一种同时检测三种鱼源链球菌的试剂盒和检测方法技术

同时检测三种链球菌的引物组合，组成为：SEQ ID MO:1、2的检测无乳链球菌的上下游引物，SEQ ID MO:3、4的检测停乳链球菌链球菌的上下游引物，SEQ ID MO:5、6的检测海豚链球菌的上下游引物。一种试剂盒，由DNA提取试剂和PCR反应试剂组成，DNA提取试剂由TE缓冲液、蛋白酶K、氯仿、异丙醇、乙醇、双蒸水组成；PC反应试剂含有反应缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、所述6种引物、去离子水。同时检测所述三种链球菌的方法，用所述提取试剂提取样品中的DNA，用所述反应试剂对所述DNA作PCR扩增，所述扩增产物作凝胶电泳。本发明专利技术能同时检测所述三种链球菌，检测简便、快速、灵敏度高、特异性强，适用于水生动物大规模分子流行病学调查分析及水产品的质量安全检测需求。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测三种鱼源链球菌的试剂盒和检测方法
本专利技术属于生物
，涉及靶DNA片断的检测技术，具体涉及一种同时检测无乳链球菌、海豚链球菌及停乳链球菌的快速检测试剂盒及检测方法。技术背景鱼类链球菌病是由链球菌属细菌感染引起的传染病，致病菌种类主要包括海豚链球菌(Streptococcusiniae)、无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)和停乳链球菌(Streptococcusdysgalactiae)。链球菌感染宿主范围广、致死率高、发病持续时间长，给水产养殖业造成了巨大经济损失。无乳链球菌是罗非鱼最主要的致病菌之一，该菌也可引起多种水产动物如虹鳟、斑点叉尾鮰、牙鲆、大菱鲆、真鲷和齐口裂腹鱼等的败血症和脑膜炎。海豚链球菌最初分离自患病的淡水海豚，其后发现该菌可感染罗非鱼、虹鳟、大菱鲆、红拟石首鱼、牙鲆、斑点叉尾鮰和鲑鱼等几十种淡海水鱼类，引起养殖鱼类流行性脑膜炎，是水生动物暴发性疾病的重要原菌之一。停乳链球菌引起鱼类疾病的报道出现较晚，2004年日本的Nomoto等首次报道了停乳链球菌感染导致杜氏鰤和五条鰤死亡本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测无乳链球菌、海豚链球菌及停乳链球菌的引物组合，其成分及其核苷酸序列如下：/n检测无乳链球菌的上下游引物—/n引物Sa.tkt-F:5’-GTGCTGGCATAGATACGACG-3’,/n引物Sa.tkt-R:5’-CGCTTCACGGTGGGACT-3’,/n检测停乳链球菌的上下游引物—/n引物Sd.AtoB-F:5’-TAGGACAAAATGTGGCAAGAC-3’,/n引物Sd.AtoB-R:5’-GTCCAGTTCCCATCAGTTCAG-3’,/n检测海豚链球菌的上下游引物—/n引物Si.RecA-F:5’-TAAGGGTGCTGTTATGCGTCT-3’,/n引物S...

【技术特征摘要】
1.一种同时检测无乳链球菌、海豚链球菌及停乳链球菌的引物组合，其成分及其核苷酸序列如下：
检测无乳链球菌的上下游引物—
引物Sa.tkt-F:5’-GTGCTGGCATAGATACGACG-3’,
引物Sa.tkt-R:5’-CGCTTCACGGTGGGACT-3’,
检测停乳链球菌的上下游引物—
引物Sd.AtoB-F:5’-TAGGACAAAATGTGGCAAGAC-3’,
引物Sd.AtoB-R:5’-GTCCAGTTCCCATCAGTTCAG-3’,
检测海豚链球菌的上下游引物—
引物Si.RecA-F:5’-TAAGGGTGCTGTTATGCGTCT-3’,
引物Si.RecA-R:5’-CAGGCGTTGTTTCAGGGTTA-3’。


2.一种同时检测权利要求1所述三种链球菌的试剂盒，由DNA提取试剂和PCR反应试剂组成，其特征是所述DNA提取试剂和PCR反应试剂分别为：
(1)DNA提取试剂成分为5-15mMTris、0.5-1.5mMEDTA的pH8.0的TE缓冲液；蛋白酶K，浓度15-20mg/mL；100％的氯仿；100...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔺凌云，潘晓艺，沈锦玉，姚嘉赟，尹文林，曹铮，刘忆瀚，夏焱春，
申请(专利权)人：浙江省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33