一种优化的体外无细胞蛋白合成体系及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种优化的体外无细胞蛋白合成体系，包括：细胞提取物，所述细胞提取物为插入T7 RNA聚合酶基因的酵母细胞提取物；糖类物质，所述糖类物质是葡萄糖与麦芽糊精的混合物；磷酸化合物；缓冲剂，所述缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷缓冲剂；编码外源蛋白的DNA分子模板，所述DNA分子模板为采用核酸等温扩增法制备，且所述DNA分子模板中在所述外源蛋白的编码序列的上游插入SEQ ID NO.1所示的序列。通过优化，降低了体外蛋白合成的成本，并增加了目标蛋白的产量。

【技术实现步骤摘要】
一种优化的体外无细胞蛋白合成体系及其应用
本专利技术属于蛋白质合成
，具体涉及一种用于体外蛋白合成的无细胞蛋白合成体系。
技术介绍
蛋白质是细胞中的重要分子，几乎参与了细胞所有功能的执行。蛋白的序列和结构不同，决定了其功能的不同(1)。在细胞内，蛋白可以作为酶类催化各种生化反应，可以作为信号分子协调生物体的各种活动，可以支持生物形态，储存能量，运输分子，并使生物体运动(2)。在生物医学领域，蛋白质抗体作为靶向药物，是治疗癌症等疾病的重要手段(1,2)。传统的蛋白表达系统是指通过模式生物细菌、真菌、植物细胞或动物细胞等表达外源基因的一种分子生物学技术(3)。随着科学技术的发展，无细胞表达体系也称为体外蛋白合成系统应运而生，其是以外源目的mRNA或DNA为蛋白质合成模板，通过人工控制补加蛋白质合成所需的底物和转录、翻译相关蛋白因子等物质，能实现目的蛋白质的合成(3,4)。体外翻译系统中表达蛋白质无需进行质粒构建、转化、细胞培养、细胞收集和破碎步骤，是一种快速、省时、便捷的蛋白质表达方式(5,6)。蛋白质体外合成系统一般是指在细菌、真菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体外无细胞蛋白合成体系，其特征在于，所述无细胞蛋白合成体系包括：/n(a) 细胞提取物，所述细胞提取物为插入T7 RNA 聚合酶基因的酵母细胞提取物；/n(b) 糖类物质，所述糖类物质是葡萄糖与麦芽糊精的混合物；/n(c) 磷酸化合物；/n(d) 缓冲剂，所述缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷缓冲剂；/n(e) 编码外源蛋白的DNA分子模板，所述DNA分子模板为采用核酸等温扩增法制备，且所述DNA分子模板中在所述外源蛋白的编码序列的上游插入SEQ ID NO.1所示的序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种体外无细胞蛋白合成体系，其特征在于，所述无细胞蛋白合成体系包括：
(a)细胞提取物，所述细胞提取物为插入T7RNA聚合酶基因的酵母细胞提取物；
(b)糖类物质，所述糖类物质是葡萄糖与麦芽糊精的混合物；
(c)磷酸化合物；
(d)缓冲剂，所述缓冲剂为三羟甲基氨基甲烷缓冲剂；
(e)编码外源蛋白的DNA分子模板，所述DNA分子模板为采用核酸等温扩增法制备，且所述DNA分子模板中在所述外源蛋白的编码序列的上游插入SEQIDNO.1所示的序列。


2.如权利要求1所述的无细胞蛋白合成体系，其特征在于：所述蛋白合成体系还包括下组的一种或多种组分：
(f1)聚乙二醇；
(f2)合成RNA的底物；
(f3)氨基酸混合物；
(f4)镁离子；
(f5)钾离子；
(f6)二硫苏糖醇(DTT)；
(f7)活性酶，所述活性酶能够催化糖类物质代谢产生ATP；
(f8)任选的水或水性溶剂。


3.如权利要求1所述的无细胞蛋白合成体系，其特征在于，所述磷酸化合物选自正磷酸盐、磷酸二氢盐、磷酸氢二盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、或其组合。


4.如权利要求1所述的无细胞蛋白合成体系，其特征在于：所述细胞提取物的细胞来源选自...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭敏，徐开，杨宁，章小铃，周子鉴，于雪，
申请(专利权)人：康码上海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31