNA片段2、SEQIDNO：3所示的DNA片段3、SEQIDNO：4所示的DNA片段4、SEQIDNO：5所示的DNA片段5和SEQIDNO：6所示的DNA片段6，然后进行如下判断：
如果待测奶牛基因组中含有所述DNA片段1、所述DNA片段3和/或所述DNA片段5，且不含有所述DNA片段2、所述DNA片段4和/或所述DNA片段6，则待测奶牛的基因型为基因型I；
如果待测奶牛基因组中含有所述DNA片段2、所述DNA片段4和/或所述DNA片段6，且不含有所述DNA片段1、所述DNA片段3和/或所述DNA片段5，则待测奶牛的基因型为基因型III；
“基因型I的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量<“基因型III的奶牛”牛乳中乳铁蛋白含量。


5.如权利要求1至4任一所述的方法，其特征在于：所述“检测待测奶牛基因组中是否含有DNA片段1、DNA片段2、DNA片段3、DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜力，陈一丹，杜成祥，张昱，张勤，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11