Mbp基因过表达型小胶质细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种Mbp基因过表达型小胶质细胞及其制备方法和应用，涉及基因工程技术领域。本发明专利技术公开的制备方法包括将Mbp基因插入过表达慢病毒载体中，得到重组慢病毒载体，然后将重组慢病毒载体与慢病毒包装质粒共同转染宿主细胞以制备Mbp基因过表达的重组慢病毒，重组慢病毒感染小胶质细胞以得到Mbp基因过表达型小胶质细胞。该制备方法可以制备出Mbp基因过表达型小胶质细胞，该小胶质细胞可以稳定和高效表达Mbp基因，Mbp基因能够在小胶质细胞内发挥正常生物学作用，为研究MBP在小胶质细胞内的具体功能以及调控机制等提供可靠的细胞材料。

Overexpression microglia of MBP gene and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
Mbp基因过表达型小胶质细胞及其制备方法和应用
本专利技术涉及基因工程
，具体而言，涉及Mbp基因过表达型小胶质细胞及其制备方法和应用。
技术介绍
神经炎症是指发生在中枢神经系统及周围神经系统中的炎症反应。大量的研究发现，多种中枢神经疾病的发生发展与神经炎症密切相关，如阿尔茨海默病(Alzheimerdisease，AD)、帕金森病(PA20001809rkinsondisease，PD)和脑梗死等。神经炎症主要通过炎症介质、炎性细胞因子及氧化应激产物的产生和释放造成神经元变性坏死，从而引发脑损伤。神经炎症相关疾病的不良预后严重影响了患者的生存生活质量，巨额治疗费用给家庭和社会带来沉重的负担，有研究表明PD每年给我国带来的经济负担大概170亿元。而且其不良预后严重影响了患者和家庭的生存生活质量。所以深入研究神经炎症的发生机制，有望为中枢神经系统疾病的预防和治疗提供新的思路和理论依据。激活的小胶质细胞在神经炎症相关性疾病的发生发展过程中发挥重要作用。小胶质细胞由血液中的单核细胞演化而来。一般情况下，中枢神经系统内的小胶质细胞处于静止状态，病理状态下，如中枢神经系统疾病、中风等会导致小胶质细胞的活化。活化的小胶质细胞通过分泌炎症介质、共激活星形胶质细胞，引起大量自由基、一氧化氮、蛋白酶、炎症细胞因子等释放，致使中枢神经系统发生炎性损害和神经细胞死亡。此外，活化的小胶质细胞及其产生的细胞炎症因子亦可破坏血脑屏障结构，易于外周血中T淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞等进入脑内，与星形胶质细胞等共同产生更多的炎症介质，进而引起炎症级联反应，加重脑组织的损伤。MBPs是髓鞘蛋白的重要构成成分,主要分布在中枢和周围神经系统的髓鞘形成细胞(少突胶质细胞及施旺细胞)内。巨噬细胞中有MBPs表达，LingEA等人的研究发现两种MCs内均有Mbp基因表达。同时FilipovicR.研究小组发现激活小胶质细胞内MBPs表达增高。但是MBPs在小胶质细胞内的具体功能及调控机制目前仍不清楚且未见报道。而研究MBPs在小胶质细胞内的具体功能及调控机制又缺乏相应的细胞材料。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种Mbp基因过表达型小胶质细胞及其制备方法和应用。本专利技术提供的制备方法可以制备出Mbp基因过表达型小胶质细胞，该小胶质细胞可以稳定表达Mbp基因，该基因可在小胶质细胞内发挥正常生物学功能，本专利技术为研究MBP在小胶质细胞内的具体功能以及调控机制等提供可靠的细胞材料。本专利技术是这样实现的：一方面，本专利技术提供制备Mbp基因过表达型小胶质细胞的方法，其包括如下步骤：重组过表达慢病毒包装步骤：将Mbp基因插入过表达慢病毒载体中，得到重组慢病毒载体，然后将所述重组慢病毒载体与慢病毒包装质粒共同转染宿主细胞以制备Mbp基因过表达的重组慢病毒；其中，所述过表达慢病毒载体为LentiORFpLEX-MCS；细胞侵染步骤：将所述Mbp过表达的重组慢病毒感染小胶质细胞以得到Mbp基因过表达型小胶质细胞。本专利技术提供的制备方法通过选用特定的过表达慢病毒过表达载体LentiORFpLEX-MCS，制备重组慢病毒，再用该慢病毒感染小胶质细胞，使得Mbp基因能够在小胶质细胞中稳定地表达并发挥正常的生物学功能，该小胶质细胞具有相应的表型或特征；可以用于研究MBP在小胶质细胞内的具体功能以及调控机制等领域，为其提供可靠的细胞材料。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述包装质粒包括pVSV-G、pRev和pRRE。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述宿主细胞为293T细胞。需要说明的是，宿主细胞可以根据实际情况选择，包括但不限于293T细胞，也可以是其他类型的细胞，其均属于本专利技术的保护范围。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述小胶质细胞的种属来源为哺乳动物。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述哺乳动物选自小鼠、大鼠、猪、牛、马和羊中的任意一种。需要说明的是，本专利技术的制备方法可以根据研究需要，选择合适的种属来源的小胶质细胞作为目标细胞，包括但不限于小鼠、大鼠、猪、牛、马和羊，其他哺乳动物来源的小胶质细胞也是可以作为目标细胞进行细胞侵染，无论是何种哺乳动物来源的小胶质细胞，其均是属于本专利技术的保护范围。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述哺乳动物为小鼠。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，Mbp基因所编码的MBP蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示：MASQKRPSQRSKYLATASTMDHARHGFLPRHRDTGILDSIGRFFSGDRGAPKRGSGKVPWLKQSRSPLPSHARSRPGLCHMYKDSHTRTTHYGSLPQKSQHGRTQDENPVVHFFKNIVTPRTPPPSQGKGRGLSLSRFSWGAEGQKPGFGYGGRASDYKSAHKGFKGAYDAQGTLSKIFKLGGRDSRSGSPMARR。需要说明的是，本领域技术人员可以根据需要，容易在SEQIDNO.1的基础上，进行一个或多个氨基酸的替换或删除或增加等操作并使得到的MBP蛋白变体与SEQIDNO.1的MBP蛋白具有相同的生物学功能，基于此，本专利技术的MBP蛋白也可以是在SEQIDNO.1的基础上进行一个或多个氨基酸的替换或删除或增加等操作所得到的具有等同生物学功能的MBP蛋白变体。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，该Mbp基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示(CDS)：atggcatcacagaagagaccctcacagcgatccaagtacctggccacagcaagtaccatggaccatgccaggcatggcttcctcccaaggcacagagacacgggcatccttgactccatcgggcgcttctttagcggtgacaggggtgcgcccaagcggggctctggcaaggtaccctggctaaagcagagccggagccctctgccctctcatgcccgcagccgtcctgggctgtgccacatgtacaaggactcacacacgagaactacccattatggctccctgccccagaagtcgcagcacggccggacccaagatgaaaacccagtagtccatttcttcaagaacattgtgacacctcgaacaccacctccatcccaagggaaggggagaggcctgtccctcagcagatttagctggggggccgaggggcagaagccaggatttggctacggaggcagagcttccgactataaatcggctcacaagggattcaagggggcctacgacgcccagggcacgctttccaaaatctttaagctgggaggaagagacagccgctctggatctcccatggcgagacgctga。Mbp基因的转录本有17种，选择将转录本1即myelinbasicprote本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备Mbp基因过表达型小胶质细胞的方法，其特征在于，其包括如下步骤：/n重组过表达慢病毒包装步骤：将Mbp基因插入过表达慢病毒载体中，得到重组慢病毒载体，然后将所述重组慢病毒载体与慢病毒包装质粒共同转染宿主细胞以制备Mbp基因过表达的重组慢病毒；/n其中，所述过表达慢病毒载体为LentiORF pLEX-MCS；/n细胞侵染步骤：将所述Mbp过表达的重组慢病毒感染小胶质细胞以得到Mbp基因过表达型小胶质细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备Mbp基因过表达型小胶质细胞的方法，其特征在于，其包括如下步骤：
重组过表达慢病毒包装步骤：将Mbp基因插入过表达慢病毒载体中，得到重组慢病毒载体，然后将所述重组慢病毒载体与慢病毒包装质粒共同转染宿主细胞以制备Mbp基因过表达的重组慢病毒；
其中，所述过表达慢病毒载体为LentiORFpLEX-MCS；
细胞侵染步骤：将所述Mbp过表达的重组慢病毒感染小胶质细胞以得到Mbp基因过表达型小胶质细胞。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述包装质粒包括pVSV-G、pRev和pRRE。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述宿主细胞为293T细胞。


4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述小胶质细胞的种属来源为哺乳动物。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物选自小鼠、大鼠、猪、牛、马和羊中的任意一种；
优选地，所述哺乳动物为小鼠。


6.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，Mbp基因所编码的MBP蛋白质的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示；
优选地，Mbp基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨丽娟，周美玲，王姝蕾，王芳，肖继坪，陈波，易子寒，华海蓉，
申请(专利权)人：昆明医科大学，
类型：发明
国别省市：云南;53