一种脐带血淋巴细胞CIK的培养方法技术

本发明专利技术属于免疫细胞体外培养技术领域，特别公开了一种脐带血淋巴细胞CIK的培养方法。本发明专利技术以脐带血为处理对象，经过脐带血单个核细胞的分离，CIK细胞的提纯诱导，CIK细胞的培养扩增，最后离心收集成熟的脐带血CIK细胞，得到产品。本发明专利技术通过用添加IFN‑γ和α‑半乳糖神经酰胺对CIK细胞进行激活，培养前期加入CD3单克隆抗体、IL‑1α、IL‑2及IL‑1β连续刺激，省去包被时间，提高效应细胞群活化效率和扩增效率。

【技术实现步骤摘要】
一种脐带血淋巴细胞CIK的培养方法
本专利技术涉及免疫细胞体外培养
，特别是涉及脐带血淋巴细胞CIK的培养方法。
技术介绍
过继性免疫细胞疗法是将具有特异免疫力的淋巴细胞或其产物输给细胞免疫功能失调(如肿瘤病人以及免疫力过高或过低导致的其他疾病)，调节患者抗肿瘤免疫力，以达到治疗和预防复发的目的。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkillercells，CIK)是将人外周血或者脐带血单个核细胞在体外用多种细胞因子(如抗CD3单克隆抗体、IL-2、α-半乳糖神经酰胺、IL-1β和IFN-γ等)诱导增殖后获得的一群异质细胞。由于其同时表达CD3+和CD56+两种膜蛋白分子，又被称为NK细胞样T淋巴细胞，同时具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。然而NKT细胞在正常的脐带血中含量极低，仅为1％左右。因此，在体外培养中，提高CIK细胞的数量及其效应细胞NKT细胞的比例对提高临床治疗效果有着至关重要的作用。有研究表明，脐带血来源的CIK细胞和外周血来源的CIK细胞相比，有更高的增殖能力、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脐带血淋巴细胞CIK的培养方法，以脐带血为原始材料，其特征为，所述脐带血淋巴细胞CIK的培养方法包括如下步骤：/n（1）从脐带血中分离得到出脐带血单个核细胞；/n（2）将步骤 (1)中制得的单个核细胞采用添加了IFN-γ、自体血清和α-半乳糖神经酰胺的淋巴细胞无血清培养基重悬，转移至培养瓶中，37℃、5%CO

【技术特征摘要】
1.一种脐带血淋巴细胞CIK的培养方法，以脐带血为原始材料，其特征为，所述脐带血淋巴细胞CIK的培养方法包括如下步骤：
（1）从脐带血中分离得到出脐带血单个核细胞；
（2）将步骤(1)中制得的单个核细胞采用添加了IFN-γ、自体血清和α-半乳糖神经酰胺的淋巴细胞无血清培养基重悬，转移至培养瓶中，37℃、5%CO2培养箱静置培养24h；
（3）静置培养24h后加CD3单克隆抗体、IL-1α、IL-2及IL-1β；
（4）静置培养第3天加入含IL-2和自体血清的淋巴细胞无血清培养基，使得细胞浓度在1.0ⅹ106~2.0ⅹ106/ml；
(5)静置培养第5天继续加入当天含IL-2和自体血清的淋巴细胞无血清培养基，使得细胞浓度在1.0ⅹ106~2.0ⅹ106/ml；
（6）静置培养第7天转至培养袋中培养，添加含IL-2和自体血清的淋巴细胞无血清培养基，使得细胞浓度在1.0ⅹ106~2.0ⅹ106/ml；
（7）静置培养第9天、添加含IL-2的淋巴细胞无血清培养基，使得细胞浓度在1.0ⅹ106~2.0ⅹ106/ml；
（8）静置培养第11天、添加含IL-2的淋巴细胞无血清培养基，使得细胞浓度在1.0ⅹ106~2.0ⅹ106/ml；
（9）静置培养第14天将培养好的脐带血免疫细胞CIK细胞离心收集，并用0.9wt%生理盐水洗涤，再向收集好的细胞中加入人血清白蛋白，并用0.9wt%生理盐水定容，得到产品。


2.根据权利要求1所述的一种脐带血淋巴细胞CIK的培养方法，其特征在于：所述淋巴细胞无血清培养基是用于培养淋巴细胞的所有培养基。


3.根据权利要求2所述的一种脐带血淋巴细胞CIK的培养方法，其特征在于：所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢海涛，薛卫巍，钟家炜，谢天仲，王斌，王乃会，
申请(专利权)人：广东先康达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44