一种简易可视化的转基因植物筛选系统及其应用技术方案

本发明专利技术公开了一种简易可视化的转基因植物筛选方法及其应用。本发明专利技术所提供的一种简易可视化的转基因植物筛选方法为含有可视化标记基因的植物表达载体，所述含有可视化标记基因的植物表达载体为花青素生物合成途径中的重要调控基因AtPAP2。本发明专利技术将颜色调控基因应用到植物遗传转化操作上，有效减轻了转化后的筛选工作，根据该基因在植株上的表现，可有选择的保留有价值的转化材料，从而大大节省筛选时间和研究经费，且实验结果的准确度和可信度大大提高，这为开展转化后分析工作奠定了很好的基础。另外，本发明专利技术利用颜色基因的瞬时表达，可更为直观地对转化效果进行可视化分析，从而避免各种影响转化因素的发生。

【技术实现步骤摘要】
一种简易可视化的转基因植物筛选系统及其应用
本专利技术涉及转基因植物领域，具体为一种简易可视化的转基因植物筛选系统及其应用。
技术介绍
花青素是一类在植物中广泛存在的次级代谢产物，属于黄酮类物质。在自然界中花青素赋予了花草、树木多彩缤纷的颜色，有助于其吸引各种昆虫媒介进行授粉、种子传播，同时，花青素在植物抵抗各种逆境胁迫等方面也具有较为重要的作用。现代医学研究表明，花青素在治疗心脏病和癌症，清除自由基、抗氧化、抗衰老等方面具有重要疗效[4]，因而关于花青素的研究也越来越受到人们的重视。因此用花青素代替传统的筛选标记是安全的。目前传统的转基因实验主要nptII为筛选标记，gus或gfp为报告基因，筛选效率低、准确性差。报告基因用于检测转化事件。理想的报告基因应具有易检测、低内源背景、易定量分析等特点，检测过程不应对植株造成损伤。常用的报告基因有beta-葡萄糖苷酸酶，萤火虫荧光素酶，绿色荧光蛋白等。虽然目前有很多种方法检测是否为转基因植株，但是以花青素基因作为遗传转化的报告基因优势明显：无需筛选条件、无需进行组织化学检测或特殊的仪器设备、肉眼即可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种简易可视化的转基因植物筛选方法，其特征在于，具体包括以下步骤：/n步骤a.得到AtPAP2基因；/n步骤b.将AtPAP2基因转接入pMD18-T载体中，得到pMD18-PAP2；/n步骤c.将步骤b得到pMD18-PAP2转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，得到含有pMD18-PAP2的大肠杆菌DH5α；/n步骤d.提取pMD18-PAP2和植物表达载体pGNP的质粒DNA，分别进行限制性酶切反应并回收目的片段后进行连接反应后，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，得到重组质粒DNA，命名为pGNP-PAP2；/n步骤e.将步骤d得到的pGNP-PAP2转入农杆菌EHA105感受态细胞；/...

【技术特征摘要】
1.一种简易可视化的转基因植物筛选方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
步骤a.得到AtPAP2基因；
步骤b.将AtPAP2基因转接入pMD18-T载体中，得到pMD18-PAP2；
步骤c.将步骤b得到pMD18-PAP2转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，得到含有pMD18-PAP2的大肠杆菌DH5α；
步骤d.提取pMD18-PAP2和植物表达载体pGNP的质粒DNA，分别进行限制性酶切反应并回收目的片段后进行连接反应后，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，得到重组质粒DNA，命名为pGNP-PAP2；
步骤e.将步骤d得到的pGNP-PAP2转入农杆菌EHA105感受态细胞；
步骤f.将步骤e得到的含有pGNP-PAP2的农杆菌EHA105浸染并将其导入受体植物细胞中。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述AtPAP2基因是以拟南芥cDNA为模板，利用引物对pPAP2-F和pPAP2R进行PCR扩增获取的，所述pPAP2-F核苷酸序列为：
5’-ATGGAGGGTTCGTC...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚伟，黄振，段真珍，周宇明，李慧雪，张木清，
申请(专利权)人：广西大学，
类型：发明
国别省市：广西;45