通过Edc3基因敲除改变体外蛋白合成能力的方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种改变体外无细胞蛋白合成体系的蛋白合成能力的方法，其在真核生物的基因组中通过基因编辑技术将Edc3基因敲除，并将其用于体外无细胞蛋白合成体系。经试验验证，Edc3基因敲除能显著提高无细胞蛋白合成体系的蛋白表达能力。同时，本发明专利技术提供包含利用该基因改造方法进行改造的基因工程细胞的无细胞蛋白质合成体系及其蛋白合成方法及相应的试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
通过Edc3基因敲除改变体外蛋白合成能力的方法及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及Edc3基因敲除可以增强真核生物无细胞蛋白反应体系的蛋白合成能力。
技术介绍
体外无细胞蛋白合成体系是指以外源的mRNA或者DNA为模板，利用细胞抽提物的酶系中来合成蛋白质的体外系统。与传统的体内重组表达系统相比，无细胞蛋白反应体系有很多优点，如可以表达具有细胞毒性的蛋白或者含有非天然氨基酸的特殊蛋白质，而且利用其操作简便性可以进行高通量药物筛选和蛋白质组学研究。目前常用的无细胞蛋白质合成系统包括原核的大肠杆菌系统，真核的麦胚提取物、兔网织红细胞裂解物以及酵母细胞抽提物系统。其中酵母细胞可以通过发酵途径大量获取，兼具真核系统的蛋白修饰功能和大规模工业化应用的优势。但是目前市场上还没有真正可产业化的体外无细胞蛋白合成系统，不高的蛋白合成能力，昂贵的合成成本是制约这一技术的主要因素之一。Edc3(EnhancerofmRNA-decappingprotein3)基因在真核生物中相对保守，其编码的蛋白产物能促进mRNA5’去帽酶复合体的功能，去除5’帽本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改变体外无细胞蛋白合成体系的蛋白合成能力的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：/n（1）将待改造的真核细胞中原始存在的Edc3基因通过基因编辑技术去除，获得ΔEdc3改造菌株；/n（2）以上述ΔEdc3改造菌株制备细胞裂解液或细胞提取物；/n（3）将步骤（2）获得的细胞裂解液或细胞提取物用于体外无细胞蛋白质合成体系。/n

【技术特征摘要】
1.一种改变体外无细胞蛋白合成体系的蛋白合成能力的方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
（1）将待改造的真核细胞中原始存在的Edc3基因通过基因编辑技术去除，获得ΔEdc3改造菌株；
（2）以上述ΔEdc3改造菌株制备细胞裂解液或细胞提取物；
（3）将步骤（2）获得的细胞裂解液或细胞提取物用于体外无细胞蛋白质合成体系。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述真核细胞为哺乳动物细胞、植物细胞、酵母细胞、昆虫细胞之一或其任意组合。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述酵母细胞选自酿酒酵母、毕氏酵母、克鲁维酵母之一或其任意组合。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述克鲁维酵母属酵母选自乳酸克鲁维酵母、马克斯克鲁维酵母、多布克鲁维酵母之一或其任意组合。


5.一种体外无细胞蛋白合成体系，其特征在于：所述合成体系至少包括以下组分：细胞裂解液或细胞提取物，所述细胞裂解液或细胞提取物由ΔEdc3改造菌株制备获得，所述ΔEdc3改造菌株为...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭敏，姜灵轩，许乃庆，占魁，邓蜜妮，杨旭，娄旭，范万巧，杨宁，于雪，
申请(专利权)人：康码上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31