一种呼吸道症候群病原体核酸检测试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物检测领域，具体涉及吸道症候群病原体核酸检测试剂盒。本发明专利技术的检测试剂盒可以检测多达39种病原体微生物，包括7种人冠状病毒，甲型流感病毒3种亚型，乙型流感病毒2种亚型，副流感病毒3种亚型，呼吸道合胞疱疹病毒2种亚型，鼻病毒，人偏肺病毒，丙型流感病毒，肠道病毒2种，人巨细胞病毒，腺病毒，EB病毒，肺炎支原体，肺炎衣原体，沙眼衣原体，鹦鹉热衣原体，Q热立克次体，肺炎链球菌，肺炎克雷伯菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，A族链球菌，耐甲氧西林葡萄球菌，鲍曼不动杆菌，嗜肺军团菌，流感嗜血杆菌。本发明专利技术具有检测病原体数量多，病原体类型广，特异性好、便于运输和保存的特点。的特点。的特点。

【技术实现步骤摘要】
一种呼吸道症候群病原体核酸检测试剂盒


[0001]本专利技术属于生物检测领域，具体涉及吸道症候群病原体核酸检测试剂盒。

技术介绍

[0002]急性呼吸道感染是临床最常见的疾病之一，发病率居急性传染病的首位，—般由细菌和病毒引起，其中大约90％为呼吸道病毒所导致，这些病原体感染都会导致发热、咳嗽、肺炎或白细胞不明显升高等类似临床症状。在人群中，尤其是儿童中，急性呼吸道感染往往是病毒和细菌混合感染或者继发感染，或单一及多种病毒感染，随着病情的持续发展，混合感染现象较为普遍。这给患者病情的控制和病原体的确定增加了难度。
[0003]呼吸道感染引起的临床症状和体征都较为相似，其临床表现主要为鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃体炎等症状，严重的可引起气管炎、支气管炎及肺炎等，但不同病原体引起的感染，其治疗方法、疗效和病程也不尽相同。目前已证明，大部分呼吸道疾病是由细菌外的病原体引起，其中以呼吸道病毒最常见。呼吸道感染性疾病具有相似的临床症状和流行特征，严重的可能导致重症肺炎、呼吸衰竭，甚至死亡，因此，早诊断、早治疗、早隔离是防止的根本。而只有明确鉴别引起呼吸道感染的病原体后，才便于进行针对性的治疗，提高疗效、降低患者负担，并有效减少抗生物的滥用。
[0004]目前常用的检测呼吸道病原体的检测方法：培养法、血清学检测、分子生物学检测方法等。培养法是诊断细菌性感染和病毒感染最可靠的方法，也是诊断的金标准，但这种方法复杂、操作繁琐、周期长、灵敏度低，对样本的要求比较高，而且易出现假阴性的结果。血清学检测是基于抗原抗体反应原理进行检测，检测周期短，但特异性和灵敏度低，易出现假阴性和假阳性的结果，具有一定的局限性。荧光PCR法是目前临床应用较多的病原早期快速诊断的分子生物学方法，但一次通常只能检测一种病原。基因芯片技术可以实现多病原同时检测，但现有芯片技术基本都是扩增后再杂交，操作较为复杂，耗时较长，而且有个开管取PCR产物的过程，这样使高浓度产物暴露空气中，很容易造成样本间的交叉污染。
[0005]由此可见，通过临床症状和常规的实验室检测很难鉴别确定所感染的病毒种类，而且病毒的培养条件较苛刻，造成培养阳性率低，甚至有些病毒在目前条件下尚不能培养，这给呼吸道感染患者及临床医生带来很大困扰。
[0006]因此，本领域迫切需要一种简便、快速、客观的检测多种呼吸道病原体的方法，同时满足医院门口患者和住院患者检测需求，从而实现明确病原、及早诊断、合理指导临床用药。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供一种呼吸道症候群病原体核酸检测试剂盒，使用5色荧光技术，可以检测多达39种病原体微生物，具体包括人冠状病毒（HCoV
‑
SARS、HCoV
‑
NL63、HCoV
‑
HKU1、HCoV
‑
229E、HCoV
‑
OC43、MERS
‑
CoV、SARS
‑
CoV
‑
2）7种，甲型流感病毒3种亚型（H1N1、H5N1、H7N9），乙型流感病毒2种亚型（Victoria型和Yamagata 型），副流感病毒3种亚型（1、2、3型），呼吸道
合胞疱疹病毒2种亚型（A型和B型），鼻病毒，人偏肺病毒，丙型流感病毒，肠道病毒2种（EV71和CA16），人巨细胞病毒，腺病毒，EB病毒，肺炎支原体，肺炎衣原体，沙眼衣原体，鹦鹉热衣原体，Q热立克次体，肺炎链球菌，肺炎克雷伯菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，A族链球菌，耐甲氧西林葡萄球菌，鲍曼不动杆菌，嗜肺军团菌，流感嗜血杆菌。
[0008]对于上述多种病原体，本专利技术针对性的选择靶基因，并设计特异性引物和探针，具体如下：1.新型冠状病毒（SARS
‑
Cov
‑
2）ORF1ab基因>NC_045512.2 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 isolate Wuhan
‑
Hu
‑
1, complete genomegaatgtcttg acactcgttt ataaagttta ttatggtaat gctttagatc aagccatttc catgtgggct cttataatct ctgttacttc taactactca ggtgtagtta caactgtcatgtttttggcc agaggtattg tttttatgtg tgttgagtat tgccctattt tcttcataactggtaataca cttcagtgta taatgctagt ttattgtttc ttaggctatt tttgtacttgORF1ab
‑
Fwd：5'
‑
TTCCATGTGGGCTCTTATAATC
‑
3'，ORF1ab
‑
Rwd：5'
‑
TCAACACACATAAAAACAATACCTC
‑
3'；ORF1ab
‑
P：5'FAM
‑
TGTTACTTCTAACTACTCAGGTG
‑
BHQ1 3'；2.冠状病毒HCoV
‑
229E ORF1ab基因>NC_002645.1 Human coronavirus 229E, complete genomeTGTGGAACCTTGTATTTAACATACTTTCCATGTTTTCATCTTCATTCTCTGTTGCTGCAATGTCAGGTCAAATTTTACTTAATTGTGCATTAGGTGCTTTTGCTATTTTTTGTTGTTTTCTTGTGACAAAGTTTAGACGCATGTTTGGTGACCTTTCTGTAGGTGTTTGCACTGTTGTTGTGGCTGTTTTGCTTAAC上游引物F：5'
‑
GTTTTCATCTTCATTCTCTGTTGC
‑
3'；下游引物R：5'
‑
TGTCACAAGAAAACAACAAAAAAT
‑
3'；探针P：5'
‑
FAM
‑
CTTAATTGTGCATTAGGTGC
‑
MGB
‑
3'；3.冠状病毒SARS
‑
CoV ORF1ab基因>AY278488.2 SARS coronavirus BJ01, complete genomeGAGTAAAATTTTGGCTTATGTCAAACCATTCTTAGGACAAGCAGCAATTACAACATCAAATTGCGCTAAGAGATTAGCACAACGTGTGTTTAACAATTATATGCCTTATGTGTTTACATTATTGTTCCAATTGTGTACTTTTACTAAAAGTACCAATTCTAGAATTAGAGCTTCA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.吸道症候群病原体核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于检测新型冠状病毒SARS
‑
Cov
‑
2、冠状病毒HCoV
‑
229E、冠状病毒SARS
‑
CoV、冠状病毒HCoV
‑
OC43、冠状病毒MERS
‑
CoV、冠状病毒HKU1、冠状病毒HCoV
‑
NL63、甲型H1N1流感病毒、甲型H5N1流感病毒、甲型H7N9流感病毒、乙型流感病毒Victoria型、乙型流感病毒Yamagata型、丙型流感病毒、副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型、呼吸道合胞疱疹病毒A型、呼吸道合胞疱疹病毒B型、鼻病毒HRV、人偏肺病毒、肠道病毒EV71、肠道病毒CA16、人巨细胞病毒HCMV、腺病毒AD、EB病毒、肺炎支原体MP、肺炎衣原体CP、沙眼衣原体CT、鹦鹉热衣原体、Q热立克次体、肺炎链球菌SA、肺炎克雷伯菌KPN、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌PA、化脓性链球菌、耐甲氧西林葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、嗜肺军团菌LP和流感嗜血杆菌Hi，其中，所述试剂盒包括以下特异性引物，新型冠状病毒SARS
‑
Cov
‑
2的引物：SEQ ID NO. 1.：5'
‑
TTCCATGTGGGCTCTTATAATC
‑
3'，SEQ ID NO. 2：5'
‑
TCAACACACATAAAAACAATACCTC
‑
3'；冠状病毒HCoV
‑
229E的引物:SEQ ID NO. 3：5'
‑
GTTTTCATCTTCATTCTCTGTTGC
‑
3'；SEQ ID NO. 4：5'
‑
TGTCACAAGAAAACAACAAAAAAT
‑
3'；冠状病毒SARS
‑
CoV的引物:SEQ ID NO. 5：5'
‑
GAGTAAAATTTTGGCTTATGTCA
‑
3'；SEQ ID NO. 6：5'
‑
CAATAGTTGTAGGTAGTGAAGCTCT
‑
3'；冠状病毒HCoV
‑
OC43的引物：SEQ ID NO. 7：5'
‑
CTTGTGCTGGAAGGCGT
‑
3'；SEQ ID NO. 8：5'
‑
TTCAAACACTCCACATGCAG
‑
3'；冠状病毒MERS
‑
CoV的引物：SEQ ID NO. 9：5'
‑
GTCCAAAAAGAGTCAGATGAGTAT
‑
3'；SEQ ID NO. 10：5'
‑
ACGACATGCAGGATATTCTTAG
‑
3'；冠状病毒HCoV
‑
HKU1的引物：SEQ ID NO. 11：5'
‑
GTGGTTATCTTATAAGGTGGGTTA
‑
3'；SEQ ID NO. 12：5'
‑
TACGCATTAATATCAAACTGGTT
‑
3'；冠状病毒HCoV
‑
NL63的引物：SEQ ID NO. 13：5'
‑
TTGGGTGTTCGTGTTTTAGAT
‑
3'；SEQ ID NO. 14：5'
‑
CTCAATAGAATCATCCAAAAGC
‑
3'；甲型H1N1流感病毒的引物：SEQ ID NO. 15：5'
‑
GCCCCCTCAAAGCCGA
‑
3'；SEQ ID NO. 16：5'
‑
CGCTCACTGGGCACGG
‑
3'；甲型H5N1流感病毒的引物：SEQ ID NO. 17：5'
‑
GCCCCCTCAAAGCCGA
‑
3'；SEQ ID NO. 18：5'
‑
CGCTCACTGGGCACGG
‑
3'；甲型H7N9流感病毒的引物：SEQ ID NO. 19：5'
‑
GCCCCCTCAAAGCCGA
‑
3'；
SEQ ID NO. 20：5'
‑
CGCTCACTGGGCACGG
‑
3'；乙型流感病毒Victoria型的引物：SEQ ID NO. 21：5'
‑
TTGCAAATCTCAAAGGAACA
‑
3'SEQ ID NO. 22：5'
‑
TGCATTATAGGAAAGCACCC
‑
3'乙型流感病毒Yamagata型的引物：SEQ ID NO. 23：5'
‑
TTGCAAATCTCAAAGGAACA
‑
3'；SEQ ID NO. 24：5'
‑
TGCATTATAGGAAAGCACCC
‑
3'；丙型流感病毒的引物：SEQ ID NO. 25：5'
‑
GACGACTACACACCAGACATCC
‑
3'；SEQ ID NO. 26：5'
‑
AATTTTTAAAGCTGTTCTTCCAC
‑
3'；副流感病毒1型的引物：SEQ ID NO. 27：5'
‑
ACAATCAAAGAGACAATCACAGAA
‑
3'；SEQ ID NO. 28：5'
‑
GATCTCTGCTTTGCTTGTTTAAC
‑
3'；副流感病毒2型的引物：SEQ ID NO. 29：5'
‑
CTAAGTGATGGAATCAATCGC
‑
3'；SEQ ID NO. 30：5'
‑
AGGTCAGTTGTGGCATAATCTT
‑
3'；副流感病毒3型的引物：SEQ ID NO. 31：5'
‑
AAGTCATGTTCTCTAGCACTCCT
‑
3'；SEQ ID NO. 32：5'
‑
TTGTTGAGATTGAGCCATCATA
‑
3'；呼吸道合胞疱疹病毒A 型的引物：SEQ ID NO. 33：5'
‑
GTYTTAACCAGCAAAGTGTTAGA
‑
3'；SEQ ID NO. 34：5'
‑
CACCTGCATTRACACTAAATTCT
‑
3'；呼吸道合胞疱疹病毒B型的引物：SEQ ID NO. 35：5'
‑
GTYTTAACCAGCAAAGTGTTAGA
‑
3'；SEQ ID NO. 36：5'
‑
CACCTGCATTRACACTAAATTCT
‑
3'；鼻病毒HRV的引物：SEQ ID NO. 37：5'
‑
TTGAGTCCTCCGGCCC
‑
3'；SEQ ID NO. 38：5'
‑
AAACACGGACACCCAAAGTA
‑
3'；人偏肺病毒的引物：SEQ ID NO. 39：5'
‑
YGACARTCAARATGATTATGAGTAA
‑
3'；SEQ ID NO. 40：5'
‑
GCTGCTTCATTACCCATGAA
‑
3'；肠道病毒EV71的引物：SEQ ID NO. 41：5'
‑
CGTTCTCAGTGCGGACTG
‑
3'；SEQ ID NO. 42：5'
‑
TAGGTAGTTCTGGTTRCGCATY
‑
3'；肠道病毒CA16的引物：SEQ ID NO. 43：5'
‑
GGCGGAAATGCGAGTT
‑
3'；SEQ ID NO. 44：5'
‑
GTACTGYAGYAATTGGGGGA
‑
3'；人巨细胞病毒HCMV的引物：SEQ ID NO. 45：5'
‑
AGAGGAGACTAGTGTGATGCTG
‑
3'；
SEQ ID NO. 46：5'
‑
AATGTACTGGGCAAAGACCT
‑
3'；腺病毒AD的引物：SEQ ID NO. 47：5'
‑
GACATGACYTTYGAGGTGGA
‑
3'；SEQ ID NO. 48：5'
‑
GTAGACGGCCTCGATGA
‑
3'；EB病毒的引物：SEQ ID NO. 49：5'
‑
CTAACTCCAACGAGGGCAG
‑
3'；SEQ ID NO. 50：5'
‑
GGACCACCTCCAGGTGC
‑
3'；肺炎支原体MP的引物：SEQ ID NO. 51:5'
‑
ACCAATGCCATCAACCC
‑
3'；SEQ ID NO. 52：5'
‑
AGTGATGCCCTTAGCGC
‑
3'；肺炎衣原体CP的引物：SEQ ID NO. 53： 5'
‑
TTCCCTTGCCAACAGACG
‑
3'；SEQ ID NO. 54：5'
‑
GGCTGAGCAATGCGGATGT
‑
3'；沙眼衣原体CT的引物：SEQ ID NO. 55：5'
‑
AATGCAAATCGTTTCCTTG
‑
3'；SEQ ID NO. 56：5'
‑
TTGTGCATTTACGTGAGCTG
‑
3'；鹦鹉热衣原体的引物：SEQ ID NO. 57：5'
‑
TACGGGTTCCGCTCTCTC
‑
3'；SEQ ID NO. 58：5'
‑
GCGTCACACCAAGTAGMG
‑
3'；Q热立克次体的引物：SEQ ID NO. 59：5'
‑
AATACGGACTCACGATGGC
‑
3'；SEQ ID NO. 60：5'
‑
AACACCCGTTTCATCCG
‑
3'；肺炎链球菌SA的引物：SEQ ID NO. 61：5'
‑
ATTGTTGGGAACGGTTG...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳辉，梁智，窦静雅，郝建国，郑文果，毕少辉，
申请(专利权)人：深圳康美生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：