GP73的新用途及一种基于其的肝组织炎症活动度检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及血清GP73浓度用于肝组织炎症活动度检测的用途，提供了一种肝组织炎症活动度检测试剂盒，其利用血清中的GP73浓度可实现对受试者的肝组织炎症活动度的检测分级，而且可适用中度炎症坏死以上且ALT正常的患者，以及采取抗病毒治疗的病毒性肝炎患者。

【技术实现步骤摘要】
GP73的新用途及一种基于其的肝组织炎症活动度检测试剂盒本申请是分案申请，原案申请的专利技术名称是GP73的新用途及一种基于其的肝组织炎症活动度检测试剂盒，申请号为201710289636.6，申请日为2017年4月27日。
本专利技术属于生物医学领域，涉及高尔基体蛋白73(GP73)的新用途，以及基于检测高尔基体蛋白73(GP73)的浓度而制备的肝组织炎症活动度检测试剂盒。
技术介绍
Kladney等在研究成人巨细胞肝炎时发现了高尔基体蛋白73(GP73)，至今已有17年(KladneyRD,BullaGA,GuoL,etal.Gene.2000.249(1-2):53-65)，GP73是一个有402个氨基酸、相对分子量为73kDa的跨膜糖蛋白，又称为II型高尔基体膜蛋白(Golgiphosphoprotein2，Golph2)和高尔基体膜蛋白I(Golgimembraneprotein1，Golm1)。它通常位于反式高尔基复合体中，编码GP73蛋白的基因位于第9号染色体，全长共3080个核苷酸，编码区位于199-1404nt，GP73在多种组织中均有表达，但强弱不等，在小肠、结肠以及胃中呈高表达，而在心脏中表达最少，在肝、肾、脾、肺、子宫及睾丸表达很弱，GP73表达于正常肝脏组织的胆管上皮细胞，在正常肝细胞中几乎不表达。Kladney等在随后的研究中发现，在病毒(HBV及HCV)感染和非病毒原因(酒精性肝病及自身免疫性肝炎)引起的肝病患者(慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、酒精性肝组织炎症活动度及自身免疫性肝炎导致的肝组织炎症活动度)组织中GP73水平均显著上调，高于正常肝组织70倍，而肝病组之间的差异无统计学意义。Kladney等的进一步研究表明，GP73在正常肝组织中呈低表达，在多种原因(病毒相关性、酒精性或自身免疫性)导致的肝脏疾病中GP73表达水平均显著升高，此时，胆管上皮细胞中GP73的表达变化并不明显，而受损肝细胞较患病前显著表达GP73，表明肝病中GP73的高表达是肝细胞中GP73表达上调的结果，这是GP73应用于肝脏疾病领域的病理基础(KladneyRD,CuiX,BullaGA,BruntEM,FimmelCJ.Hepatology.2002.35(6):1431-40.)。Block等的研究是将GP73应用于肝癌临床领域的重要一步(BlockTM,ComunaleMA,LowmanM,etal.ProcNatlAcadSciUSA.2005.102(3):779-84.)，他们在2005年研究血清GP73在土拨鼠中的表达关系时发现，GP73浓度在患肝癌土拨鼠中显著高于非肝癌土拨鼠，进而研究GP73在人肝癌中的表达也得出了相同的结论。综上文献所述及我们的研究发现，GP73对将肝癌与肝炎、肝硬化患者区分的区分能力不及AFP的效果好，只是其诊断肝硬化的灵敏性高于血清AFP。临床对于肝炎的诊断，现在常用ALT(全名丙氨酸转氨酶)和AST(全名天冬氨酸转氨酶)。ALT与AST主要分布在肝细胞内，ALT和AST升高，说明肝细胞受损。ALT最为敏感。血清中的ALT增加1倍表明1％肝细胞坏死。通常情况下ALT和AST升高程度与肝细胞受损程度相一致。这两种酶在肝细胞内分布是不同。ALT主要分布在肝细胞浆，ALT升高反映了肝细胞膜的损伤；AST主要分布在肝细胞浆和肝细胞线粒体。因此不同的肝炎情况所出现的ALT、AST升高情况是不同的。ALT/AST的比值也是不同的。既往有乙型肝炎或HBsAg携带史或急性肝炎病程超过半年，而且目前仍有肝炎症状、体征及肝功能异常者可以诊断为慢性肝炎，有可能转为肝硬化或肝癌。对于发病日期不明或虽无肝炎病史，但影像学、腹腔镜或肝活体组织病理符合慢性肝炎改变，或根据症状、体征、化验综合分析亦可作出相应诊断。从肝功能损害程度角度，临床划分为轻度、中度和重度，其划分标准如下：1.轻度：病情较轻，症状不明显或虽有症状、体征，生化指标仅1～2项轻度异常者。2·重度：有明显或持续的肝炎症状，如乏力、纳差、腹胀、便溏等。可伴有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣或肝脾肿大而排除其他原因且无门脉高压征者。实验室检查血清ALT反复或持续升高，白蛋白减低或A/G比例异常、丙种球蛋白明显升高，凡白蛋白≤32g/L、胆红素>85.5umol/L、凝血酶原活动度40％～60％三项检测中有一项达商数程度者即可诊断为重度慢性肝炎。3.中度：症状、体征、实验室检查居于轻度和重度之间者。相应地，从ALT、AST指标出发，一般情况下，急性、慢性轻型肝炎中肝细胞均有损伤，但是线粒体是完整的，所以检查ALT升高，ALT/AST>1。重型肝炎和慢性肝炎中，中期细胞线粒体遭到破坏，则会出现AST升高，AST/ALT>1的情况。此时经常出现ALT呈正常的情况。目前临床上缺乏判断并确定肝组织炎症活动度的合适的诊断指标。需求主要存在如下三种情况：1)中度、重度肝脏炎症是慢性肝病肝损伤的主要因素，一旦确定应予以积极治疗，故中、重度肝脏炎症的诊断及程度的判定需要灵敏、特异、可量化的血清学指标；2)ALT是临床上反映肝细胞损伤一个重要指标，有一定比例的慢性肝病患存在明显的肝脏炎症，但ALT却正常，无通过ALT法判断肝组织炎症活动度的情况；3)对于病毒性肝炎，采取抗病毒治疗后，缺乏判断肝组织炎症活动度是否得到控制/改善的灵敏、特异的判定指标。目前，临床主要使用的指标是肝组织炎症活动度，其水平按G0、G1、G2、G3、G4进行分级，具体见后文表1。随着肝组织破坏进展，肝组织炎症活动度水平分级会趋于上升；但随着肝组织病情的缓解，肝组织炎症活动度水平分级会趋于下降。很多文献对肝组织炎症活动度的临床诊断进行研究探讨，如“慢性乙肝患者血清ALT水平与肝组织炎症活动度相关性分析”，陶森，赵强，《中华中西医杂志》，2007，和“血清肝纤维化标志物水平与肝组织炎症活动度纤维化程度的相关性分析”，许爱民等，《临床肝胆病杂志》,2005,21(3):175-176，“慢性乙型肝炎患者肝组织炎症活动度的临床诊断与治疗”，曹弘,汪铮,苏婷婷，《中华医院感染学杂志》，2014年，17期，“慢性乙型肝炎患者血丙氨酸氨基转移酶诊断肝组织炎症活动度的临床价值”，王冰,《中国处方药》，2014年，10期等。但是仍未找到合适的标记物来指示肝组织炎症活动度水平及分级。现在，还没有通过血清检测而不是通过组织检测肝组织炎症活动度的灵敏、高效的方法。因此，急需开发这样一种检测试剂盒。
技术实现思路
对于上述三种情况：1)中度、重度肝脏炎症是慢性肝病肝损伤的主要因素，一旦确定应予以积极治疗，故中、重度肝脏炎症的诊断及程度的判定需要灵敏、特异、可量化的血清学指标；2)ALT是临床上反映肝细胞损伤一个重要指标，有一定比例的慢性肝病患存在明显的肝脏炎症，但ALT却正常，无通过ALT法判断肝组织炎症活动度的情况；3)对于病毒性肝炎，采取抗病毒治疗后，缺乏判断肝组织炎症活动度是否得到控制/改善的灵敏、特异的判定指标，现在还没有通过血清检测而不是通过组织检测肝本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.GP73作为标记物在开发和/或设计用于肝组织炎症活动度检测的试剂盒中的用途，其特征在于，所述试剂盒能够基于血清中的GP73浓度实现对受试者的肝组织炎症活动度的检测并分级为轻度、中度和重度，其中轻度为肝组织炎症活动度分级≥1且<2，中度为肝组织炎症活动度分级≥2且<3，重度为肝组织炎症活动度分级≥3。/n

【技术特征摘要】
1.GP73作为标记物在开发和/或设计用于肝组织炎症活动度检测的试剂盒中的用途，其特征在于，所述试剂盒能够基于血清中的GP73浓度实现对受试者的肝组织炎症活动度的检测并分级为轻度、中度和重度，其中轻度为肝组织炎症活动度分级≥1且<2，中度为肝组织炎症活动度分级≥2且<3，重度为肝组织炎症活动度分级≥3。


2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述试剂盒在所述GP73浓度为40-57ng/mL的范围判断受试者有轻度肝组织炎症坏死，57ng-94ng的范围判断受试者有中度肝组织炎症坏死，94ng/mL以上的范围判断受试者有重度肝组织炎症坏死。


3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述试剂盒适用于患有病毒性肝炎、自身免疫性肝病、其他病因肝病的受试者，所述其他病因肝病包括非酒精性脂肪肝、药物性肝病及病因不明的肝病。


4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述试剂盒适用于ALT值在正常范围内的患有中度以上肝组织炎症坏死的受试者。


5.GP...

【专利技术属性】
技术研发人员：鲁凤民，姚明解，
申请(专利权)人：鲁凤民，姚明解，
类型：发明
国别省市：北京;11