【技术实现步骤摘要】
用于癌症治疗的变体型p53基因及重组腺病毒
本专利技术属于基因工程
，涉及到一系列用于基因增强、添加和互补的癌症治疗的变体型p53基因，以及含有该变体型p53基因的重组腺病毒的构建方法。
技术介绍
自从明确基因功能缺陷是导致遗传疾病的主要诱因以来人们就一直设想使用基因治疗各种人类疾病。大多数情况下，基因缺陷的原因很可能是由于突变影响了其蛋白结构并迫使其无法发挥正常功能，或者突变影响了蛋白的表达水平从而导致蛋白突显的彻底失败亦或细胞周期中的不当表达。因此基因治疗的目标在于将治疗用基因导入目标细胞，修复那些诱病基因，以此恢复目标细胞的正常功能从而阻止疾病。在癌细胞中，利用肿瘤抑制基因p53进行治疗的主要原理在于阻止癌细胞的增殖与进犯能力，恢复肿瘤细胞的凋亡与坏死功能，以及p53自身带有的其他的一些功能。p53基因编码P53蛋白，它的全长表型由393个氨基酸残基组成。也存在其它较短的p53表型，主要来源于mRNA产物的选择性剪接。深圳市赛百诺基因技术有限公司自主研制开发的基因治疗产品“重组人p53腺病毒注射液”(今又...
【技术保护点】
1.用于癌症治疗的变体型p53基因，其特征在于，/n其cDNA碱基序列是由自然存在的p53基因的cDNA碱基序列中的72号密码子被目标密码子所替代构建，其中目标密码子为如下任意一种碱基序列：/nCCT,CCA,CCG,CGT,CGA,CGG,AGA,AGG,CTT,CTA,CTG,TTA,TTG,GCC,GCT,GCA,GCG,TGC,TGT,GAT,GAC,GAG,GAA,TTC,TTT,GGG,GGA,GGC,GGT,CAC,CAT,ATC,ATT,ATA,AAG,AAA,ATG,AAC,AAT,CAG,CAA,TCC,TCT,TCA,TCG,AGT,AGC,ACC,A...
【技术特征摘要】
1.用于癌症治疗的变体型p53基因，其特征在于，
其cDNA碱基序列是由自然存在的p53基因的cDNA碱基序列中的72号密码子被目标密码子所替代构建，其中目标密码子为如下任意一种碱基序列：
CCT,CCA,CCG,CGT,CGA,CGG,AGA,AGG,CTT,CTA,CTG,TTA,TTG,GCC,GCT,GCA,GCG,TGC,TGT,GAT,GAC,GAG,GAA,TTC,TTT,GGG,GGA,GGC,GGT,CAC,CAT,ATC,ATT,ATA,AAG,AAA,ATG,AAC,AAT,CAG,CAA,TCC,TCT,TCA,TCG,AGT,AGC,ACC,ACT,ACA,ACG,GTG,GTT,GTC,GTA,TGG,TAC,TAT。
2.根据权利要求1所述的用于癌症治疗的变体型p53基因，其特征在于，自然存在的p53基因的cDNA碱基序列如序列表中SeQIDNo.1至SeQIDNo.3中任一项所述。
3.一种基因载体，其特征在于，包含有如权利要求1中所述的用于癌症治疗的变体型p53基因，基因载体为质粒或重组腺病毒。
4.一种重组腺病毒，其特征在于，其构建方法是生成含有用于癌症治疗的变体型p53基因的变体中间质粒，再将变体中间质粒中含有变体型p53基因的DNA片段导入至穿梭质粒中，然后同源重组而得到含有变体型p53基因的重组腺病毒。
5.根据权利要求4所述的重组腺病毒，其特征在于，其中穿梭质粒的制备方法包括如下的步骤：
S1.在含有p53基因的病毒载体采用SalI限制性内切酶处理，分离，纯化含有p53表达盒的DNA片段；
S2.纯化后的SalI酶切DNA片段采用SacII进行酶切，得到SacII末端与SalI末端之间的SacII-SalI片段；
S3.合成一个DNA接头连接至SacII-SalI片段的SacII末端，该DNA接头具有一个XbaI末端替代的原来的SacII末端，得到XbaI-SalI片段；
S4.将XbaI-SalI片段导入进pSTL-AdEasy质粒中对应的XbaI与SalI多克隆位点，生成穿梭质粒。
6.根据权利要求5所述的重组腺病毒，其特征在于，所述步骤S3中的DNA接头的序列如下：
XbaI...
【专利技术属性】
技术研发人员：迪奥斯达德·鲍蒂斯塔，徐卫，
申请(专利权)人：赛诺深圳生物医药研究有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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