一种金钗石斛多糖、其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种金钗石斛多糖、其制备方法及应用，其平均分子量范围为2.56×10

【技术实现步骤摘要】
一种金钗石斛多糖、其制备方法及应用
本专利技术涉及农药
，具体来说涉及一种金钗石斛多糖，同时还涉及该金钗石斛多糖的制备方法，以及该金钗石斛多糖在防治烟草花叶病毒病、黄瓜花叶病毒病和马铃薯Y病毒病中的应用。
技术介绍
植物病毒病是对植物危害最严重的病害，其中烟草花叶病毒(TMV)、马铃薯Y病毒(PVY)和黄瓜花叶病毒(CMV)是几种危害最严重的病毒。它们的寄主非常广泛，例如马铃薯、黄瓜、烟草、辣椒等其他经济作物。这三种病害的泛滥给农业造成了严重的损失。目前，合成农药依然是防控植物病害的主要方法，而高毒、高污染和高残留的农药的使用给环境和人类的健康带来了极大的危害，如盐酸吗啉胍对心肌细胞有一定的毒性，并且使有丝分裂指数降低，微核率和染色体畸变率升高。因此从自然界中寻找高效、低毒、环境友好具有抗病毒活性的物质已成为我国植物保护领域一个亟待解决的问题。多糖是一种重要的大分子物质，具有广泛的生物活性，例如增强免疫、降血压、抗氧化性、抗病毒、抗癌和抗衰老等。因此多糖在医药和农药领域具有广阔的发展前景，是目前研究的一个热点。金钗石斛是一种兰科属植物，是珍贵的中药材，很早就被《中国药典》收录。在中国金钗石斛主要分布在贵州、四川、广西和云南，其中贵州赤水的金钗石斛因其优良的品质最为著名。近几十年，贵州赤水金钗石斛种植规模已近4467公顷，占国内种植面积90％，每年都有大量的金钗石斛及其产品被源源不断的销售到世界各地。目前，已经有文献对金钗石斛多糖进行报道，主要集中在其医药领域的活性，包括增强免疫、抗肿瘤和抗氧化等活性。然而，对其农药领域的活性却未见报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服上述缺点而提供的一种能防治烟草花叶病毒病、黄瓜花叶病毒病和马铃薯Y病毒病，且制备方法简单的金钗石斛多糖。本专利技术的另一目的在于提供该金钗石斛多糖的制备方法。本专利技术的再一目的是提供该金钗石斛多糖在防治烟草花叶病毒病、黄瓜花叶病毒病和马铃薯Y病毒病中的应用。本专利技术的一种金钗石斛多糖，其平均分子量范围为2.56×103--1.39×107Da。本专利技术的一种金钗石斛多糖的制备方法包括以下步骤：(1)将新鲜金钗石斛的水分烘干，用100℃沸水对干燥的金钗石斛进行提取，按水/金钗石斛＝10/1(V/W)的比例提取3h，重复提取三次，然后将提取物进行微波干燥，获得金钗石斛粗糖；(2)将400g金钗石斛粗糖溶解至水中，用1000mL蒸馏水悬浮，然后用4L乙酸乙酯萃取三次；再用3L正丁醇萃取三次，收集水层，向水层以1/5(V/V)的比例加入Saveg试剂(氯仿：正丁醇＝4：1，v/v)，混合均匀，2500rpm，振荡30min，以6000rpm离心15min，收集上清液。向上清液中加入乙醇，使其终浓度达至90％(V/V)，在4℃下过夜沉淀，离心，收集沉淀，用100--400mL的水进行溶解，然后装入到3500Da透析袋中，在蒸馏水中透析72h；(3)加入0.1％(m/V)活性炭，将该多糖溶液加热至80℃，加热20min后，冷却至60℃后，过滤除去活性炭残渣，向多糖溶液中加入无水乙醇，使乙醇的终体积浓度为90％，在4℃下过夜沉淀，用6000rpm离心15min，将沉淀的多糖冷冻干燥，获得金钗石斛多糖。本专利技术的一种金钗石斛多糖在防治烟草花叶病毒病、黄瓜花叶病毒病和马铃薯Y病毒病中的应用。本专利技术与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本专利技术的金钗石斛多糖组合物，原料易得，制备方法简单。通过试验证明具有明显的抗烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯Y病毒的组合物活性，且无毒无残留、环境友好。通过以下具体实施方式进一步说明本专利技术的有益效果。具体实施方式实施例1：一种金钗石斛多糖的制备方法，包括以下步骤：将新鲜金钗石斛的水分烘干，用100℃沸水对干燥的金钗石斛进行提取，按水/金钗石斛＝10/1(V/W)的比例提取3h，重复提取三次。然后将提取物进行微波干燥，获得金钗石斛粗糖。将400g金钗石斛粗糖溶解至水中，用1000mL蒸馏水悬浮，然后用4L乙酸乙酯萃取三次；再用3L正丁醇萃取三次，收集水层，向水层以1/5(V/V)的比例加入Saveg试剂(氯仿：正丁醇＝4：1，v/v)，混合均匀，2500rpm，振荡30min，以6000rpm离心15min，收集上清液。向上清液中加入乙醇，使其终浓度达至90％(V/V)，在4℃下过夜沉淀，离心，收集沉淀，用一定量的水进行溶解，然后装入到3500Da透析袋中，在蒸馏水中透析72h。加入0.1％(m/V)活性炭，接着将多糖溶液加热至80℃，加热20min后，冷却至60℃后，过滤除去活性炭残渣。向多糖溶液中加入无水乙醇，使乙醇的终体积浓度为90％，在4℃下过夜沉淀，用6000rpm离心15min，将沉淀的多糖冷冻干燥，获得金钗石斛精制粗多糖。实施例2：一种金钗石斛多糖E1的制备方法：将66.69g金钗石多糖溶于蒸馏水中，过0.45μm滤膜，用阴离子交换柱(二乙氨基乙基纤维素)(7cm×23cm)对金钗石斛多糖分离，洗脱液为H2O，获得E1。实施例3：一种金钗石斛多糖E2的制备方法：按实施例2中操作完成后，将洗脱液改为0.05MNaCl，浓缩，用3500Da透析袋进行透析，冷冻干燥，获得E2。实施例4：一种金钗石斛多糖E3的制备方法：按实施例3中操作完成后，将洗脱液改为0.1MNaCl，浓缩，用3500Da透析袋进行透析，冷冻干燥，获得E3。实施例5：一种金钗石斛多糖E4的制备方法：按实施例4中操作完成后，将洗脱液改为0.2MNaCl，浓缩，用3500Da透析袋进行透析，冷冻干燥，获得E4。实施例6：一种金钗石斛多糖E5的制备方法：按实施例5中操作完成后，将洗脱液改为0.3MNaCl，浓缩，用3500Da透析袋进行透析，冷冻干燥，获得E5。实施例7：一种金钗石斛多糖E6的制备方法：按实施例6中操作完成后，将洗脱液改为0.5MNaCl，浓缩，用3500Da透析袋进行透析，冷冻干燥，获得E6。实施例8：一种金钗石斛多糖DNPE4(1)的制备方法：将E4溶于蒸馏水中，过0.45μm滤膜，依次用SephacrylS-200柱(1.7cm×150cm)和SephadexG-100(2.0cm×80cm)进行分离纯化。所用凝胶过滤色谱分离过程均有示差检测器和苯酚–—硫酸法进行监测，获得DNPE4(1)。实施例9：一种金钗石斛多糖DNPE4(2)的制备方法：同实施例8的操作，根据苯酚——硫酸法绘制的色谱图，收集不同信号峰的流分，获得DNPE4(2)。实施例10：一种金钗石斛多糖DNPE4(3)的制备方法：同实施例8的操作，根据苯酚——硫酸法绘制的色谱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金钗石斛多糖，其平均分子量范围为2.56×10

【技术特征摘要】
1.一种金钗石斛多糖，其平均分子量范围为2.56×103--1.39×107Da。


2.一种金钗石斛多糖的制备方法包括以下步骤：
（1）将新鲜金钗石斛的水分烘干，用100℃沸水对干燥的金钗石斛进行提取，按水/金钗石斛：V/W=10/1的比例提取3h，重复提取三次，然后将提取物进行微波干燥，获得金钗石斛粗糖；
（2）将400g金钗石斛粗糖溶解至水中，用1000mL蒸馏水悬浮，然后用4L乙酸乙酯萃取三次；再用3L正丁醇萃取三次，收集水层，向水层以体积比1/5的比例加入体积比氯仿：正丁醇=4：1的Saveg试剂，混合均匀，2500rpm，振荡30min，以...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋宝安，李洙锐，石晶，陈泠竹，何方成，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：贵州;52