一种检测MLL-AF4融合基因的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测MLL‑AF4融合基因的方法，按照先后顺序依次包括以下步骤：步骤一：样本DNA的获取；步骤二：PCR反应液的配置，用于扩增MLL‑AF4融合基因的引物为：F：5’‑CCGCCCAAGTATCCCTGTAAAAC‑3’；R：3’‑TCGTTATGTATGCGGATCATGTCG‑5’；步骤三：目的条带扩增：以待测样本的DNA为模板，通过设计的引物扩增需要的DNA片段；步骤四：目的DNA回收：对上述PCR反应液进行1％琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带；步骤五：对上述步骤中DNA片段进行纯化处理；步骤六：对纯化后的DNA进行转化；步骤七：测序，判断是否为MLL‑AF4融合基因。该检测MLL‑AF4融合基因的方法设计了适用于PCR扩增的引物，在检测的过程中具有很高的特异性、准确定和灵敏度，且更加快速和高效的扩增出目的条带，且具有可重复性。

【技术实现步骤摘要】
一种检测MLL-AF4融合基因的方法
本专利技术属于生检测
，具体涉及一种检测MLL-AF4融合基因的方法。
技术介绍
MLL(mixedlineageleukemia)基因异常是急性白血病中一种十分常见的染色体异常，大多数发生MLL基因异常的急性白血病的预后很差，其中由t(4；11)(q21；q23)易位而形成的MLL-AF4融合基因是急性淋巴细胞白血病中第二大常见的染色体异常,多数患者对常规化疗耐药，即使做异基因造血干细胞移植也容易复发，是一个独立的预后不良因素。当前国内外广泛使用的分子生物学检测MLL-AF4融合基因的方法中，荧光原位杂交技术(FISH)虽然结果较为直观，但只能进行定性检测且操作复杂，需要荧光显微镜等大型仪器设备和病理医生的诊断意见，对检测机构的要求较严格，不利于临床样本的快速检出。传统的固相生物芯片(Biochip)或基因芯片技术存在着可重复性差、灵敏度不够好以及操作繁琐，成本高的突出弱点。因此我们需要一款新型的检测MLL-AF4融合基因的方法来解决上述问题，满足人们的需求。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测MLL-AF4融合基因的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种检测MLL-AF4融合基因的方法，按照先后顺序依次包括以下步骤：步骤一：样本DNA的获取：通过提取核酸的试剂对样本进行处理，获得待测样本的DNA；步骤二：PCR反应液的配置：分为阳性对照、样本和阴性对照三管，每个管中的反应体系均为20μL，且用于扩增MLL-AF4融合基因的引物为：F：5’-CCGCCCAAGTATCCCTGTAAAAC-3’；R：3’-TCGTTATGTATGCGGATCATGTCG-5’；步骤三：目的条带扩增：以待测样本的DNA为模板，通过设计的引物扩增需要的DNA片段；步骤四：目的DNA回收：对上述PCR反应液进行1％琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带；步骤五：对上述步骤中DNA片段进行纯化处理；步骤六：对纯化后的DNA进行转化；步骤七：测序，判断是否为MLL-AF4融合基因。优选的，所述步骤二中引物序列的浓度为700-800nM。优选的，所述步骤三中将配好的试剂通过PCR仪中来扩增目的条带，其中PCR仪反应参数为：94℃，3min；进入循环程序，94℃，3s；55℃，45s；72℃，30s，循环次数为30次；72℃，10min。优选的，所述步骤一中样本为人和动物组织、新鲜植物组织或者为血液。优选的，所述阳性对照管中样本DNA为MLL-AF4融合基因溶液，且浓度为500拷贝/μL。优选的，所述阴性对照管中样本DNA为ddH2O。优选的，所述步骤二中PCR反应液组成及成分为DNA聚合酶(2×TaqMix)14-17μL、引物序列F1μL、引物序列R1μL、样本DNA1μL、加入ddH2O补至20μL。本专利技术的技术效果和优点：该检测MLL-AF4融合基因的方法设计了适用于PCR扩增的引物，在检测的过程中具有很高的特异性、准确定和灵敏度，且更加快速和高效的扩增出目的条带，且具有可重复性。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例一：一种检测MLL-AF4融合基因的方法，按照先后顺序依次包括以下步骤：步骤一：样本DNA的获取：通过提取核酸的试剂对样本进行处理，获得待测样本的DNA，样本为人和动物组织、新鲜植物组织或者为血液；步骤二：PCR反应液的配置：分为阳性对照、样本和阴性对照三管，每个管中的反应体系均为20μL，阳性对照管中样本DNA为MLL-AF4融合基因溶液，且浓度为500拷贝/μL，阴性对照管中样本DNA为ddH2O，且用于扩增MLL-AF4融合基因的引物为：F：5’-CCGCCCAAGTATCCCTGTAAAAC-3’；R：3’-TCGTTATGTATGCGGATCATGTCG-5’；引物序列的浓度为700-800nM，PCR反应液组成及成分为DNA聚合酶(2×TaqMix)14μL、引物序列F1μL、引物序列R1μL、样本DNA1μL、加入ddH2O补至3μL；步骤三：目的条带扩增：以待测样本的DNA为模板，通过设计的引物扩增需要的DNA片段，将配好的试剂通过PCR仪中来扩增目的条带，其中PCR仪反应参数为：94℃，3min；进入循环程序，94℃，3s；55℃，45s；72℃，30s，循环次数为30次；72℃，10min；步骤四：目的DNA回收：对上述PCR反应液进行1％琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带；步骤五：对上述步骤中DNA片段进行纯化处理；步骤六：对纯化后的DNA进行转化；步骤七：测序，判断是否为MLL-AF4融合基因。实施例二：一种检测MLL-AF4融合基因的方法，按照先后顺序依次包括以下步骤：步骤一：样本DNA的获取：通过提取核酸的试剂对样本进行处理，获得待测样本的DNA，样本为人和动物组织、新鲜植物组织或者为血液；步骤二：PCR反应液的配置：分为阳性对照、样本和阴性对照三管，每个管中的反应体系均为20μL，阳性对照管中样本DNA为MLL-AF4融合基因溶液，且浓度为500拷贝/μL，阴性对照管中样本DNA为ddH2O，且用于扩增MLL-AF4融合基因的引物为：F：5’-CCGCCCAAGTATCCCTGTAAAAC-3’；R：3’-TCGTTATGTATGCGGATCATGTCG-5’；引物序列的浓度为700-800nM，PCR反应液组成及成分为DNA聚合酶(2×TaqMix)15μL、引物序列F1μL、引物序列R1μL、样本DNA1μL、加入ddH2O补至2μL；步骤三：目的条带扩增：以待测样本的DNA为模板，通过设计的引物扩增需要的DNA片段，将配好的试剂通过PCR仪中来扩增目的条带，其中PCR仪反应参数为：94℃，3min；进入循环程序，94℃，3s；55℃，45s；72℃，30s，循环次数为30次；72℃，10min；步骤四：目的DNA回收：对上述PCR反应液进行1％琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带；步骤五：对上述步骤中DNA片段进行纯化处理；步骤六：对纯化后的DNA进行转化；步骤七：测序，判断是否为MLL-AF4融合基因。实施例三：一种检测MLL-AF4融合基因的方法，按照先后顺序依次包括以下步骤：步骤一：样本DNA的获取：通过提取核酸的试剂对样本进行处理，获得待测样本的DNA，样本为人和动物组织、新鲜植物组织或者为血液；步骤二：P本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测MLL-AF4融合基因的方法，其特征在于：按照先后顺序依次包括以下步骤：/n步骤一：样本DNA的获取：通过提取核酸的试剂对样本进行处理，获得待测样本的DNA；/n步骤二：PCR反应液的配置：分为阳性对照、样本和阴性对照三管，每个管中的反应体系均为20μL，且用于扩增MLL-AF4融合基因的引物为：/nF：5’-CCGCCCAAGTATCCCTGTAAAAC-3’；/nR：3’-TCGTTATGTATGCGGATCATGTCG-5’；/n步骤三：目的条带扩增：以待测样本的DNA为模板，通过设计的引物扩增需要的DNA片段；/n步骤四：目的DNA回收：对上述PCR反应液进行1％琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带；/n步骤五：对上述步骤中DNA片段进行纯化处理；/n步骤六：对纯化后的DNA进行转化；/n步骤七：测序，判断是否为MLL-AF4融合基因。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测MLL-AF4融合基因的方法，其特征在于：按照先后顺序依次包括以下步骤：
步骤一：样本DNA的获取：通过提取核酸的试剂对样本进行处理，获得待测样本的DNA；
步骤二：PCR反应液的配置：分为阳性对照、样本和阴性对照三管，每个管中的反应体系均为20μL，且用于扩增MLL-AF4融合基因的引物为：
F：5’-CCGCCCAAGTATCCCTGTAAAAC-3’；
R：3’-TCGTTATGTATGCGGATCATGTCG-5’；
步骤三：目的条带扩增：以待测样本的DNA为模板，通过设计的引物扩增需要的DNA片段；
步骤四：目的DNA回收：对上述PCR反应液进行1％琼脂糖凝胶电泳，回收目的条带；
步骤五：对上述步骤中DNA片段进行纯化处理；
步骤六：对纯化后的DNA进行转化；
步骤七：测序，判断是否为MLL-AF4融合基因。


2.根据权利要求1所述的一种检测MLL-AF4融合基因的方法，其特征在于：所述步骤二中引物序列的浓度为700-800nM。


3.根据权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鹏，唐春花，邢宽，何志健，谢珍，倪海钰，周权，何贵伦，安雪茹，李平，江晓琴，
申请(专利权)人：南京实践医学检验有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32