一种体外无细胞蛋白合成体系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种体外无细胞蛋白合成体系，包括：细胞提取物；糖类物质，所述糖类物质是麦芽糊精、乳糖、或麦芽糊精与葡萄糖的组合、或乳糖与葡萄糖的组合、或麦芽糊精与乳糖与葡萄糖的组合；磷酸化合物。本发明专利技术利用葡萄糖、麦芽糊精、乳糖等成本低廉的物质代替磷酸烯醇式丙酮酸，肌酸磷酸和乙酰磷酸等能量来源为体外反应提供ATP，降低成本的同时通过缓释提供能量的方式，延长反应时间并增加目标蛋白的产量。

【技术实现步骤摘要】
一种体外无细胞蛋白合成体系及其应用
本专利技术属于蛋白质合成
，具体涉及一种用于体外蛋白合成的无细胞蛋白合成体系。
技术介绍
蛋白质是细胞中的重要分子，几乎参与了细胞所有功能的执行。蛋白的序列和结构不同，决定了其功能的不同(1)。在细胞内，蛋白可以作为酶类催化各种生化反应，可以作为信号分子协调生物体的各种活动，可以支持生物形态，储存能量，运输分子，并使生物体运动(2)。在生物医学领域，蛋白质抗体作为靶向药物，是治疗癌症等疾病的重要手段(1,2)。传统的蛋白表达系统是指通过模式生物细菌、真菌、植物细胞或动物细胞等表达外源基因的一种分子生物学技术(3)。随着科学技术的发展，无细胞表达体系也称为体外蛋白合成系统应运而生，其是以外源目的mRNA或DNA为蛋白质合成模板，通过人工控制补加蛋白质合成所需的底物和转录、翻译相关蛋白因子等物质，能实现目的蛋白质的合成(3,4)。体外翻译系统中表达蛋白质无需进行质粒构建、转化、细胞培养、细胞收集和破碎步骤，是一种快速、省时、便捷的蛋白质表达方式(5,6)。蛋白质体外合成系统一般是指在细菌、真菌、植物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体外无细胞蛋白合成体系，其特征在于，所述无细胞蛋白合成体系包括：/n(a) 细胞提取物；/n(b) 糖类物质，所述糖类物质选自麦芽糊精、乳糖、或麦芽糊精与葡萄糖的组合、或乳糖与葡萄糖的组合、或麦芽糊精与乳糖与葡萄糖的组合；/n(c) 磷酸化合物。/n

【技术特征摘要】
1.一种体外无细胞蛋白合成体系，其特征在于，所述无细胞蛋白合成体系包括：
(a)细胞提取物；
(b)糖类物质，所述糖类物质选自麦芽糊精、乳糖、或麦芽糊精与葡萄糖的组合、或乳糖与葡萄糖的组合、或麦芽糊精与乳糖与葡萄糖的组合；
(c)磷酸化合物。


2.如权利要求1所述的无细胞蛋白合成体系，其特征在于：所述蛋白合成体系还包括活性酶，所述活性酶能够催化糖类物质代谢产生ATP。


3.如权利要求1所述的无细胞蛋白合成体系，其特征在于：所述蛋白合成体系还包括下组的一种或多种组分：
(d1)聚乙二醇；
(d2)用于合成RNA的底物；
(d3)用于合成蛋白的底物；
(d4)镁离子；
(d5)钾离子；
(d6)缓冲剂；
(d7)RNA聚合酶；
(d8)二硫苏糖醇(DTT)；
(d9)任选的溶剂，所述溶剂为水或水性溶剂。


4.如权利要求1所述的无细胞蛋白合成体系，其特征在于，所述磷酸化合物选自正磷酸盐、磷酸二氢盐、磷酸氢二盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、或其组合。


5.如权利要求1所述的无细胞蛋白合成体系，其特征在于：所述细胞提取物的细胞来源选自下组的一种或多种类型的细胞：大肠杆菌、哺乳动物...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭敏，徐开，赵玉莲，杨宁，于雪，
申请(专利权)人：康码上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31