基于荧光PCR或质谱检测人巨细胞病毒的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种基于荧光PCR或质谱检测人巨细胞病毒的试剂盒。本发明专利技术提供了一种引物探针组，由SEQ ID NO：1所示的引物HCMV‑F、SEQ ID NO：2所示的引物HCMV‑R和探针HCMV‑P1组成；探针HCMV‑P1的核苷酸如SEQ ID NO：3所示。本发明专利技术还提供了一种引物探针组，由SEQ ID NO：1所示的引物HCMV‑F、SEQ ID NO：2所示的引物HCMV‑R和SEQ ID NO：11所示的探针HCMV‑P2组成。本发明专利技术提供的两种试剂盒，其核心要素均为特定的引物探针组，一种试剂盒基于荧光定量PCR方法进行检测，另一种试剂盒基于核酸质谱方法进行检测，均可以实现HCMV病毒核酸的定性或定量检测，具有高灵敏度、高特异性、高准确性和简便快速的优势。

【技术实现步骤摘要】
基于荧光PCR或质谱检测人巨细胞病毒的试剂盒
本专利技术涉及一种基于荧光PCR或质谱检测人巨细胞病毒的试剂盒。
技术介绍
人巨细胞病毒(HumanCytomegalicVirus，HCMV)属于疱疹病毒科，是人类疱疹病毒组中最大的一种病毒，直径为100～200nm，核心为双股线形DNA，有典型的疱疹病毒结构。HCMV只能感染人，及在人纤维细胞中增殖。HCMV在细胞培养中增殖缓慢，复制周期长，初次分离培养需30～40天才出现细胞病变，其特点是细胞肿大变圆，核变大，核内出现周围绕有一轮"晕"的大型嗜酸性包涵体。HCMV在人群中感染非常广泛，中国成人感染率达95％以上，通常呈隐性感染，多数感染者无临床症状，但在一定条件下侵袭多个器官和系统可产生严重疾病。HCMV可侵入肺、肝、肾、唾液腺、乳腺其他腺体，以及多核白细胞和淋巴细胞，可长期或间隙地自唾液、乳汗血液、尿液、精液、子宫分泌物多处排出病毒。通常口腔、生殖道、胎盘、输血或器官移植等多途径传播。HCMV病毒可长期潜伏体内，一旦机体免疫力减退，病毒将会被激活而致病，特别是对白血病、免疫移植病人，潜伏的疱疹病毒活化形成复发感染，严重时引起移植器官坏死并危害病人生命，威胁人类健康。此外，由于巨细胞病毒可经宫内感染造成死胎、流产、早产，也可导致先天畸形，因而HCMV感染还可影响到优生优育和人口质量。临床实验室HCMV感染检测的金标准为病毒分离培养，由于HCMV生长周期长(30天)，病毒分离培养法不适合临床实验室使用。血清学检测利用抗原抗体反应检测病毒相关蛋白，具有检测快速、简单、易于操作的优点，但检测灵敏度不高，由于感染后抗体产生“窗口期”，检测还存在一定的滞后性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种基于荧光PCR或质谱检测人巨细胞病毒的试剂盒。本专利技术提供了一种引物探针组(引物探针组甲)，由SEQIDNO：1所示的引物HCMV-F、SEQIDNO：2所示的引物HCMV-R和探针HCMV-P1组成；引物HCMV-F和引物HCMV-R均为单链DNA分子；探针HCMV-P1为单链DNA分子，核苷酸如SEQIDNO：3所示。HCMV-P1的一个末端具有荧光报告基团，另一个末端具有荧光淬灭基团。具体来说，HCMV-P1的5’末端具有荧光报告基团FAM，3’末端具有荧光淬灭基团BHQ。引物HCMV-F、引物HCMV-R和探针HCMV-P1的摩尔配比具体为0.1：0.1：0.05。所述引物探针组甲为基于荧光PCR检测的引物探针组。本专利技术还保护所述引物探针组甲在制备试剂盒Ⅰ中的应用。本专利技术还保护试剂盒Ⅰ，含有所述引物探针组甲。所述试剂盒Ⅰ的用途为如下(a)或(b)：(a)鉴定人巨细胞病毒；(b)检测生物样本中是否含有人巨细胞病毒。所述试剂盒Ⅰ为基于荧光PCR检测的试剂盒。所述试剂盒Ⅰ还含有标准品质粒；所述标准品质粒中具有SEQIDNO：7所示的DNA分子。本专利技术还提供了一种引物探针组(引物探针组丙)，由SEQIDNO：1所示的引物HCMV-F、SEQIDNO：2所示的引物HCMV-R和SEQIDNO：11所示的探针HCMV-P2组成；引物HCMV-F、引物HCMV-R和探针HCMV-P2均为单链DNA分子。引物HCMV-F、引物HCMV-R和探针HCMV-P2的摩尔配比具体为0.1:0.1:40。所述引物探针组丙为基于质谱检测的引物探针组。本专利技术还保护所述引物探针组丙在制备试剂盒Ⅱ中的应用。本专利技术还保护试剂盒Ⅱ，含有所述引物探针组丙。所述试剂盒Ⅱ的用途为如下(a)或(b)：(a)鉴定人巨细胞病毒；(b)检测生物样本中是否含有人巨细胞病毒。所述试剂盒Ⅱ为基于质谱检测的试剂盒。所述试剂盒Ⅱ还含有标准品质粒；所述标准品质粒中具有SEQIDNO：7所示的DNA分子。本专利技术还保护引物探针组合1，由引物探针组甲和引物探针组乙组成；引物探针组甲，由SEQIDNO：1所示的引物HCMV-F、SEQIDNO：2所示的引物HCMV-R和探针HCMV-P1组成；引物HCMV-F和引物HCMV-R均为单链DNA分子；探针HCMV-P1为单链DNA分子，核苷酸如SEQIDNO：3所示；引物探针组乙，由SEQIDNO：4所示的引物IC-F、SEQIDNO：5所示的引物IC-R和探针IC-P1组成；引物IC-F和引物IC-R均为单链DNA分子；探针IC-P1为单链DNA分子，核苷酸如SEQIDNO：6所示。HCMV-P1的一个末端具有荧光报告基团，另一个末端具有荧光淬灭基团。IC-P1的一个末端具有荧光报告基团，另一个末端具有荧光淬灭基团。HCMV-P1和IC-P1具有不同的荧光报告基团。具体来说，HCMV-P1的5’末端具有荧光报告基团FAM，3’末端具有荧光淬灭基团BHQ。具体来说，IC-P1的5’末端具有荧光报告基团Cy5，3’末端具有荧光淬灭基团BHQ。引物HCMV-F、引物HCMV-R、探针HCMV-P1、引物IC-F、引物IC-R和探针IC-P1的摩尔配比具体为0.1：0.1：0.05：0.1：0.1：0.13。所述引物探针组合1为基于荧光PCR检测的引物探针组合。本专利技术还保护所述引物探针组合1在制备试剂盒Ⅲ中的应用。本专利技术还保护试剂盒Ⅲ，含有所述引物探针组合1。所述试剂盒Ⅲ的用途为如下(a)或(b)：(a)鉴定人巨细胞病毒；(b)检测生物样本中是否含有人巨细胞病毒。所述试剂盒Ⅲ为基于荧光PCR检测的试剂盒。所述试剂盒Ⅲ还含有标准品质粒HCMV和标准品质粒IC；标准品质粒HCMV中具有SEQIDNO：7所示的DNA分子；标准品质粒IC中具有SEQIDNO：8所示的DNA分子。本专利技术还保护引物探针组合2，由引物探针组丙和引物探针组丁组成；引物探针组丙，由SEQIDNO：1所示的引物HCMV-F、SEQIDNO：2所示的引物HCMV-R和SEQIDNO：11所示的探针HCMV-P2组成；引物HCMV-F、引物HCMV-R和探针HCMV-P2均为单链DNA分子；引物探针组丁，由SEQIDNO：4所示的引物IC-F、SEQIDNO：5所示的IC-R和SEQIDNO：12所示的探针IC-P2组成；引物IC-F、引物IC-R和探针IC-P2均为单链DNA分子。引物HCMV-F、引物HCMV-R、探针HCMV-P2、引物IC-F、引物IC-R和探针IC-P2的摩尔配比具体为0.1:0.1:40:0.1:0.1:40。所述引物探针组合2为基于质谱检测的引物探针组合。本专利技术还保护所述引物探针组合2在制备试剂盒Ⅳ中的应用。本专利技术还保护试剂盒Ⅳ，含有所述引物探针组合2。所述试剂盒Ⅳ的用途为如下(a)或(b)：(a)鉴定人巨细胞病毒；(b)检测生物样本中是否含本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种引物探针组，由SEQ ID NO：1所示的引物HCMV-F、SEQ ID NO：2所示的引物HCMV-R和探针HCMV-P1组成；引物HCMV-F和引物HCMV-R均为单链DNA分子；探针HCMV-P1为单链DNA分子，核苷酸如SEQ ID NO：3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种引物探针组，由SEQIDNO：1所示的引物HCMV-F、SEQIDNO：2所示的引物HCMV-R和探针HCMV-P1组成；引物HCMV-F和引物HCMV-R均为单链DNA分子；探针HCMV-P1为单链DNA分子，核苷酸如SEQIDNO：3所示。


2.一种引物探针组，由SEQIDNO：1所示的引物HCMV-F、SEQIDNO：2所示的引物HCMV-R和SEQIDNO：11所示的探针HCMV-P2组成；引物HCMV-F、引物HCMV-R和探针HCMV-P2均为单链DNA分子。


3.权利要求1或2所述引物探针组在制备试剂盒中的应用；所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)：
(a)鉴定人巨细胞病毒；
(b)检测生物样本中是否含有人巨细胞病毒。


4.一种试剂盒，含有权利要求1或2所述引物探针组；所述试剂盒的用途为如下(a)或(b)：
(a)鉴定人巨细胞病毒；
(b)检测生物样本中是否含有人巨细胞病毒。


5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有标准品质粒；所述标准品质粒中具有SEQIDNO：7所示的DNA分子。


6.引物探针组合，由引物探针组甲和引物探针组乙组成；
引物探针组甲，由SEQIDNO：1所示的引物HCMV-F、SEQIDNO：2所示的引物HCMV-R和探针HCMV-P1组成；引物HCMV-F和引物HCMV-R均为单链DNA分子；探针HCMV-P1为单链DNA分子，核苷酸如SEQIDNO：3...

【专利技术属性】
技术研发人员：臧建亮，郝建国，毕少辉，
申请(专利权)人：深圳康美生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44