肝祖细胞样细胞库的构建方法及其制备的细胞株与应用技术

本发明专利技术提供了一种肝祖细胞样细胞库的构建方法，包括：对不同供体来源的人原代肝细胞培养物依次进行转化培养、冻存处理、增殖培养、第一传代处理、病毒感染、第二传代处理、连续筛选培养以及连续传代培养。本发明专利技术的所述异质性永生肝祖细胞样细胞库构建方法中，对每个供体来源的人原代肝细胞培养物在进行所述增殖培养前先进行转化培养，有利于赋予所述人原代肝细胞培养物良好的增殖性能，结合后续的培养参数控制，使得到的不同供体来源的永生肝祖细胞样细胞株具有良好的体外增殖能力。本发明专利技术还提供了所述肝祖细胞样细胞库的应用以及通过所述构建方法得到的细胞株。

【技术实现步骤摘要】
肝祖细胞样细胞库的构建方法及其制备的细胞株与应用
本专利技术涉及生物
，尤其涉及肝祖细胞样细胞库的构建方法及其制备的细胞株与应用。
技术介绍
肝衰竭是严重肝病的终末期表现，患者病死率为可高达50％～90％。其中，患者因药物不良反应导致药物性肝损伤的问题较突出，占急性肝衰竭病例的50％以上，从而导致药物开发失败或上市后撤回。药物开发失败或上市后撤回的大部分原因是由于存在对患者造成特异性毒性。现有技术中，肝细胞永生化是解决肝细胞来源的重要途径之一，通常对原代肝细胞或诱导干细胞分化而来的肝细胞样细胞进行永生化处理，将得到的细胞株应用于肝脏代谢异质性研究，以寻求对药物特异性毒性问题的解决之道。公开号为CN108330099A的中国专利技术专利申请公开了一种个性化肝细胞的培养和扩增方法，该方法将经过基因修饰的肝实质细胞置入肝细胞增殖培养基中进行培养和扩增，再对获得的肝细胞进行分化培养，得到了成熟肝实质细胞。然而，该方法先对肝实质细胞进行基因修饰，再进行后续的增殖培养和分化培养，容易影响得到的成熟肝实质细胞的体外增殖能力，且供体来源单本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肝祖细胞样细胞库的构建方法，其特征在于，包括：/nS1：提供不同供体来源的人原代肝细胞培养物，对每个供体来源的人原代肝细胞培养物在0.5×10

【技术特征摘要】
20190711 CN 20191062343691.一种肝祖细胞样细胞库的构建方法，其特征在于，包括：
S1：提供不同供体来源的人原代肝细胞培养物，对每个供体来源的人原代肝细胞培养物在0.5×104-5×104个/平方厘米的接种密度下进行7-14天的转化培养，然后对经所述转化培养后得到的每个供体来源的肝祖细胞样细胞系进行冻存处理，以得到异质性肝祖细胞样细胞库；
S2：对每个供体来源的肝祖细胞样细胞系解冻后进行增殖培养，以分别得到不同供体来源的贴壁细胞，每个供体来源的贴壁细胞的汇合率为70％-90％；
S3：对每个供体来源的贴壁细胞依次进行第一传代处理和病毒感染，并在所述病毒感染的过程中进行培养基置换；
S4：对经所述病毒感染后得到的每个供体来源的培养物进行传代次数为2或3的第二传代处理，通过筛选培养基对经所述第二传代处理后得到的培养物进行连续筛选培养，以得到不同供体来源的感染培养物；
S5：对每个供体来源的感染培养物进行传代比例为1:2-1:4，传代次数为5-10的连续传代培养，以得到所述肝祖细胞样细胞库。


2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述转化培养结束后，对经所述转化培养后得到的培养物依次进行2或3次的扩增培养后，再执行所述冻存处理。


3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述肝祖细胞样细胞系在0.5×104-5×104个/平方厘米的接种密度下进行所述增殖培养，所述增殖培养开始后的三天内，每天进行培养基置换。


4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S3中，所述每个供体来源的贴壁细胞在2×104-4×104个/平方厘米的接种密度下进行24小时的所述第一传代处理。


5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤S3中，经所述第一传代处理后得到的培养物在2×104-4×104个...

【专利技术属性】
技术研发人员：鄢和新，
申请(专利权)人：上海赛立维生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31