一种人α-乳清蛋白基因定点整合转基因奶牛的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种人α‑乳清蛋白基因定点整合转基因奶牛的制备方法。本发明专利技术的发明专利技术人利用牛α‑酪蛋白高表达的优点，将人乳清蛋白基因替换到此基因，实现外源基因安全、持续、特异高表达，同时解决牛奶中牛α‑酪蛋白的致敏问题。本发明专利技术首次建立了快速、高效的制备人乳清蛋白人源化转基因大动物的方法。利用本发明专利技术的细胞系经体细胞克隆方法即可得到精确基因修饰的大动物，将大大提高哺乳动物的育种效率。

【技术实现步骤摘要】
一种人α-乳清蛋白基因定点整合转基因奶牛的制备方法
本专利技术涉及一种人α-乳清蛋白基因定点整合转基因奶牛的制备方法。
技术介绍
牛奶含有丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物和矿物质，是一种重要的营养来源，是一种全球消耗的食品。虽然通过传统育种策略、营养管理以及数量遗传学可以提高牛奶的产量，但是，在牛奶的组成成分上还没有明显改变。同时，牛奶与人奶相比并不完美，很多方面存在缺陷，并不适合人类，特别是婴儿。例如，牛奶和人奶的组成有很多区别，主要如下：第一、母乳中乳铁蛋白的含量是牛奶中的10倍；第二、两者的酪蛋白和乳清蛋白比例大不相同，其中母乳中乳清与酪蛋白比例为70:30，然而牛奶中比例仅为20:80，同时母乳中不含有α-酪蛋白，但是牛奶中α-酪蛋白含量高；第三，母乳中不含有乳球蛋白(BLG)，牛奶中含有。这些区别造成了牛奶的品质远远低于母乳。乳清蛋白是多种蛋白质组分的统称，主要包含α-乳清蛋白、β-乳球蛋白、乳铁蛋白、血清白蛋白、免疫球蛋白和生长因子等。其中α-乳清蛋白(α-La)是乳清蛋白中很重要同时含量也很高的成分，存在于所有哺乳动物乳汁中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.基因编辑牛的制备方法，包括如下步骤：将出发牛基因组中牛内源αs1-酪蛋白基因上游同源臂和下游同源臂之间的部分替换为特定片段；所述特定片段含有人乳清蛋白基因；所述上游同源臂如SEQ ID No.7自5’端第675-2645位所示；所述下游同源臂如SEQ IDNo.7自5’端第10343-12361所示；所述人乳清蛋白基因如SEQ ID No.8自5’端第1-2064位所示。/n

【技术特征摘要】
1.基因编辑牛的制备方法，包括如下步骤：将出发牛基因组中牛内源αs1-酪蛋白基因上游同源臂和下游同源臂之间的部分替换为特定片段；所述特定片段含有人乳清蛋白基因；所述上游同源臂如SEQIDNo.7自5’端第675-2645位所示；所述下游同源臂如SEQIDNo.7自5’端第10343-12361所示；所述人乳清蛋白基因如SEQIDNo.8自5’端第1-2064位所示。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述特定片段如SEQIDNo.8所示。


3.基因编辑牛的制备方法，包括如下步骤（1）和步骤（2）：
（1）供体细胞的制备：将打靶载体、TALENs质粒甲和TALENs质粒乙导入牛成纤维细胞，通过基因编辑得到阳性供体细胞；
（2）将所述阳性供体细胞通过体细胞核移植技术克隆得到基因编辑牛；
所述打靶载体中包括如下元件：牛内源αs1-酪蛋白基因上游同源臂、人乳清蛋白基因和牛内源αs1-酪蛋白基因下游同源臂；所述上游同源臂如SEQIDNo.7自5’端第675-2645位所示；所述下游同源臂如SEQIDNo.7自5’端第10343-12361位所示；所述人乳清蛋白基因如SEQIDNo.7自5’端第2646-4709位所示；
所述TALENs质粒甲包括TALENs上游质粒甲和TALENs下游质粒甲；所述TALENs上游质粒甲可以识别SEQIDNo.1所示的区段；所述TALENs下游质粒甲可以识别SEQIDNo.2所示的区段；
所述TALENs质粒乙包括TALENs上游质粒乙和TALENs下游质粒乙；所述TALENs上游质粒乙可以识别SEQIDNo.4所示的区段；所述TALENs下...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明，戴蕴平，孙照霖，丁方荣，王海萍，李玲，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11