检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗病毒能力的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗病毒能力的方法，包括如下步骤：S1.制备恢复期血浆；S2.利用抗原抗体特异性结合的原理检测S蛋白的RBD抗体；S3.以S2的RBD抗体的含量评价恢复期血浆抗病毒能力。本发明专利技术采用针对RBD的表达产物检测，建立新的方法，操作简单、成本低，实验室要求低，安全性高，普通临床实验室即可检测。

【技术实现步骤摘要】
检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗病毒能力的方法
本专利技术涉及生物化学
，具体涉及一种检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗病毒能力的方法。
技术介绍
恢复期血浆疗法是一种基于血浆或血浆衍生物的治疗方式，即采用严重感染患者恢复健康后的血浆或血浆衍生物治疗相应病原体感染的患者。这些恢复期患者的血浆中含有高浓度特异性的抗病原体抗体，输入患者体内后，可以中和病原体，也会激活补体，介导有效的免疫反应，从而达到治疗疾病、清除病原体的目的。恢复期血浆疗法可以追溯到20世纪初，被成功应用于很多传染性疾病，包括炭疽病、瘟疫、猩红热、麻疹、白喉、痢疾、流行性脑脊髓膜炎、狂犬病、肺炎球菌性肺炎等。2003年SARS流行期间、H1N1流行期间，血浆疗法也对感染患者尤其是对部分药物治疗效果不佳的患者或重症患者显示出良好的效果。目前针对新发病原体COVID-19尚无特效药物针对性治疗，疫苗研发尚需时日，特异性抗体的生产和检定也需要一定的周期。近期治愈出院的患者血浆中含有高效价的抗病原体抗体。有研究也指出，危重症患者血浆中分离出的部分新病毒可以被多个感染患者的血清中和，说明患者的血清中存在针对新病毒的特异性中和抗体。因此，利用恢复期血浆进行治疗，有望为救治感染新病原体患者提供有效的治疗手段，降低死亡率，保障患者生命安全。目前评价恢复期血浆或免疫球蛋白抗病毒能力的方法只有中和试验，中和试验成本高、检测周期长，条件要求高，需要在P3实验室里操作，安全风险大，需要使用活病毒。
技术实现思路
有鉴于此，为解决上述技术问题，本专利技术的目的在于一种检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗病毒能力的方法，该方法操作简单、成本低，实验室要求低，安全性高，普通临床实验室即可检测。所采用的技术方案为：一种检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗病毒能力的方法，包括如下步骤：S1.制备恢复期血浆；S2.利用抗原抗体特异性结合的原理检测S蛋白的RBD抗体；S3.以S2的RBD抗体的含量评价恢复期血浆抗病毒能力。进一步地，S3中，当RBD抗体浓度大于50稀释度时，则恢复期血浆具有良好的临床抗病毒能力。进一步地，S2中，利用ELISA法或化学发光法来检测S蛋白的RBD抗体。进一步地，S1中，所述恢复期血浆为COVID-19恢复期血浆或SARS-CoV恢复期血浆。当然恢复期血浆包括于此，但不局限于此，也可以包括其他病原体的恢复期血浆。作为一种替代方案，将恢复期血浆用免疫球蛋白替代。即该替代方案为：一种检测S蛋白RBD抗体评价免疫球蛋白抗病毒能力的方法，包括如下步骤：S1.制备免疫球蛋白；S2.利用抗原抗体特异性结合的原理检测S蛋白的RBD抗体；S3.以S2的RBD抗体的含量评价免疫球蛋白抗病毒能力。制备免疫球蛋白的步骤，可以从被替代方案中的制备恢复期血浆中进一步浓缩纯化得到。还可以有将恢复期血浆替换为该恢复期血浆的其他衍生物的替代方案。本专利技术的有益效果在于：目前评价恢复期血浆或免疫球蛋白抗病毒能力的方法只有中和试验，中和试验成本高、检测周期长，条件要求高，需要在P3实验室里操作，安全风险大，需要使用活病毒。本专利技术采用针对RBD的表达产物检测，建立新的方法，操作简单、成本低，实验室要求低，安全性高，普通临床实验室即可检测。附图说明图1为本专利技术方法与传统的活病毒中和试验有较好的相关性的实验结果图。图2为比较实验组与对照组患者症状无改善的累积率的实验结果图。具体实施方式下面通过具体的实施例对本专利技术进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本专利技术，并非对本专利技术的实际保护范围构成任何形式的任何限定，并非将本专利技术的保护范围局限于此。实施例1检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗COVID-19新冠肺炎病毒能力的方法，包括以下步骤：S11.恢复期血浆的制备(IVIG的制备方式同恢复期血浆的制备，增加浓缩纯化步骤)：主要采用血细胞分离机和密闭式专用管道，选择单采血浆专用程序，采集血浆量为200-600mL，采集后的血浆用无菌接驳器进行接驳和分装成100mL的小包装，迅速放置-40℃以下速冻，-20℃以下保存；然后留样进行血浆质量检测。两次采浆间隔期不少于14天，按照GB18469进行血浆质量检测。此外，还进行COVID-19新冠肺炎病毒血清学定性检测：研究其反应性，并进行定量检测(滴度检测)：滴度不少于50。S2.RBD抗体检测：(目前的方法有ELISA法和化学发光法，本实施例为ELISA法)S21.以包被液稀释COVID-19新冠肺炎病毒血清(终浓度为1ug/ml-5ug/ml)，以每孔100ul加入96孔酶标板；4℃过夜包被；S22.甩掉包被液，加封闭液200ul/孔封闭过夜(或者37℃封闭2小时)；S23.洗涤液洗涤3次，用稀释液稀释恢复期血浆，稀释后按100ul/孔加入恢复期血浆，37℃孵育1小时；S24.洗涤液洗涤3次，加酶标第二抗体(抗抗体)(按照试剂说明以稀释液稀释)，100ul/孔。37℃孵育1小时；S25.洗涤液洗涤3次，加AB显色液，100ul/孔，室温避光呈色4分钟；S26.加入终止液50ul/孔终止反应；S27.以酶标仪测量450nmOD值；S3.计算RBD抗体浓度，当RBD抗体浓度大于50稀释度时，则评价：恢复期血浆具有良好的临床抗病毒能力。其中，包被液、封闭液、稀释液、洗涤液、终止液等均是本领域ELISA法中常规的溶液。例如(1)包被液(pH9.60.05M碳酸盐缓冲液):NaCO31.59克，NaHCO32.93克,加蒸馏水至1000ml。(2)洗涤液(pH7.4PBS)：0.15M(3)稀释液：牛血清白蛋白(BSA)0.1克加洗涤缓冲液至100ml或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5～10wt％使用。(4)终止液(2MH2SO4)：蒸馏水178.3ml，逐滴加入浓硫酸(98vol％)21.7ml。(5)封闭液；1％的BSA。每100mL的PBST(PBS溶液加上Tween-20即为PBST)中加入1g的牛血清白蛋白(BSA)。实施例2本实施例具体操作步骤同实施例1。不同的是，实施例1的恢复期血浆为COVID-19恢复期血浆，本实施例是SARS-CoV恢复期血浆。本实施例相应是一种检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗SARS-CoV能力的方法。实施例3参照实施例1，与实施例一不同的是，本实施例用免疫球蛋白(IVIG)来替代实施例1的恢复期血浆。其中S1.制备免疫球蛋白，包括如下步骤：以恢复期血浆为原料，通过两步离子交换层析实现蛋白分离纯化，结合纳米膜除病毒过滤，制备出以本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗病毒能力的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1.制备恢复期血浆；/nS2.利用抗原抗体特异性结合的原理检测S蛋白的RBD抗体；/nS3.以S2的RBD抗体的含量评价恢复期血浆抗病毒能力。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗病毒能力的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.制备恢复期血浆；
S2.利用抗原抗体特异性结合的原理检测S蛋白的RBD抗体；
S3.以S2的RBD抗体的含量评价恢复期血浆抗病毒能力。


2.根据权利要求1所述的检测S蛋白RBD抗体评价恢复期血浆抗病毒能力的方法，其特征在于，S3中，当RBD抗体浓度大于50稀释度时，则恢复期血浆具有良好的临床抗病毒能力。


3.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘忠，李玲，王珏，
申请(专利权)人：中国医学科学院输血研究所，
类型：发明
国别省市：四川;51