用于引发对免疫原的免疫响应的方法技术

本发明专利技术涉及用于引发对免疫原的免疫响应的方法，特别是，涉及使用聚合物囊泡作为免疫原的载体的这样的方法。

【技术实现步骤摘要】
用于引发对免疫原的免疫响应的方法本申请是申请日为2013年11月11日，题为《用于引发对免疫原的免疫响应的方法》的中国专利申请201380070982.5的分案申请。相关申请的交叉参考本申请要求于2012年11月19日提交的新加坡专利申请第201208483-6号的优先权的权益，出于所有目的其内容在此通过引用以其整体并入。
本专利技术涉及用于引发对免疫原的免疫响应的方法，特别是，涉及使用聚合物囊泡(polymersome)作为免疫原的载体的这样的方法。
技术介绍
虽然免疫是一个成熟的过程，然而在不同的免疫原或抗原(本文可互换使用)之间引发的响应水平存在差异。有趣的是，膜蛋白形成一类产生低响应水平的抗原，这又意味着需要大量的膜蛋白以便产生或诱发达到所要求的水平的免疫响应。膜蛋白是众所周知地难以合成并且在不存在洗涤剂的情况下不溶于水。这使得它昂贵且难以获得足够用于免疫用途的量的膜蛋白。此外，膜蛋白质需要适当的折叠以便正常地发挥功能。正确折叠的膜蛋白的免疫原性比未以生理相关的方式折叠的溶解的膜蛋白更好。因此，即使佐剂可用于增强这种溶解的膜蛋白的免疫原性，它仍是一种不提供过多的优点的低效的方法。此外，产生针对膜蛋白的抗体的普通程序通常需要它们在膜内的天然结构的先验知识以便设计可用于免疫的合适的表位。这种免疫通常利用分离的肽独立地实施，该分离的肽可以采用与在其天然的膜产地中的完整的蛋白质中出现的构象非常不同的构象。因此，存在很高的风险，即由分离的肽产生的抗体可能终究无法识别体内的靶蛋白。虽然转染的细胞和基于脂质的系统已被用于呈递膜蛋白抗原以增加分离可能在体内有效的抗体的机会，然而这些系统经常不稳定，冗长和昂贵。再者，这种膜蛋白抗原的本领域当前状态是使用无活性的病毒样颗粒来免疫。因此，仍然需要提供克服或至少减轻上述问题的替代方法。
技术实现思路
本文描述的专利技术提供了一种利用蛋白聚合物囊泡(proteopolymersome)呈递膜蛋白以诱发免疫响应而无需添加已知的佐剂的方法。本专利技术人惊奇地发现，通过提供聚合物囊泡的周膜(circumferentialmembrane)以允许膜蛋白抗原适当地折叠，可以诱发相比于游离膜蛋白抗原更强的免疫响应。结果，实现受试者如哺乳动物中抗体产生的效率增加。可以使用或不使用佐剂达到效率的增加。由于呈递全长和适当地折叠的膜蛋白抗原，通过利用本文描述的专利技术产生的抗体也会对体内膜蛋白靶具有更高的亲和力，并且如果产生针对病毒抗原的抗体，那么可能能够中和病毒。因此，根据本专利技术的一个方面，它公开了一种用于在受试者中引发对免疫原的免疫响应的方法。该方法可以包括用包含具有两亲聚合物的周膜的聚合物囊泡载体的组合物注射所述受试者。所述组合物还包含整合到所述聚合物囊泡载体的所述两亲聚合物的周膜内的免疫原。所述免疫原可以为膜相关蛋白或脂质抗原。在本专利技术的另一个方面，提供了一种用于免疫原的皮内，腹腔内，皮下，静脉内，或肌内注射，或非侵入性给药的组合物。所述组合物可以包含具有两亲聚合物的周膜的聚合物囊泡载体。所述组合物还可以包含整合到所述聚合物囊泡载体的所述两亲聚合物的周膜内的免疫原。所述免疫原可以是膜相关蛋白或脂质抗原。所述组合物可以用在抗体发现，疫苗发现，或靶向递送中。附图说明在附图中，不同视图中的类似的参考字符通常指相同的部件。附图不一定按比例绘制，相反，重点通常放在说明各种实施方案的原理。在下面的描述中，参照下列附图说明本专利技术的各种实施方案。图1示出α-溶血素浓度的标准曲线。图2A示出使用α-溶血素包被的板的抗体滴度O.D.测量的光密度测量。用α-溶血素呈递聚合物囊泡注射3只小鼠(标记为“Ves-Hemo”的实心方块)，而另外3只小鼠接受空聚合物囊泡(标记为“Ves.单独”的空心三角形)。稀释血清(1：1000)并且抗小鼠HRP偶联抗体用作第二抗体。伴随着反复免疫随着时间观察到增加的抗α溶血素滴度。图2B示出使用非包被的板的与图2A同样的实验程序。未检测到抗体结合。图3示出免疫响应的光密度测量。直到第三次放血，α-溶血素呈递聚合物囊泡(标记为“Ves+Hemo”的实心方块)产生比游离的α-溶血素(标记为“Hemo”的空心方块)更高的响应，之后两者都实现免疫响应的饱和。有趣的是，具有佐剂的α-溶血素(标记为“Hemo+adj”的空心圆)产生比游离的α-溶血素低的免疫响应。空聚合物囊泡(标记为“Ves”的空心三角形)仍然无免疫原性。图4示出免疫响应的光密度测量。当实施皮内注射时，在第二次和第三次放血两者中α-溶血素呈递聚合物囊泡(标记为“Ves-Hemo”的实心方块)引发比游离的α-溶血素(标记为“游离Hemo”的空心方块)更高的免疫响应。图5示出血凝素(HA)浓度的标准曲线。图6示出用于HA-插入的和空(对照)的聚合物囊泡的ELISA。图7示出抗体滴度的光密度测量。在100ngHA的等效剂量下，加强(第二次放血)之后，HA聚合物囊泡(三角形)引发比游离HA(圆圈)更高的免疫响应(***P<0.001相对于PBS组)。未包被的孔没有检测到抗体结合。描述下面的详细描述以说明的方式引用显示具体细节和其中可以实践本专利技术的实施方案的附图。这些实施方案被足够详细地描述以使本领域的技术人员能够实践本专利技术。可以利用其他实施方案并且可以进行结构，逻辑及电方面的改变而不偏离本专利技术的范围。各种实施方案并不一定是相互排斥的，因为一些实施方案可以与一个或多个其它实施方案结合以形成新的实施方案。在本文中，聚合物囊泡是具有聚合物膜的囊泡，其通常但不一定总是由两亲嵌段共聚物的稀溶液自组装形成，该两亲嵌段共聚物可以是不同的类型，如二嵌段和三嵌段(A-B-A或A-B-C)。聚合物囊泡也可以由四嵌段或五嵌段共聚物形成。对于三嵌段共聚物，中央嵌段通常通过其侧翼的嵌段从环境屏蔽，而二嵌段共聚物自组装成双层，尾对尾放置两个疏水性嵌段，很大程度上是为了达到同样的效果。在大多数情况下，囊泡膜具有不溶性中间层和可溶性外层。自组装诱发的聚合物囊泡形成的驱动力被认为是不溶性嵌段的微相分离，所述不溶性嵌段为了保护自身不与水接触而易于结合(associate)。由于组分共聚物的大分子量，聚合物囊泡具有显著的特性。嵌段共聚物的总分子量的增加有利于囊泡形成。其结果是，与通过脂质和表面活性剂形成的囊泡相比，(聚合的)两亲物在这些囊泡中的扩散非常低。由于聚集在囊泡结构中的聚合物链的这种较小的流动性，能够获得稳定的聚合物囊泡形态。除非另有明确说明，否则术语“聚合物囊泡”和“囊泡”，如下文所用，视为类似的并且可以互换使用。在本文中，抗原是可以被免疫系统的成分特异性地结合的任何物质并且只有能够引发(或诱发或诱导)免疫响应的抗原被认为是免疫原性的并且被称为免疫原。膜蛋白形成一类产生低响应水平的抗原。特别有趣的是，膜相关蛋白(即，本文所述的抗原)被整合(或掺入或携带)到聚合物囊泡的壁内，从而允许所述膜相关蛋白以生理相关本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种组合物在制备用于在受试者中引发对免疫原的免疫响应的药物组合物中的用途，所述组合物包含具有两亲聚合物的周膜的聚合物囊泡载体和整合到所述聚合物囊泡载体的所述两亲聚合物的周膜内的免疫原，其中，所述免疫原为膜相关蛋白或脂质抗原。/n

【技术特征摘要】
20121119 SG 201208483-61.一种组合物在制备用于在受试者中引发对免疫原的免疫响应的药物组合物中的用途，所述组合物包含具有两亲聚合物的周膜的聚合物囊泡载体和整合到所述聚合物囊泡载体的所述两亲聚合物的周膜内的免疫原，其中，所述免疫原为膜相关蛋白或脂质抗原。


2.根据权利要求1所述的用途，包括通过注射或非侵入性给药施用所述组合物。


3.根据权利要求2所述的用途，其中，所述注射包括皮内、腹腔内、皮下、静脉内或肌内，或非侵入性给药。


4.根据权利要求1至3中的任一项所述的用途，其中，所述膜相关蛋白是跨膜蛋白，G蛋白偶联受体，神经递质受体，激酶，孔蛋白，ABC转运体，离子转运体，乙酰胆碱受体，或细胞粘附受体。


5.根据权利要求1至4中的任一项所述的用途，其中，所述免疫原为合成脂质或天然脂质。

【专利技术属性】
技术研发人员：马达范·纳拉尼，法比安·德卡约，傅智康，苏杏芳，
申请(专利权)人：新加坡科技研究局，
类型：发明
国别省市：新加坡;SG