一种分离提纯来自血浆的外泌体的方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种分离提纯来自血浆的外泌体的方法，步骤如下：取人血浆离心后取上清；将离心后的血浆超速离心；离心后抽取上清；将上清离心、倾倒上清后倒置；待管内无可见液滴后，使用滤纸在管内壁进行擦拭；使用PBS反复吹打管底、重悬后注入PBS，混匀；过滤上述重悬液；使用PBS将过滤后的重悬液体积补充后加入超速离心管；离心、倾倒、倒置；待管内无可见液滴后，使用滤纸在管内壁进行擦拭；加入PBS或裂解液重悬管底的沉淀，得到外泌体。本发明专利技术方法结合了超速离心以及滤膜过滤的方法，操作简单，可以从较小量的血浆中提取外泌体，所提取的外泌体含量较多，可以用于一系列生物学实验。

【技术实现步骤摘要】
一种分离提纯来自血浆的外泌体的方法和应用
本专利技术属于生物医学
，尤其是一种分离提纯来自血浆的外泌体的方法和应用。
技术介绍
细胞外囊泡(extracellularvesicle,EV)是外泌体(exosomes)、微囊泡(microvesicle)和凋亡小体等细胞释放的带有膜结构小体的总称。其中外泌体是细胞分泌的直径在30-150nm之间的纳米级微囊泡。外泌体起源于细胞核内体，表面是双层脂质膜，富含来自母体细胞的蛋白、脂质、转运RNA和小RNA成分，是细胞间信号传导的重要媒介。双层脂质膜不仅可保护外泌体携带的成分长时间保持生物学活性，而且可使得外泌体携带大分子蛋白穿过血脑或血眼屏障。外泌体由于有双层脂质膜的保护，其包裹的蛋白质和RNA成分可长时间保持稳定不被降解，因此外泌体中的蛋白较血浆蛋白稳定性更好。由于具有双层脂质膜结构，外泌体还可通过血脑、血眼生物学屏障。目前，外泌体已用于多种疾病的诊断和发病机制研究，例如，血清中携带磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1的外泌体可作为早期胰腺癌诊断的生物学标记物；血浆外泌体中α突触核蛋白的表达水平可作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离提纯来自血浆的外泌体的方法，其特征在于：步骤如下：/n⑴取人血浆，经2000g×15min离心后取上清；/n⑵将离心后的血浆与PBS混合后进行超速离心；/n⑶4℃，80000g×30min离心后抽取上清；/n⑷将上清转移入新的超速离心管，4℃，110，000g×120min离心后，倾斜30-60度倾倒上清后，将管倒置放于滤纸上；/n⑸待管内无可见液滴后，使用滤纸在管内壁进行擦拭，避免碰到管底；/n⑹使用PBS反复吹打管底，轻柔重悬管底的沉淀，充分重悬后注入PBS，混匀；/n⑺使用220μm的PVDF滤膜过滤上述重悬液；/n⑻使用PBS将过滤后的重悬液体积补充后加入超速离心管；/n⑼...

【技术特征摘要】
1.一种分离提纯来自血浆的外泌体的方法，其特征在于：步骤如下：
⑴取人血浆，经2000g×15min离心后取上清；
⑵将离心后的血浆与PBS混合后进行超速离心；
⑶4℃，80000g×30min离心后抽取上清；
⑷将上清转移入新的超速离心管，4℃，110，000g×120min离心后，倾斜30-60度倾倒上清后，将管倒置放于滤纸上；
⑸待管内无可见液滴后，使用滤纸在管内壁进行擦拭，避免碰到管底；
⑹使用PBS反复吹打管底，轻柔重悬管底的沉淀，充分重悬后注入PBS，混匀；
⑺使用220μm的PVDF滤膜过滤上述重悬液；
⑻使用PBS将过滤后的重悬液体积补充后加入超速离心管；
⑼4℃，150，000...

【专利技术属性】
技术研发人员：李筱荣，张晓敏，张慧，
申请(专利权)人：天津医科大学眼科医院，
类型：发明
国别省市：天津;12