一种海参中生物活性物质的提取方法技术

本发明专利技术提供了一种海参中生物活性物质的提取方法，包含原材料预处理、溶剂提取、亲脂溶剂除脂、油脂回收、正丁醇萃取、树脂富集纯化、除醇酶解、灭酶、离心除杂、粗多糖沉淀、离心分离、超滤纯化、活性炭吸附脱色、纳滤除盐工艺过程。本发明专利技术通过一套完整的工艺从海参中提取分离了海参多糖、海参皂苷、海参脂质及海参多肽，解决了现有技术中无法同时分离提取四种成分的问题。与现有工艺相比，本发明专利技术不仅降低了海参原料的损耗，而且提高了收率和提取物纯度，本发明专利技术提供的方法严谨科学，操作性较强，易于实现工业化，为后续海参高效综合利用提供了新的制备方法。

【技术实现步骤摘要】
一种海参中生物活性物质的提取方法
本专利技术属于生物提取领域，具体涉及一种海参中生物活性物质的提取方法。
技术介绍
海参(Seacucumber)属于棘皮动物门、海参纲，其生存已有5000万年之久，广泛分布于世界各大海洋中，全球现有海参1100种，我国约100多种。海参不仅美味可口，而且药物营养价值极高，是传统的滋补佳品。海参于明代后收入本草，列为补益药。《本草纲目拾遗》中药籍记载“海参性温补，足抵人参，顾名海参；味甘咸，补肾经，益精髓，消痰炎，摄小便，壮阳疗疾，杀疮虫”。大量研究发现，海参中含有海参多糖、海参蛋白、海参皂苷、海参脂质等多种活性物质，每种组分都有其特殊的功效。海参黏多糖，是海参体壁中重要功能成分，其含量最高可占干海参有机物的31％，现代药理学研究表明：海参黏多糖有多种药理活性，包括抗肿瘤、免疫调节、抗凝血与降血脂等作用；海参蛋白，主要为海参胶原蛋白，含量达到55％以上，集中在海参体壁中，这种蛋白在营养成分上可以与中药阿胶、鹿角相媲美，通过分子生物酶技术将海参胶原蛋白转变为小分子活性肽，在保留蛋白营养成分的同时提高了蛋白吸收率；海参素，又称海参皂苷，多为三萜皂苷，主要集中在海参的体壁、内脏和腺体等组织中，能够抑制某些癌细胞生长，同时具有很强的抗菌作用，可以阻断神经传导，对于中风引起的痉挛性麻痹有治疗作用；海参脂质，主要以磷脂成分为主，其中人体必需多不饱和脂肪酸花生四烯酸和EPA占据脂质成分的40％以上，具有调节脂质代谢，抑制血小板凝聚，减少血栓形成等作用。海参活性物质提取物是海参中的高精产品，每种提取物都具有其特殊的功效，可以根据适宜人群开发高效利用型海参功能性食品，比传统方法单独食用海参利用率提高数倍。现有海参提取工艺以酶解为主，提取物纯度低，多为多肽、多糖、脂质及皂苷等混合物，没有实现活性物质成分有效分离，无法进一步开发特种海参食品。现有海参纯品成分提取工艺过程复杂繁琐，致原料损耗大、提取物收率低，考虑到食品开发成本，很难实现工业化。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种海参中生物活性物质的提取方法，通过一套完整的工艺提取出海参多糖、海参皂苷、海参脂质及海参多肽，解决了现有工艺提取过程中海参原料损耗大，提取产物纯度不高，难实现工业化的缺点。为了实现上述目的，本专利技术提供了一下技术方案：一种海参中生物活性物质的提取方法，所述方法包括以下步骤：(1)、原料预处理：取新鲜海参清洗去除内脏，剪碎后打成碎渣，研磨成海参浆；(2)、溶剂提取：向海参浆中加入乙醇水溶液，加热回流，得到乙醇提取液和固体；(3)、亲脂溶剂除脂：将乙醇提取液浓缩至干，加水溶解，用亲脂溶剂萃取，得到脱脂水溶液层与亲脂溶剂层；(4)、脂质回收：将亲脂溶剂层减压蒸干，得到海参脂质；(5)、正丁醇萃取：用氨水调节脱脂水溶液层pH，加入饱和正丁醇，充分振荡，静止分层，收集上层正丁醇层，得到正丁醇萃取液，浓缩至干，得粗皂苷粉末；(6)、树脂富集纯化：将粗皂苷粉末溶于水，用树脂吸附，乙醇水溶液洗脱，将洗脱液浓缩至干，得海参皂苷；(7)、除醇酶解：将步骤(2)所得固体，用水冲洗至无乙醇味，加入缓冲液，然后依次加入木瓜蛋白酶、乙二胺四乙酸和半胱氨酸盐酸盐，混合均匀，酶解，得到酶解液；(8)、灭酶：将酶解液进行灭酶，冷却至室温，得到冷却灭酶料液；(9)、离心除杂：将冷却灭酶料液离心，弃去滤渣，收集上清液；(10)、粗多糖沉淀：向步骤(9)的上清液中加入多糖沉淀剂，静止，得到静止分层物料；(11)、离心分离：将静止分层物料离心分离，上清液为海参粗多肽溶液，下层沉淀物为海参粗多糖；(12)、超滤纯化：加水复溶海参粗多糖，进行超滤，得到透过液和浓缩液；(13)、活性炭吸附脱色：将浓缩液加入活性炭，得脱色液，过滤，洗涤滤渣，得洗涤液，合并脱色液与洗涤液，干燥得到海参多糖；(14)、纳滤除盐：将步骤(11)所得上清液与步骤(12)所得透过液合并，进行纳滤，收集浓缩液干燥得到海参多肽。进一步的，所述步骤(2)中海参浆和乙醇水溶液的料液比为1∶2～5g/mL，乙醇水溶液的体积分数为50％-90％。进一步的，所述步骤(3)中亲脂溶剂为石油醚、乙酸乙酯、苯或乙醚。进一步的，所述步骤(5)中氨水调节pH值为7.5～8.5。进一步的，所述步骤(6)中的树脂为弱极性大孔树脂，乙醇水溶液中乙醇的体积分数为50％-90％。进一步的，所述步骤(7)中缓冲液为乙酸钠-乙酸缓冲液，固体与乙酸钠-乙酸缓冲液的料液比为1∶10～50g/mL，进一步的，所述步骤(7)中木瓜蛋白酶加入量为海参中粗蛋白含量的1.0％-3.0％，加入乙二胺四乙酸、半胱氨酸盐酸盐浓度均为5～7mmol/L。进一步的，所述步骤(10)中所述多糖沉淀剂为低级醇溶液、酮水溶液或盐溶液。进一步的，所述步骤(13)中活性炭添加量为浓缩液固形物含量的1％-3％，脱色温度为70-80℃，脱色时间为30-60min。进一步的，所述步骤(12)中超滤所用的超滤膜的截留分子量为10KDa。进一步的，所述步骤(8)中灭酶温度为90-95℃，灭酶时间15-25min。进一步的，所述步骤(7)中所述乙酸钠-乙酸缓冲液的pH为6.0～6.5，浓度为0.1mol/L。进一步的，所述低级醇溶液为50％-70％甲醇溶液或50％-70％乙醇溶液，酮水溶液为60％-70％丙酮溶液，盐溶液为硫酸铵水溶液、氯化钠水溶液、乙酸钠水溶液或硫酸钠水溶液。进一步的，所述步骤(14)纳滤所用的纳滤膜截留分子量为100Da。与现有技术相比，本专利技术的优点和有益效果为：本专利技术公开了一种海参中生物活性物质的提取方法，通过一套连续的工艺同时得到四种提取物，包括海参多糖、海参皂苷、海参脂质及海参多肽，本专利技术克服了对海参多糖与海参多肽的分离的技术难点，从而减少后续繁琐纯化步骤。现有技术中海参多肽提取工艺提取的多肽含有部分皂苷、多糖、脂质及无机盐成分，海参多肽规格60％-90％，口感与外观欠佳。而本专利技术提取的海参多肽规格达到95％以上，灰分含量低，腥味与颜色比较轻淡，更容易被大众所接受。现有技术中海参多糖、海参皂苷及海参脂质的提取工艺多见于文章，仅停留在实验室阶段，直接用于实际生产的工艺很少，并且得率比较低，考虑到普通食品及功能性食品开发工艺成本来说，很难落地转化，而本专利技术通过一套提取工艺可以得到海参多糖、海参皂苷、海参脂质及海参多肽，对海参中活性物质的提取具有重要的意义。附图说明图1为海参中生物活性物质的提取方法的工艺流程图；图2为海参多肽液相色谱图；图3为海参皂苷液相色谱图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术的技术方案做进一步详细的说明。实施例1本实施例提供了一种海参中生物活性物质的提取方法，，工艺流程图见图1，所述方法包括以下步骤：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：/n（1）、原料预处理：取新鲜海参清洗去除内脏，剪碎后打成碎渣，研磨成海参浆；/n（2）、溶剂提取：向海参浆中加入乙醇水溶液，加热回流，得到乙醇提取液和固体；/n（3）、亲脂溶剂除脂：将乙醇提取液浓缩至干，加水溶解，用亲脂溶剂萃取，得到脱脂水溶液层与亲脂溶剂层；/n（4）、脂质回收：将亲脂溶剂层减压蒸干，得到海参脂质；/n（5）、正丁醇萃取：用氨水调节脱脂水溶液层pH，加入饱和正丁醇，充分振荡，静止分层，收集上层正丁醇层，得到正丁醇萃取液，浓缩至干，得粗皂苷粉末；/n（6）、树脂富集纯化：将粗皂苷粉末溶于水，用树脂吸附，乙醇水溶液洗脱，将洗脱液浓缩至干，得海参皂苷；/n（7）、除醇酶解：将步骤（2）所得固体，用水冲洗至无乙醇味，加入缓冲液，然后依次加入木瓜蛋白酶、乙二胺四乙酸和半胱氨酸盐酸盐，混合均匀，酶解，得到酶解液；/n（8）、灭酶：将酶解液进行灭酶，冷却至室温，得到冷却灭酶料液；/n（9）、离心除杂：将冷却灭酶料液离心，弃去滤渣，收集上清液；/n（10）、粗多糖沉淀：向步骤（9）的上清液中加入多糖沉淀剂，静止，得到静止分层物料；/n（11）、离心分离：将静止分层物料离心分离，上清液为海参粗多肽溶液，下层沉淀物为海参粗多糖；/n（12）、超滤纯化：加水复溶海参粗多糖，进行超滤，得到透过液和浓缩液；/n（13）、活性炭吸附脱色：将浓缩液加入活性炭，得脱色液，过滤，洗涤滤渣，得洗涤液，合并脱色液与洗涤液，干燥得到海参多糖；/n（14）、纳滤除盐：将步骤（11）所得上清液与步骤（12）所得透过液合并，进行纳滤，收集浓缩液干燥得到海参多肽。/n...

【技术特征摘要】
1.一种海参中生物活性物质的提取方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
（1）、原料预处理：取新鲜海参清洗去除内脏，剪碎后打成碎渣，研磨成海参浆；
（2）、溶剂提取：向海参浆中加入乙醇水溶液，加热回流，得到乙醇提取液和固体；
（3）、亲脂溶剂除脂：将乙醇提取液浓缩至干，加水溶解，用亲脂溶剂萃取，得到脱脂水溶液层与亲脂溶剂层；
（4）、脂质回收：将亲脂溶剂层减压蒸干，得到海参脂质；
（5）、正丁醇萃取：用氨水调节脱脂水溶液层pH，加入饱和正丁醇，充分振荡，静止分层，收集上层正丁醇层，得到正丁醇萃取液，浓缩至干，得粗皂苷粉末；
（6）、树脂富集纯化：将粗皂苷粉末溶于水，用树脂吸附，乙醇水溶液洗脱，将洗脱液浓缩至干，得海参皂苷；
（7）、除醇酶解：将步骤（2）所得固体，用水冲洗至无乙醇味，加入缓冲液，然后依次加入木瓜蛋白酶、乙二胺四乙酸和半胱氨酸盐酸盐，混合均匀，酶解，得到酶解液；
（8）、灭酶：将酶解液进行灭酶，冷却至室温，得到冷却灭酶料液；
（9）、离心除杂：将冷却灭酶料液离心，弃去滤渣，收集上清液；
（10）、粗多糖沉淀：向步骤（9）的上清液中加入多糖沉淀剂，静止，得到静止分层物料；
（11）、离心分离：将静止分层物料离心分离，上清液为海参粗多肽溶液，下层沉淀物为海参粗多糖；
（12）、超滤纯化：加水复溶海参粗多糖，进行超滤，得到透过液和浓缩液；
（13）、活性炭吸附脱色：将浓缩液加入活性炭，得脱色液，过滤，洗涤滤渣，得洗涤液，合并脱色液与洗涤液，干燥得到海参多糖；
（14）、纳滤除盐：将步骤（11）所得上清液与步骤（12）所得透过液合并，进行纳滤，收集浓缩液干燥得到海参多肽。


2.根据权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：于德君，王长伟，王铭洪，王松，颜景泉，
申请(专利权)人：潍坊悦龙堂海洋科技有限公司，青岛海洋生物医药研究院，
类型：发明
国别省市：山东;37