一种预防药物性颌骨坏死的药物制造技术

本发明专利技术公开了一种预防药物性颌骨骨坏死的药物，它以DNA四面体为有效成分。本发明专利技术通过实验表明，DNA四面体可以逆转唑来膦酸、地塞米松等药物对破骨细胞的抑制作用，且能较好地预防药物性颌骨坏死。

【技术实现步骤摘要】
一种预防药物性颌骨坏死的药物
本专利技术涉及一种预防药物性颌骨坏死的药物。
技术介绍
双膦酸盐(bisphosphonates，BPs)是用于各类骨疾患及钙代谢性疾病的一类新药物。能特异的与骨质中的羟膦灰石结合，抑制破骨细胞活性，从而抑制骨质吸收。用于治疗骨质疏松症，变形性骨炎，恶性肿瘤骨转移引起的高钙血症和骨痛症等。近年来，越来越多的报道显示，BPs使用可能导致药物性颌骨坏死(MRONJ)，是MRONJ的主要诱因。该病临床上以骨面裸露、死骨形成、疼痛、口臭等为特征。由于MRONJ发病机理不明确，临床上尚无完全有效的治疗方法。DNA四面体框架核酸(TFNAs)是一种由DNA单链通过碱基互补配对自组装形成的四面体纳米结构，通常是由DNA单链(通常为4条，也可为4条以上)围成4个三角形，每个三角形作为四面体的一个面，每两个三角形各有1条边互补配对形成双链，构成四面体的一条棱，由此组成四面体结构，因此也被称为“DNA四面体”。TFNAs生物相容性高，没有细胞毒性，已有报道将其用于转运核酸(如：适配体、siRNA等)、阿霉素等物质，是一种具有良好应用前景的药物载体。目前未见TFNAs作为药物的活性成分，用于预防药物性颌骨骨坏死的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是：提供一种预防药物性颌骨坏死的药物。本专利技术的技术方案如下：一种预防药物性颌骨坏死的药物，所述药物以DNA四面体为活性成分。如前述的药物，所述DNA四面体是用等物质的量的序列如SEQIDNO.1～4所述的4条DNA单链通过碱基互补配对形成的四面体结构分子。如前述的药物，所述DNA四面体是将所述DNA单链先经过加热变性，再冷却复性制备得到；优选的，所述加热变性的温度是95摄氏度，时间为5分钟。优选的，所述冷却复性的温度是4摄氏度，时间为20分钟以上。DNA四面体在制备预防药物性颌骨坏死的药物中的用途。如前述的用途，所述预防药物性颌骨坏死的药物是促进破骨细胞形成和/或维持破骨细胞的骨吸收功能的药物。如前述的用途，所述预防药物性颌骨坏死的药物是提高骨矿物质密度、增加骨量的药物。如前述的用途，所述药物性颌骨坏死是由双膦酸盐类药物引起的。如前述的用途，所述药物性颌骨坏死是由唑来膦酸引起的。如前述的用途，所述DNA四面体是用等物质的量的序列如SEQIDNO.1～4所述的4条DNA单链通过碱基互补配对形成的四面体结构分子。如前述的用途，所述DNA四面体是将所述DNA单链先经过加热变性，再冷却复性制备得到；优选的，所述加热变性的温度是95摄氏度，时间为5分钟。优选的，所述冷却复性的温度是4摄氏度，时间为20分钟以上。双膦酸盐类药物被广泛应用，很多患者因此遭受药物性颌骨坏死的折磨。专利技术人研究发现，DNA四面体可以通过促进破骨细胞的形成(由单核巨噬细胞分化成破骨细胞)，维持破骨细胞骨吸收功能，抑制双磷酸盐药物对骨质的破坏，预防骨坏死的发生。将DNA四面体用于制备预防药物性颌骨坏死的药物，具有重要的应用价值。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1：DNA四面体的合成验证图。A，合成示意图；B，动态光散射结果；C，PAGE胶检测结果；D，细胞摄入实验结果。图2：DNA四面体框架核酸对增殖迁移的影响图。A，ZA浓度与细胞活性的关系；B，DNA四面体与ZA共同处理下的细胞活性；C，DNA四面体与ZA共同处理下细胞迁移能力统计图；D，细胞迁移能力检测图。图3：DNA四面体可以促进破骨细胞的分化与功能。A，免疫荧光结果；B，造孔试验结果；C，TRAP染色结果。图4：Wnt信号通路相关蛋白的检测图。A，westernblotting检测图；B～F，将A图信号数字化后的统计图。图5：动物实验大体观与Micro-CT的结果图。A，直接观察图；B，Micro-CT检测图举例；C，BMD统计结果；D，BV/TV统计结果；E，愈合大鼠数量统计结果。具体实施方式实施例1本专利技术复合物的制备和验证1.TFNAs的制备将四条DNA单链(S1、S2、S3、S4)溶解于TMBuffer(10mMTris-HCl,50mMMgCl2,pH＝8.0)中，四条DNA单链的终浓度为1000nM，充分混合，迅速加热至95℃保持10分钟，之后迅速降温至4℃并维持20分钟以上，即可得到TFNAs。合成示意图如图1A所示。在需要荧光标记时，可在任一DNA单链的5’端连接荧光基团，例如Cy5。四条单链的序列(5′→3′)如下：2.鉴定合成后的DNA四面体，PAGE胶结果可见DNA四面体大小约为180bp，可认为DNA四面体已成功合成(图1C)。动态光散射结果可见，DNA四面体大小为15nm左右，与理论值相符(图1B)。以下用实验例的形式对本专利技术的有益效果进一步说明。实验例中的DNA四面体(TFNAs)均使用实施例1的方法制备得到。实验例1体外模型实验1.方法1.1构建BRONJ体外模型取对数生长期的RAW264.7细胞(一种单核巨噬细胞)，分为Control组、ZA(唑来膦酸)组、TFNAs+ZA组。细胞贴壁生长24h时，三组处理条件分别如下:a)Control组：5％血清培养基，50ng/mlRANKL(核因子κB受体活化因子配体，又称“破骨细胞分化因子”)供应；b)ZA组：含5％血清的培养基，同时加入10μMZA和50ng/mlRANKL；c)含5％血清的培养基，加入50ng/mlRANKL、10μMZA和250nMTFNAs，持续120h(每2天更换一次培养基)。在本实验例中，RANKL的作用是：促进RAW264.7细胞分化形成破骨细胞。1.2CCK8细胞毒性实验将RAW264.7细胞分组培养于96孔板(5×103/孔)中，按1.1的方法进行分组处理。再去除培养基，PBS冲洗一次，然后加入无血清DMEM培养基与10％(v/v)CCK-8溶液，在37℃孵育2小时后，在450nm波长下检测样品的OD值。1.3细胞摄取TFNAs细胞被播种到共聚焦小中皿24h。随后,这些细胞用10μM的ZA,50ng/mlRANKL和250nMCy5标记的TFNAs或250nMCy5标记的ssDNA处理6h。用PBS三洗后,这些细胞用4％多聚甲醛固定。然后，用DAPI和phalloidin染色细胞核和细胞骨架。所有样品均用共聚焦显微镜观察并摄取图像。1.4Transwell本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种预防药物性颌骨坏死的药物，其特征在于：所述药物以DNA四面体为活性成分。/n

【技术特征摘要】
1.一种预防药物性颌骨坏死的药物，其特征在于：所述药物以DNA四面体为活性成分。


2.如权利要求1所述的药物，其特征在于：所述DNA四面体是用等物质的量的序列如SEQIDNO.1～4所述的4条DNA单链通过碱基互补配对形成的四面体结构分子。


3.如权利要求2所述的药物，其特征在于：所述DNA四面体是将所述DNA单链先经过加热变性，再冷却复性制备得到；
优选的，所述加热变性的温度是95摄氏度，时间为5分钟；
优选的，所述冷却复性的温度是4摄氏度，时间为20分钟以上。


4.DNA四面体在制备预防药物性颌骨坏死的药物中的用途。


5.如权利要求4所述的用途，其特征在于：所述预防药物性颌骨坏死的药物是促进破骨细胞形成和/或维持破骨细胞的骨吸收功能的药物。

【专利技术属性】
技术研发人员：林云锋，崔伟同，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51