用于土拉杆菌的CRISPR-Cas12a检测引物组及其应用制造技术

本发明专利技术公开了用于土拉杆菌的CRISPR‑Cas12a检测引物组及其应用。本发明专利技术提供了用于检测土拉杆菌的引物组，由RPA引物对和crRNA组成；所述RPA引物对是根据土拉杆菌基因组中SEQ ID No.1所示核苷酸序列设计的；所述crRNA包括锚定序列和向导序列，所述锚定序列能够与cas蛋白结合，所述向导序列与所述RPA引物对的扩增产物序列相匹配。本发明专利技术具有检测时间短、扩增效率高、灵敏度好且特异性强等特点，对土拉杆菌阳性质粒的检测灵敏度可达900拷贝/mL，对土拉杆菌基因组的检测灵敏度可达1260fg/mL。本发明专利技术在土拉杆菌的现场诊断方面具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
用于土拉杆菌的CRISPR-Cas12a检测引物组及其应用
本专利技术涉及生物
，具体涉及用于土拉杆菌的CRISPR-Cas12a检测引物组及其应用，更加具体的涉及用于土拉杆菌的CRISPR-Cas12a检测引物、crRNA及其用途。
技术介绍
土拉弗朗西斯菌(Francisellatularensis，简称土拉杆菌)是一种革兰氏阴性菌，可引起土拉热。土拉杆菌根据其生化性质、毒力和地理分布可分为4个亚种，其中土拉亚种也被称为A型，全北极亚种被称为B型，广泛分布于北半球，可感染包括人类在内的250多种动物，引起土拉热暴发流行。土拉杆菌是潜在的生物恐怖武器，二战和冷战期间曾被用于细菌武器。到目前为止，我国分离株及分子流行病调查显示中国土拉杆菌均为B型。土拉杆菌可经多种途径感染：节肢动物叮咬，接触感染的组织，吸入污染的灰尘和饮用水都会引起人类的感染。快速诊断土拉杆菌感染是治疗和预防土拉热病的关键。目前土拉杆菌的检测方法主要是基于传统培养方法上的检测和PCR方法。基于纯培养物的生化鉴定实验效率低，无法满足当前检测工作中对样品进行快速检测的要求，因本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测土拉杆菌的引物组，由RPA引物对和crRNA组成；/n所述RPA引物对是根据土拉杆菌基因组中SEQ ID No.1所示核苷酸序列设计的；/n所述crRNA包括锚定序列和向导序列，所述锚定序列能够与cas蛋白结合，所述向导序列与所述RPA引物对的扩增产物序列相匹配。/n

【技术特征摘要】
1.用于检测土拉杆菌的引物组，由RPA引物对和crRNA组成；
所述RPA引物对是根据土拉杆菌基因组中SEQIDNo.1所示核苷酸序列设计的；
所述crRNA包括锚定序列和向导序列，所述锚定序列能够与cas蛋白结合，所述向导序列与所述RPA引物对的扩增产物序列相匹配。


2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述RPA引物对为能够以土拉杆菌基因组为模板扩增得到SEQIDNo.1的第678-840位所示DNA片段的引物对；和/或
所述crRNA中，所述锚定序列为SEQIDNo.8的第1-21位，所述向导序列为SEQIDNo.8的第22-45位。


3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于：所述RPA引物对为由SEQIDNo.4和SEQIDNo.5所示的两条单链DNA组成的引物对；和/或
所述crRNA的核苷酸序列如SEQIDNo.8所示。


4.用于检测土拉杆菌的试剂盒，含有权利要求1-3中任一所述的引物组及crRNA。


5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有如下中的全部或部分：能结合单链核酸的重组酶、单链DNA结合酶、链置换型DNA聚合酶、dNTPs和醋酸镁。


6.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还含有cas12a...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁媛，白欣茹，王景林，孙岩松，辛文文，康琳，凤梓涵，高姗，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11