使用加标签的向导RNA构建体进行高效基因筛选的组合物和方法技术

本发明专利技术提供了使用一组或多组具有内部标签(“iBAR”)的向导RNA构建体进行基因筛选的组合物、试剂盒和方法。每组具有三个或更多个靶向相同基因组基因座的向导RNA构建体，但嵌入有不同的iBAR序列。

Compositions and methods for efficient gene screening using tagged guide RNA constructs

【技术实现步骤摘要】
使用加标签的向导RNA构建体进行高效基因筛选的组合物和方法
本专利技术涉及使用具有内部标签(“iBAR”)的向导RNA构建体进行基因筛选的组合物，试剂盒和方法。
技术介绍
CRISPR/Cas9系统实现了以高的效率和特异性在靶标基因组位点上进行编辑1-2。其为数众多的用途之一是通过将高通量汇集测序与二代测序(“NGS”)分析相结合来鉴定出编码基因、非编码RNA和调节元件的功能。通过将汇集的单向导RNA(“sgRNA”)或配对向导RNA(“pgRNA”)的文库引入至表达Cas9的细胞或者与效应子结构域融合的无催化活性的Cas9(dCas9)，研究人员可以通过产生多种突变、大的基因组缺失、转录激活或转录抑制来实施多重基因筛选。为了在任何给定的汇集的CRISPR筛选中产生高质量的gRNA细胞库，必须在细胞库构建期间使用低的感染复数(“MOI”)来确保每个细胞平均收纳少于1个sgRNA或pgRNA以使该筛选的假阳性率(FDR)6,10,11最小化。为了进一步降低FDR并提高数据重现性，通常需要深入覆盖gRNA和多个生物学复本以获得带有高本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一组sgRNA

【技术特征摘要】
20181220 CN 20181156481571.一组sgRNAiBAR构建体，其包含三个或更多个sgRNAiBAR构建体，每个构建体包含或编码sgRNAiBAR，其中每个sgRNAiBAR具有包含向导序列和内部标签(iBAR)序列的sgRNAiBAR序列，其中每个向导序列与靶基因组基因座互补，其中三个或更多个sgRNAiBAR构建体的向导序列是相同的，其中三个或更多个sgRNAiBAR构建体中每个的iBAR序列彼此不同，并且其中每个sgRNAiBAR可与Cas蛋白合作以修饰靶基因组基因座。


2.根据权利要求1所述的sgRNAiBAR构建体组，其中每个sgRNAiBAR序列包含第一茎序列和第二茎序列，其中第一茎序列与第二茎序列杂交以形成与Cas蛋白相互作用的双链RNA区域，并且其中iBAR序列位于第一茎序列和第二茎序列之间。


3.根据权利要求1或2所述的sgRNAiBAR构建体组，其中所述Cas蛋白是Cas9。


4.根据权利要求3所述的sg...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏文胜，朱诗优，曹中正，刘志恒，何苑，袁鹏飞，
申请(专利权)人：北京大学，博雅缉因北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11