骆驼刺糖聚合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了骆驼刺糖聚合物AP3‑2、AP3‑3及其提取方法和用途，该方法以骆驼刺地上部分为原料，通过水提醇沉、Sevag法脱蛋白、DEAE纤维素柱层析、凝胶柱层析等制备骆驼刺糖聚合物。其中，AP3‑2是由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和木糖组成的糖聚物；AP3‑3是由阿拉伯糖组成的糖聚物。同时，AP3‑2在抗骨质疏松实验中显示其具有显著的促成骨活性。这些研究可为其将来在制备防治骨质疏松药物或保健品或功能食品中的应用提供依据。

【技术实现步骤摘要】
骆驼刺糖聚合物及其制备方法和应用
本专利技术属于医药
，更具体地，涉及一种骆驼刺糖聚合物、精糖聚合物的制备方法，以及骆驼刺糖聚合物在防治骨质疏松中的应用。
技术介绍
骨质疏松症(osteoporosis,0P)是多种原因导致的骨密度和骨质量下降，骨微结构破坏，造成骨脆性增加，从而容易发生骨折的全身性骨病。由于人口老龄化现象日趋严重，骨质疏松症发病率快速增长。妇女绝经后雌激素水平急剧下降，导致骨转换率升高，易诱发骨质疏松，骨质疏松症已成为当今社会面临的严重的公共健康问题。治疗这种常见的代谢性骨病的关键是保持骨吸收与骨形成之间的平衡。目前，激素替代疗法，双膦酸盐，选择性激素受体调节剂和降钙素用于降低临床中原发性和复发性骨折的风险，但这些药物在长期使用过程中多具有一定的副作用，因此高效、低毒的新型抗骨质疏松药物的研发势在必行。天然药物在治疗骨质疏松症方面具有历史悠久、副作用小等优势，受到人们的广泛关注。骆驼刺(AlhagipseudalhagiDesv.)，属于豆科骆驼刺属植物，分布于中国内蒙古、甘肃、青海和新疆。哈萨克斯坦、乌兹别克斯坦、土库曼斯坦、吉尔吉斯斯坦和塔吉克斯坦也有分布。骆驼刺营养价值较高，它是反刍动物最常见的饲料。此外，骆驼刺还具有很高的药用价值。骆驼刺中具有多种生物活性物质，如黄酮类，生物碱，多糖，维生素，脂肪酸，类固醇，香豆素，丹宁等。它们在抗哮喘，壮阳，退热，开胃，抗风湿，利尿，镇静，祛痰，抗腹泻，抗炎，抗病毒，抗菌，降压，保肝，免疫调节以及皮肤病的治疗方面具有良好表现。目前，国内外对骆驼刺的研究主要集中在骆驼刺小分子物质的提取、分离鉴定和粗提物的药理活性上。骆驼刺粗糖聚合物虽有报道，但是没有明确其结构特征和理化性质，还没有相关骆驼刺糖聚合物结构的报道。此外，国内外对骆驼刺糖聚合物在防治骨质疏松方面的研究尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术第一个方面的目的，在于提供一种骆驼刺糖聚合物。本专利技术第二个方面的目的，在于提供上述骆驼刺糖聚合物的制备方法。本专利技术第三个方面的目的，在于提供上述骆驼刺糖聚合物在制备预防和/或治疗骨质疏松药物中的应用。本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术的第一个方面，提供一种骆驼刺糖聚合物，包括AP3-2和AP3-3，其中，AP3-2是由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成的糖聚物，其结构式如式(I)所示：其中，a、b的范围为1～1000；AP3-2是由阿拉伯糖组成的糖聚物，其结构式如式(Ⅱ)所示：其中，a的范围为1～1000。本专利技术的第二个方面，提供本专利技术第一个方面所述的骆驼刺糖聚合物在制备预防和/或骨质疏松药物中的应用。本专利技术的第三个方面，提供本专利技术第一或第二个方面所述的骆驼刺糖聚合物的制备方法，包括以下步骤：S1.浸泡：取骆驼刺的地上部分，浸泡，得浸泡液A；S2.水提：将浸泡液A进行加热提取，过滤，得提取液B和残渣C；S3.分级醇沉：将提取液B减压浓缩后，加入乙醇使乙醇体积浓度为a％，静置，收集沉淀和上清液，得粗糖聚合物AP1和上清液D；将上清液D再次浓缩，加入乙醇使乙醇体积浓度为b％，静置，收集沉淀和上清液，得粗糖聚合物AP2和上清液E；将上清液E再次浓缩，加入乙醇使乙醇体积浓度为c％，静置，收集沉淀，得粗糖聚合物AP3，其中10≤a＜b＜c＜100；S4.纯化：对上述粗糖聚合物AP1、AP2、AP3、AP4进行纯化，即得纯化粗糖聚合物AP1、AP2、AP3、AP4；S5.离子交换柱层析：将步骤S4中得到的纯化粗糖聚合物AP3进行离子交换柱层析，用0～2M浓度的NaCl溶液进行梯度洗脱，使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线分别收集糖部分，然后浓缩、透析、冷冻干燥，再分别用水进行溶解，离心分离后得到上清液H；S6.分子筛凝胶柱层析：将步骤S5中上清液H进行分子筛凝胶柱层析，用水进行洗脱，使用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖部分，浓缩、冷冻干燥后获得权利要求1中所述骆驼刺糖聚合物AP3-2、AP3-3。根据本专利技术第三个方面所述的方法，步骤S1中所述骆驼刺的地上部分为骆驼刺的茎、枝、叶、花序。根据本专利技术第三个方面所述的方法，步骤S2中水提的具体操作为：用5～15倍体积的60～100℃的热水对骆驼刺地上部分提取1～10h。根据本专利技术第三个方面所述的方法，步骤S3中10≤a＜60，60≤b＜80，80≤c＜100。根据本专利技术第三个方面所述的方法，步骤S4中纯化的具体操作为：利用Sevag法分别对粗糖聚合物AP1、AP2、AP3进行除蛋白，除蛋白后再经透析袋透析、冻干，透析袋的截留分子量为1000Da。根据本专利技术第三个方面所述的方法，步骤S5中离子交换柱为离子交换纤维素或离子交换凝胶，透析袋的截留分子量为100Da。根据本专利技术第三个方面所述的方法，步骤S6中分子筛凝胶层析选用SephadexG或SephacrylS系列分子筛色谱柱。本专利技术的有益效果：1.本专利技术利用离子交换层析和分子筛凝胶柱层析方法纯化骆驼刺糖聚合物，制备出之前未报道过的骆驼刺精糖聚合物，并且对骆驼刺精糖聚合物的理化性质、分子量、单糖组成等进行系统的分析确认，成功得出骆驼刺精糖聚合物的特征结构。2.本专利技术通过柱层析法对骆驼刺粗糖聚合物进行分离纯化，效果显著，首次制备出骆驼刺糖聚物AP3-2、AP3-3。3.本专利技术对制备出的骆驼刺糖聚合物AP3-2、AP3-3进行了鉴定，明确了其理化性质及结构，为探究其药理活性机制提供结构依据。4.本专利技术提供了骆驼刺中的粗糖聚合物、精糖聚合物的制备方法，及骆驼刺糖聚合物在防治骨质疏松方面的活性研究，为骆驼刺糖聚合物在医药等领域的应用提供依据，本专利技术还提供了骆驼刺糖聚合物在预防和/或治疗骨质疏松药物中的应用。5.本专利技术还提供了骆驼刺糖聚合物的制备方法，与传统水煮法提取骆驼刺糖聚合物相比，本专利技术采用水提醇沉法，乙醇浓度由低到高进行分级醇沉，对骆驼刺糖聚合物进行初步分离，同时高浓度乙醇能将极性大、水溶性好的糖聚合物与极性小、水溶性差的糖聚合物分离，使后期的分离纯化难度大大降低。且本制备工艺简单，操作方便，可以大规模生产。附图说明图1：AP3-2的红外图谱。图2：AP3-2的13CNMR图谱。图3：AP3-2的1HNMR图谱。图4：AP3-2的1H-1HCOSY图谱。图5：AP3-2的HSQC图谱。图6：AP3-2的HMBC图谱。图7：AP3-2对MC3T3-E1细胞增殖的影响。图8：AP3-2对MC3T3-E1细胞分化的影响。图9：AP3-2对MC3T3-E1细胞矿化的影响。图10：AP3-3的红外图谱。图11：AP3-3的13CNMR图谱。图12：AP3-3的1HNMR图谱。图13：AP3-3的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种骆驼刺糖聚合物，包括AP3-2和AP3-3，其中，AP3-2是由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成的糖聚物，其结构式如式(I)所示：/n

【技术特征摘要】
1.一种骆驼刺糖聚合物，包括AP3-2和AP3-3，其中，AP3-2是由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖组成的糖聚物，其结构式如式(I)所示：



其中，a、b的范围为1～1000；
AP3-2是由阿拉伯糖组成的糖聚物，其结构式如式(Ⅱ)所示：



其中，a的范围为1～1000。


2.权利要求1所述的骆驼刺糖聚合物在制备预防和/或骨质疏松药物中的应用。


3.权利要求1或2所述骆驼刺糖聚合物的制备方法，包括以下步骤：
S1.浸泡：取骆驼刺的地上部分，浸泡，得浸泡液A；
S2.水提：将浸泡液A进行加热提取，过滤，得提取液B和残渣C；
S3.分级醇沉：将提取液B减压浓缩后，加入乙醇使乙醇体积浓度为a％，静置，收集沉淀和上清液，得粗糖聚合物AP1和上清液D；将上清液D再次浓缩，加入乙醇使乙醇体积浓度为b％，静置，收集沉淀和上清液，得粗糖聚合物AP2和上清液E；将上清液E再次浓缩，加入乙醇使乙醇体积浓度为c％，静置，收集沉淀，得粗糖聚合物AP3，其中10≤a＜b＜c＜100；
S4.纯化：对上述粗糖聚合物AP1、AP2、AP3进行纯化，即得纯化粗糖聚合物AP1、AP2、AP3；
S5.离子交换柱层析：将步骤S4中得到的纯化粗糖聚合物AP3进行离子交换柱层析，用0～2M浓度的NaCl溶液进行梯度洗脱，使用...

【专利技术属性】
技术研发人员：严春艳，叶振泉，李天钰，
申请(专利权)人：广东药科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44