一种蝉花多糖及其分离纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种蝉花多糖及其制备方法，所述蝉花多糖从蝉花中分离纯化得到，对胰腺癌、宫颈癌、白血病、胶质瘤等恶性肿瘤有明显的抑制作用。

【技术实现步骤摘要】
一种蝉花多糖及其分离纯化方法本申请是申请日为2016年8月23日、申请号为201610713106.5、专利技术名称为“一种蝉花多糖及其分离纯化方法”的专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术涉及一种蝉花多糖及其分离纯化方法，属于食品药品领域。
技术介绍
蝉花(IsariacicadaeMiquel)，是一种名贵中药材，是寄生在蝉幼虫上的一种虫草菌。属于真菌界(Fungi)的子囊菌门(Ascomycota)、盘菌亚门(Pezizomycotina)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、虫草科(Cordycipitaceae)、棒束孢属(Isaria)。蝉花具有悠久的药用历史，最早可考证的记载是公元五世纪的南北朝时期雷斅在《雷公炮炙论》中记载了蝉花的加工方法：“凡使，要白花全者，收得后于屋下东南角悬干，去土后，用浆水煮一日至夜，焙干碾细用之”。后来，隋、唐甄权的《药性论》、宋代苏颂的《图经本草》、明代李时珍的《本草纲目》均有记载。一千多年年来，蝉花一直用于强身健体，治病防疾。现代医学研究表明蝉花具有免疫调节、抗肿瘤、改善肾功能等药理作用。中国台湾辅仁大学的Kuo等人研究证实蝉花提取的麦角甾醇过氧化物能激活并促进人T淋巴细胞的增殖。程俊文等研究表明蝉花发酵菌丝多糖在12.5至100μg/ml的浓度范围内能明显刺激NO的产生，显示其免疫调节活性。Kim等研究发现蝉花发酵菌丝多糖可以通过TLR4信号通道激活巨噬细胞和诱导树突细胞的成熟。Wang等人研究证实蝉花水提物可以通过抑制MHCC97H的G2/M从而减缓人肝癌的增殖。暨南大学WangJing等人研究表明蝉花中的环缩酚酸肽对HepG2具有细胞毒活性，且其半抑制浓度比阿霉素敏感25倍。朱戎等人通过活体研究证明蝉花提取物可抑制肾组织的纤维化，从而改善肾功能；Weng等人通过研究证明蝉花中含有人类单核细胞的生长调节物质。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种蝉花多糖。本专利技术的第二个目的在于提供所述蝉花多糖的制备方法。本专利技术的第三个目的是提供该蝉花多糖在制备治疗肿瘤药物中的应用。本专利技术的第四个目的是提供一种药物组合物。本专利技术的目的是通过如下技术方案实现的：蝉花多糖B-I-1，其分子量为100～120KDa，重复单元的结构如式1所示：蝉花多糖B-I-2，其分子量为30～50KDa，重复单元的结构如式2所示：蝉花多糖B-II-1，其分子量为110～130KDa，重复单元的结构如式3所示：蝉花多糖B-II-2，其分子量为40～60KDa，重复单元的结构如式4所示：本专利技术4种蝉花多糖成分均为单一的多糖成分。上述蝉花多糖按如下方法制备：步骤1，蝉花孢梗束以水提醇沉法提取，收集沉淀作为提取物；步骤2，对步骤1的提取物进行去蛋白处理；步骤3，将步骤2去除蛋白的提取物用乙醇沉淀，得蝉花粗多糖；步骤4，将步骤3的蝉花粗多糖依次经过DEAE纤维素柱层析和SephadexG凝胶柱层析纯化，得蝉花多糖。优选的，步骤1所述醇沉浓度为60％-80％；进一步优选醇沉浓度为65％-75％；最优选醇沉浓度为70％。优选的，步骤1得到的沉淀进行纯化，纯化方法为依次用无水乙醇、丙酮、乙醚进行洗涤。优选的，步骤2所述去蛋白方法为：将步骤1的沉淀溶解，调节pH近中性，分别加入胰蛋白酶和Sevag试剂，离心，去除沉淀(即蛋白质)。进一步优选的，上述去蛋白操作重复4～6次；更进一步优选为所述去蛋白操作重复5次。本专利技术所述水提醇沉法系指在水提浓缩液中，加入乙醇使达到规定的含醇量(即醇沉浓度)，某些成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，使水提液得以精制的方法。本专利技术还提供了所述蝉花多糖在制备治疗肿瘤的药物或保健品中的应用。所述肿瘤包括包括白血病、恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、胃肠道间质瘤、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、卵巢癌、子宫癌、宫颈癌、阴道癌、肺癌、肾癌、前列腺癌、膀胱癌、胰腺癌、脑癌、黑色素瘤等。本专利技术还提供了一种药物组合物，其包含上述蝉花多糖和药学上可接受的载体。所述药物组合物包括但不限于口服剂型、胃肠外给药剂型、外用剂型和直肠给药剂型。在一些实施方式中，所述药物组合物可以是口服的片剂、胶囊剂、丸剂、散剂、缓释制剂、溶液剂和悬浮液，用于胃肠外注射的无菌溶液、悬浮液或乳液，用于外用的软膏或乳膏，或者用于直肠给药的栓剂。在一些实施方式中，所述药物组合物和至少一种治疗剂分别以独立的剂型组合成组合产品，如药剂盒。本专利技术采用凝胶柱层析法测定了各多糖成分的分子量，通过乙酰化法和气相-质谱联用鉴定了各多糖成分的单糖组成和比例，结合红外色谱、核磁共振等波谱学方法最终确定了各多糖成分的结构。本专利技术分离得到的四种蝉花多糖均具有良好的抗肿瘤的效果，对恶性肿瘤有一定的抑制作用。附图说明图1DEAE-52纤维素离子交换柱层析的洗脱曲线图2SephadexG-150凝胶柱层析洗脱曲线图3多糖纯度验证图4单糖对照品和4个多糖组分水解后单糖GC谱(1-L-鼠李糖2-D-阿拉伯糖3-D-木糖4-D-甘露糖5-D-葡萄糖6-D-半乳糖)图5B-I-1的红外光谱图图6B-I-2的红外光谱图图7B-II-1的红外光谱图图8B-II-2的红外光谱图图9B-I-11HNMR谱图图10B-I-113CNMR谱图图11B-I-1COSY-NMR谱图图12B-I-1HSQC-NMR谱图图13B-I-1HMBC-NMR谱图图14B-I-21HNMR谱图图15B-I-213CNMR谱图图16B-I-2COSY-NMR谱图图17B-I-2HSQC-NMR谱图图18B-I-2HMBC-NMR谱图图19B-II-11HNMR谱图图20B-II-113CNMR谱图图21B-II-1COSY-NMR谱图图22B-II-1HSQC-NMR谱图图23B-II-1HMBC-NMR谱图图24B-II-21HNMR谱图图25B-II-213CNMR谱图图26B-II-2COSY-NMR谱图图27B-II-2HSQC-NMR谱图图28B-II-2HMBC-NMR谱图图29B-I-1抑制人胰腺癌细胞Wright-giemsa染色结果A、对照；B、50μg/mL；C、100μg/mL；D、250μg/mL；E、500μg/mL；F、1mg/mL图30B-I-1抑制人胰腺癌细胞透射电镜观察结果A、给药前；B、给药后图31B-I-2抑制人宫颈癌细胞Wright-giemsa染色结果A、对照；B、50μg/mL；C、100μg/mL；D、250μg/mL；E、500μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蝉花多糖B-I-1，其分子量为100～120KDa，重复单元的结构如式1所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种蝉花多糖B-I-1，其分子量为100～120KDa，重复单元的结构如式1所示：





2.一种蝉花多糖B-I-2，其分子量为30～50KDa，重复单元的结构如式2所示：





3.一种蝉花多糖B-II-1，其分子量为110～130KDa，重复单元的结构如式3所示：





4.一种蝉花多糖B-II-2，其分子量为40～60KDa，重复单元的结构如式4所示：





5.如权利要求1～4任一项所述的蝉花多糖的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
步骤1，蝉花孢梗束以水提醇沉法提取，收集沉淀作为提取物；
步骤2，对步骤1的提取物进行去蛋白处理；
步骤3，将步骤2去除蛋白的提取物用乙醇沉淀，得蝉花粗多糖；
步骤4，将步骤3的蝉花粗多糖依次经过DE...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙长胜，樊美珍，吴凯强，张忠亮，
申请(专利权)人：浙江泛亚生物医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33