用于新型冠状病毒基因疫苗的批量生产重组腺病毒的方法技术

本发明专利技术公开了用于新型冠状病毒基因疫苗的批量生产重组腺病毒的方法，包括如下的步骤：细胞扩增；扩增收获的细胞接种到填充床生物反应器内进行培养；进行病毒感染填充床生物反应器内的细胞，收获含有重组腺病毒的培养液；滤清和浓缩重组腺病毒的收集液；在重组腺病毒收集液中加入广谱内核酸酶进行核酸酶处理；用阴离子交换柱层析分离纯化核酸酶处理过的重组腺病毒收集液,得到纯化后的重组腺病毒。采用填充床生物反应器进行重组腺病毒的感染和扩增，效率高更适合于GMP生产环境的要求，采用全自动的柱层析分离纯化，实现了更加经济有效的大规模工业化GMP生产重组腺病毒制剂产品，用于预防新型冠状病毒的感染和传染。

【技术实现步骤摘要】
用于新型冠状病毒基因疫苗的批量生产重组腺病毒的方法
本专利技术属于生物制药工艺
，涉及用于用于新型冠状病毒基因疫苗的批量生产重组腺病毒的方法，应用于重组腺病毒基因治疗产品GMP的批量生产过程，特别是用于新型冠状病毒的重组腺病毒基因疫苗的GMP的批量生产过程。
技术介绍
经过几十年的研究和发展，基因治疗领域已有了长足的发展，并实现了产品突破。中国深圳赛百诺基因技术公司的重组腺病毒p53基因冶疗产品，荷兰UniQure公司的Glybera重组腺相关病毒(AAV)产品和美国SparkTherapeutics公司的Luxturna重组腺相关病毒(AAV)产品已先后得到政府医药监管机构的批准上市。新型冠状病毒(COVID-19)的突发给社会公共健康带来了巨大的危机，感染传染性非常强，给人类造成了巨大的社会健康和经济影响，受到人们的高度重视。目前还没有有效的治疗方法和预防疫苗。为了人民大众的健康，国家和社会的安全，急需开发可以预防新型冠状病毒感染的疫苗产品。常用的病毒疫苗研发方法包括1)灭活病毒疫苗，2)减活病毒疫苗，3)亚单位疫苗，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于新型冠状病毒基因疫苗的批量生产重组腺病毒的方法，其特征在于，/n包括如下的步骤：/nS1、取重组腺病毒包装细胞的工作细胞库的细胞，细胞融化后接种到细胞培养容器内进行细胞扩增；/nS2、将细胞培养容器内扩增收获的细胞接种到填充床生物反应器内进行培养；/nS3、取重组腺病毒的工作病毒库病毒进行感染填充床生物反应器内的细胞，使重组腺病毒释放到培养液内，收获含有重组腺病毒的培养液；/nS4、含有重组腺病毒的培养液进行滤清和浓缩，并用缓冲液稀释重组腺病毒收集液；/nS5、在重组腺病毒收集液中加入广谱内核酸酶进行核酸酶处理，降解游离的核酸分子；/nS6、用阴离子交换柱层析分离纯化核酸酶处理过的...

【技术特征摘要】
1.一种用于新型冠状病毒基因疫苗的批量生产重组腺病毒的方法，其特征在于，
包括如下的步骤：
S1、取重组腺病毒包装细胞的工作细胞库的细胞，细胞融化后接种到细胞培养容器内进行细胞扩增；
S2、将细胞培养容器内扩增收获的细胞接种到填充床生物反应器内进行培养；
S3、取重组腺病毒的工作病毒库病毒进行感染填充床生物反应器内的细胞，使重组腺病毒释放到培养液内，收获含有重组腺病毒的培养液；
S4、含有重组腺病毒的培养液进行滤清和浓缩，并用缓冲液稀释重组腺病毒收集液；
S5、在重组腺病毒收集液中加入广谱内核酸酶进行核酸酶处理，降解游离的核酸分子；
S6、用阴离子交换柱层析分离纯化核酸酶处理过的重组腺病毒收集液,得到纯化后的重组腺病毒。


2.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒基因疫苗的批量生产重组腺病毒的方法，其特征在于，
所述步骤S1中，细胞融化后接种到细胞培养容器内进行细胞扩增包括：
在细胞培养容器接种密度为0.5x104到5x104个/厘米2，在36-37℃37℃，5％的二氧化碳孵箱内培养到细胞密度至90％以上，用胰蛋白酶-EDTA将细胞脱壁进行收获，收获的细胞重复细胞扩增以达到需要量。


3.根据权利要求1或2所述的用于新型冠状病毒基因疫苗的批量生产重组腺病毒的方法，其特征在于，
所述步骤S1中，工作细胞库的细胞是重组腺病毒的生产细胞，是具有贴壁生长特性的克隆细胞。


4.根据权利要求3所述的用于新型冠状病毒基因疫苗的批量生产重组腺病毒的方法，其特征在于，
所述克隆细胞为SBN-1293克隆细胞。


5.根据权利要求1所述的用于新型冠状病毒基因疫苗的批量生产重组腺病毒的方法，其特征在于，
所述步骤S2中，填充床生物反应器采用可以实现三维高细胞浓度的有聚酯网和聚丙烯支撑架所构成的填料，采用DMEM+10％FBS...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐卫，
申请(专利权)人：赛诺深圳生物医药研究有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44