一种重组蛋白的制备方法技术

本发明专利技术适用于生物技术领域，提供了一种重组蛋白的制备方法，其包括以下步骤：将重组蛋白的表达工程菌株进行活化培养，得到活化菌落；将所述活化菌落依次进行一级培养和二级培养，得到二级种子；将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；将所述发酵液进行离心处理，收集菌体；将所述菌体进行冻存后，再置于裂解液中进行裂解，然后经离心处理，得到以包涵体形式存在的重组蛋白；所述裂解液包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸、聚乙二醇辛基苯基醚。该制备方法能够使菌体在自然条件下自行破碎，其不仅可以使得到的包涵体的蛋白完全不受外力的破坏，而且还可以使菌体的破碎率达到95%。

【技术实现步骤摘要】
一种重组蛋白的制备方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种重组蛋白的制备方法。
技术介绍
目前，重组蛋白一般是通过对大肠杆菌等表达工程菌株进行发酵培养和诱导表达而获得的。其中，传统重组蛋白的制备方法，往往需要通过超声破碎机或高压匀浆机等菌体破碎设备对发酵诱导后的菌体进行破碎，才能获得以包涵体形式存在的重组蛋白。然而，传统重组蛋白的制备方法得到的包涵体存在破碎率较低的问题，而且由于受外力影响，其还存在蛋白容易被损坏的问题，因此，目前亟待寻找一种新的重组蛋白的制备方法。
技术实现思路
本专利技术实施例的目的在于提供一种重组蛋白的制备方法，旨在解决
技术介绍
中提出的问题。本专利技术实施例是这样实现的，一种重组蛋白的制备方法，包括以下步骤：将重组蛋白的表达工程菌株进行活化培养，得到活化菌落；将所述活化菌落依次进行一级培养和二级培养，得到二级种子；将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；将所述发酵液进行离心处理，收集菌体；将所述菌体进行冻存后，再置于裂解液中进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n将重组蛋白的表达工程菌株进行活化培养，得到活化菌落；/n将所述活化菌落依次进行一级培养和二级培养，得到二级种子；/n将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；/n将所述发酵液进行离心处理，收集菌体；/n将所述菌体进行冻存后，再置于裂解液中进行裂解，然后经离心处理，得到以包涵体形式存在的重组蛋白；每升所述裂解液包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷10~50mmol、乙二胺四乙酸2~10mmol、聚乙二醇辛基苯基醚0.005~0.02L。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将重组蛋白的表达工程菌株进行活化培养，得到活化菌落；
将所述活化菌落依次进行一级培养和二级培养，得到二级种子；
将所述二级种子置于发酵培养基中进行发酵培养，得到发酵液；
将所述发酵液进行离心处理，收集菌体；
将所述菌体进行冻存后，再置于裂解液中进行裂解，然后经离心处理，得到以包涵体形式存在的重组蛋白；每升所述裂解液包括以下组分：三羟甲基氨基甲烷10~50mmol、乙二胺四乙酸2~10mmol、聚乙二醇辛基苯基醚0.005~0.02L。


2.根据权利要求1所述的一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述将重组蛋白的表达工程菌株进行活化培养，得到活化菌落的步骤，具体包括：
将重组蛋白的表达工程菌株的浓度稀释至(103~104)个/mL后，再涂布于LB固体琼脂培养皿上，并置于35~38℃的恒温条件下进行活化培养，得到活化菌落。


3.根据权利要求1所述的一种重组蛋白的制备方法，其特征在于，所述一级培养的方法包括以下步骤：
挑取所述活化菌落接种到LB液体培养基中，并置于35~38℃的温度下进行震荡培养，得到一级种子；
所述二级培养的方法包括以下步骤：
挑取所...

【专利技术属性】
技术研发人员：周闯，张忠民，
申请(专利权)人：苏州佑宁康生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32