一种美洲大蠊组织修复因子PA1及其应用制造技术

本发明专利技术涉及药物及日化领域，具体涉及一种促进组织修复的美洲大蠊新多肽及其应用，其结构如式I所示，命名为组织修复因子PA1。该新多肽在较低浓度下即可促进小鼠胚胎成纤维细胞的增殖和人永生化表皮细胞的迁移，毒副作用低，具有良好的应用前景，可用于制备治疗创伤、烫伤、溃疡的药物或改善皮肤美感的化妆品和日化用品。

【技术实现步骤摘要】
一种美洲大蠊组织修复因子PA1及其应用
本专利技术涉及药物及日化领域，具体涉及一种促进组织修复的多肽“组织修复因子PA1”及其应用。
技术介绍
组织创伤后的愈合过程是各种修复细胞增殖、分化、迁移和凋亡的过程。炎症、溃疡、烫伤、创伤、手术以及先天性畸形等多种急慢性损伤可引起大面积皮肤缺损、难愈性溃疡和疤痕，并引发许多局部与全身系统的反应，其危害十分严重。多肽药物在促进创面愈合、预防疤痕及治疗慢性溃疡方面具有独特优势。其中表皮生长因子(hEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等多肽具有明显的修复创伤、护肤、抗皱和防衰老作用，但它们的制备成本高、稳定性较差，限制了其应用。美洲大蠊(PeriplanetaamericanaL.)为节肢动物门昆虫纲蜚蠊目蜚蠊科(Blattidae)大蠊属(Peripalneta)昆虫，俗称蟑螂，在我国广泛分布。作为一种传统中药，美洲大蠊具有悠久的入药历史，最早记录于《神农本草经》，称为蜚廉，用于治疗疮痈肿毒、小儿疳积等症。现代药理学研究表明，美洲大蠊具有明显的促进组织修复再生、抗肿瘤及抗肝炎作用(中国中药杂志,2007,32:2326-2331)。以美洲大蠊为主要原料制成的药物康复新液在治疗创伤、烫伤和消化道溃疡等方面具有良好疗效，但其有效成分有待深入研究。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种促进组织修复的新多肽“组织修复因子PA1”。本专利技术的另一目的在于提供上述新多肽的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种促进组织修复的美洲大蠊新多肽，命名为“组织修复因子PA1(TissuerepairfactorPA1)”，其结构如式I所示：pGlu-Val-Leu-Val-Ser-Pro-Ala-Phe-Tyr-Gly-Val-Val-Pro-Ala-Val-Val-Pro-Ala-Val-Gln-Pro-Gly-Tyr-Val-Ala-Ala-Thr-Arg-Gly-Ser-Leu-His-Val-Ala-Pro-Leu-Pro-Gly-Asn-Val-Pro-Tyr-Ala-Ser-His-His-Leu-Asn-Leu-Ala-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu式I；所述的组织修复因子PA1的制备方法，包含以下步骤：用含水乙醇提取粉碎或未粉碎的美洲大蠊虫体，提取物浓缩，加入10倍体积热水，保温静置分层，弃去上层油液。水溶液浓缩后经反相C-18柱色谱，采用液相色谱-质谱(HPLC-MS)方法分析跟踪检测，收集含多肽化合物的流份。总多肽再通过凝胶柱色谱和反相制备型HPLC分离纯化，真空冷冻干燥得到组织修复因子PA1冻干粉。所述的热水的温度优选为70℃；所述的组织修复因子PA1的制备，还可采用现有技术中的公知方法进行，既可以用多肽合成仪进行化学合成，也可以通过将多肽序列推导出核苷酸序列，然后克隆到表达载体中进行生物合成；所述的组织修复因子PA1在制备促进组织修复或改善皮肤美感的产品中的应用；优选的，所述的组织修复因子PA1在制备治疗创伤、烫伤、溃疡或改善皮肤美感的产品中的应用；所述的产品优选为药物、化妆品或日化用品；所述的药物、化妆品或日化用品中含有有效剂量的组织修复因子PA1，余量为辅料或其它可配伍的药物；所述的辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂和粘合剂等；所述的其它可配伍的药物，是指其它天然药物、化学药品或生物药物；所述的药品、化妆品或日化用品可以采用片剂、胶囊剂、注射剂、脂质体纳米粒、控释剂、凝胶膏剂、软膏剂、外用搽剂、贴剂(例如面膜)、霜剂(例如面霜)、洗涤剂(例如香波、香皂、泡沫浴或浴盐)、乳液、凝胶、爽肤水等；本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本专利技术从美洲大蠊中分离和鉴定了一种新多肽化合物，即组织修复因子PA1，其结构如式I所示。(2)本专利技术的组织修复因子PA1可促进小鼠胚胎成纤维细胞的增殖和人永生化表皮细胞的迁移，具有促进组织修复作用。(3)本专利技术的组织修复因子PA1可用于治疗消化道溃疡、口腔溃疡，并具有美白，去除皱纹、疤痕和色斑作用。(4)本专利技术的组织修复因子PA1的毒性较低，在口服200mg/kg剂量下未观察到明显的毒副作用。(5)本专利技术的组织修复因子PA1可以合成，易于大量制备。附图说明图1组织修复因子PA1的高分辨质谱图；图2组织修复因子PA1经DTT还原、IAM烷基化后的HPLC-MS图；图3组织修复因子PA1经胰蛋白酶酶解后的HPLC-MS图；图4组织修复因子PA1酶解后的肽段PA1a氨基酸测序谱图；图5组织修复因子PA1酶解后的肽段PA1b氨基酸测序谱图；图6组织修复因子PA1酶解后的肽段PA1a的MS，MS2质谱图；图7组织修复因子PA1酶解后的肽段PA1b的MS，MS2质谱图；图8分离与合成所得组织修复因子PA1的HPLC-MS对比图；图9组织修复因子PA1对Balb/c3T3细胞增殖影响的结果分析图；图10组织修复因子PA1对Hacat细胞迁移影响的结果分析图。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。以下实施方式涉及的液相色谱-质谱(HPLC-MS)分析的条件如下：仪器：Agilent6210LC/MSDTOF液质联用仪，质量范围(m/z)：100-1700，采集模式：正离子模式，GasTemp:300℃，DringGas:11L/min，Nebulizer:35psig，Vcap:2000V，Fragmentor:175V，Skimmer:65V。分析柱为YMCC-8色谱柱(4.6×250mm,5μm)，色谱条件：流动相A(体积分数0.1％的甲酸水)，流动相B(乙腈)，0min(A:B＝95:5)至90min(A:B＝10:50)梯度洗脱。以下实施方式涉及的二级质谱分析的条件如下：仪器：ABSCIEXTripleTOF5600+，质量范围：100-3000，采集模式：正离子模式，Curtaingas:40psi，Ionsourcegas1:55psi，Ionsourcegas2:55psi，Temperature:550℃，Ionvoltagefloating:5500V，Declusteringpotential:80V，Collisionenergy:40V。实施例1组织修复因子PA1的分离和结构鉴定(1)美洲大蠊药材1kg，粉碎成粗粉，用3倍质量的80％(v/v)乙醇溶液渗漉提取3次，每次24小时；合并提取液，减压浓缩至稠膏200～300mL，加入10～15倍体积热水(70℃)，保温静置12小时，分层，弃去上层油液。水溶液浓缩后上样于反相C-18色谱柱，先用体积百分比为30％甲醇洗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种促进组织修复的美洲大蠊多肽，所述多肽为组织修复因子PA1(Tissue repairfactor PA1)，其结构如式I所示：/npGlu-Val-Leu-Val-Ser-Pro-Ala-Phe-Tyr-Gly-Val-Val-Pro-Ala-Val-Val-Pro-Ala-Val-Gln-Pro-Gly-Tyr-Val-Ala-Ala-Thr-Arg-Gly-Ser-Leu-His-Val-Ala-Pro-Leu-Pro-Gly-Asn-Val-Pro-Tyr-Ala-Ser-His-His-Leu-Asn-Leu-Ala-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu/n式I。/n

【技术特征摘要】
1.一种促进组织修复的美洲大蠊多肽，所述多肽为组织修复因子PA1(TissuerepairfactorPA1)，其结构如式I所示：
pGlu-Val-Leu-Val-Ser-Pro-Ala-Phe-Tyr-Gly-Val-Val-Pro-Ala-Val-Val-Pro-Ala-Val-Gln-Pro-Gly-Tyr-Val-Ala-Ala-Thr-Arg-Gly-Ser-Leu-His-Val-Ala-Pro-Leu-Pro-Gly-Asn-Val-Pro-Tyr-Ala-Ser-His-His-Leu-Asn-Leu-Ala-Pro-Ala-Pro-Gly-Thr-Leu
式I。


2.权利要求1所述的美洲大蠊多肽在制备促进组织修复或改善皮肤美感的产品中的应用。


3.根据权利要求2所述的美洲大蠊多肽在制备促进组织修复或改善皮肤美感的产品中的应用，其特征在于：
所述的产品为药物、化妆品或日化用品。


4.一种含有促进组织修复的美洲大蠊多肽的组合物，其特征在于，所述多肽为组织修复因子PA1(TissuerepairfactorPA1)，其结构如式I所示：
pGlu-Val-Leu-Val-Ser-Pro-Ala-Phe-Tyr-Gly-Va...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶文才，王磊，范春林，曹佳青，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：广东;44