一种动物免疫淋巴细胞分离液及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种动物淋巴细胞分离液，其特征在于，包括如下质量百分比的各组分：碘他拉葡胺5‑10%、羟丙基‑β‑环糊精3‑5%、1,3:2,4‑二(亚苄基)‑D‑山梨醇0.2‑1%、甘草酸铵0.1‑0.5%、1‑烯丙基‑3‑甲基氯化咪唑/马来酰亚胺‑三(乙烯乙二醇)‑丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物0.5‑1.5%、非糖基单元的亲水性高分子聚合物0.8‑1.5％，余量为无热源的去离子水。本发明专利技术还公开了所述动物淋巴细胞分离液的制备方法。本发明专利技术公开的动物淋巴细胞分离液既能保证安全性又能保证分离效率、纯度，无细胞毒性，其内毒素含量低，使得分离的淋巴细胞状态好，活力高，除应用于科学研究外还可广泛应用于临床诊断，具有良好的市场前景。

【技术实现步骤摘要】
一种动物免疫淋巴细胞分离液及其制备方法
本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种动物淋巴细胞分离液及其制备方法。
技术介绍
淋巴细胞作为一种效应细胞，广泛存在于人外周血液、骨髓或人脐带血中。高纯度的淋巴细胞的获取对于疾病的细胞学诊断、成分输血、治疗用细胞产品的制备等具有非常重要的意义。在临床医学检验中，针对特定细胞功能和生物学特性的检查常常涉及到细胞的分离技术，从外周血液和各种体液(胸水、腹水、心包积液等)中分离单个核细胞是体外进行淋巴细胞免疫学研究和细胞学实验的重要前处理步骤，分离的目的细胞的质和量是保证后续实验可靠性的重要环节，因此，发展动物淋巴细胞分离技术显得尤为重要。在标准的细胞分离过程中，细胞必须与分离液接触15-45分钟的时间，以达到最佳分离效果。在这段时间内，分离液中各组分可能通过被动扩散、细胞的主动运输、胞吞/胞饮作用、表面黏附等途径，在细胞内部蓄积，且此部分蓄积成分，很难通过常规的洗涤从分离得到的目标细胞(例如淋巴细胞)中完全去除。目前，普遍采用的是淋巴细胞分离液通过密度梯度法实现细胞分离。在细胞分离过程中，分离液的成分对淋巴细胞分离的效果和效率格外重要。传统动物淋巴细胞分离液中含有葡聚糖或Ficoll400成分。葡聚糖是由葡萄糖经过菌种发酵而得，因此其内毒素水平较高，会影响淋巴细胞的表面蛋白活性，且分离液中含不通透的离子diatrizoate(泛影葡胺)，会影响离子通透膜的Gibbs-Donnan平衡(吉布斯—道南膜平衡)。所以，传统的淋巴细胞分离液对细胞有毒性，分得细胞状态不好，影响细胞活性，不利于所提取细胞的后续培养及临床治疗的应用。Ficoll400并无临床应用，其毒理学、药物代谢动力学特性均没有相关数据支撑。Ficoll400在分离中不表现出对细胞的毒性，但化学品安全说明书(MSDS)中的数据显示，慢毒试验中Ficoll400表现出一定毒性，包括恶心、呕吐、头痛甚至昏迷，皮肤严重红肿、水肿等。曾有研究者使用右旋糖酐代替常用的Ficoll400，提高了一定的安全性，并使用羟乙基淀粉提高分离效率。虽然羟乙基淀粉(HydroxyethylStarch)是复方制剂，但长期大剂量使用羟乙基淀粉，患者会出现皮肤瘙痒。严重肝脏疾病或严重凝血功能紊乱的病人应慎用。使羟乙基淀粉在临床中的应用受到限制。因此，有必要提供一种既能保证安全性又能保证分离效率、纯度的淋巴细胞分离液。
技术实现思路
本专利技术旨在解决上述问题，提供了一种动物淋巴细胞分离液及其制备方法，该制备方法简单易行，对设备要求不高，原料易得，具有较高的经济价值和市场推广应用价值；制备得到的动物淋巴细胞分离液既能保证安全性又能保证分离效率、纯度，无细胞毒性，其内毒素含量低，使得分离的淋巴细胞状态好，活力高，除应用于科学研究外还可广泛应用于临床诊断，具有良好的市场前景。为实现上述目的，本专利技术提供以下的技术方案，一种动物淋巴细胞分离液，其特征在于，包括如下质量百分比的各组分：碘他拉葡胺5-10%、羟丙基-β-环糊精3-5%、1,3:2,4-二(亚苄基)-D-山梨醇0.2-1%、甘草酸铵0.1-0.5%、1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑/马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物0.5-1.5%、非糖基单元的亲水性高分子聚合物0.8-1.5％，余量为无热源的去离子水。进一步地，所述非糖基单元的亲水性高分子聚合物选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯醇中的至少一种。进一步地，所述1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑/马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物的制备方法，包括如下步骤：将1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑、马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸、聚乙二醇单烯丙基醚、引发剂溶于高沸点溶剂中，在氮气或惰性气体氛围，65-75℃下搅拌反应4-6小时，后旋蒸除去溶剂，得到所述1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑/马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物。较佳地，所述1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑、马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸、聚乙二醇单烯丙基醚、引发剂、高沸点溶剂的质量比1:1:(2-3):(0.03-0.05):(15-20)。较佳地，所述引发剂为偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈中的至少一种。较佳地，所述高沸点溶剂为二甲亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮中的至少一种。较佳地，所述惰性气体为氦气、氖气、氩气中的一种。进一步地，所述动物淋巴细胞分离液的制备方法，包括如下步骤：按照配比将各组分混合，在室温下搅拌1-2小时，后除菌过滤，得到所述动物淋巴细胞分离液。由于上述技术方案运用，本专利技术与现有技术相比具有下列优点：（1）本专利技术提供的动物淋巴细胞分离液，制备方法简单易行，对设备要求不高，原料易得，具有较高的经济价值和市场推广应用价值。（2）本专利技术提供的动物淋巴细胞分离液，各组分协同作用，既能保证安全性又能保证分离效率、纯度，无细胞毒性，其内毒素含量低，使得分离的淋巴细胞状态好，活力高，除应用于科学研究外还可广泛应用于临床诊断，具有良好的市场前景。（3）本专利技术提供的动物淋巴细胞分离液，羟丙基-β-环糊精能改善分离效果，提高分离效率和成品细胞纯度，配合碘他拉葡胺、甘草酸铵使用，使得细胞成带的时间显著性降低，同时还惊奇的发现，所得到的淋巴细胞质量非常好，几乎没有血小板污染。1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑/马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物为强阳离子聚电解质，有助于红细胞的沉淀，同时可以调节分离液的稠度；1,3:2,4-二(亚苄基)-D-山梨醇对多种生物活性物质具有非特异性保护作用，对单个核细胞起到一定的保护作用；羟丙基-β-环糊精上较多的羟基有助于红细胞的沉淀。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面结合实施例对本专利技术产品作进一步详细的说明。本实施例中所需原料购自国药集团化学试剂有限公司。实施例1一种动物淋巴细胞分离液，其特征在于，包括如下质量百分比的各组分：碘他拉葡胺5%、羟丙基-β-环糊精3%、1,3:2,4-二(亚苄基)-D-山梨醇0.2%、甘草酸铵0.1%、1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑/马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物0.5%、聚乙烯吡咯烷酮0.8％，余量为无热源的去离子水。所述1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑/马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物的制备方法，包括如下步骤：将1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑10g、马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸10g、聚乙二醇单烯丙基醚20g、偶氮二异丁腈0.3g溶于二甲亚砜150g中，在氮气氛围，65℃下搅拌反应4小时，后旋蒸除去溶剂，得到所述1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑/马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物。所述动物淋巴细胞分离液的制备方法，包括如下步骤：按照配比将各组分混合，在室温本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种动物淋巴细胞分离液，其特征在于，包括如下质量百分比的各组分：碘他拉葡胺5-10%、羟丙基-β-环糊精3-5%、1,3:2,4-二(亚苄基)-D-山梨醇0.2-1%、甘草酸铵0.1-0.5%、1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑/马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物0.5-1.5%、非糖基单元的亲水性高分子聚合物0.8-1.5％，余量为无热源的去离子水。/n

【技术特征摘要】
1.一种动物淋巴细胞分离液，其特征在于，包括如下质量百分比的各组分：碘他拉葡胺5-10%、羟丙基-β-环糊精3-5%、1,3:2,4-二(亚苄基)-D-山梨醇0.2-1%、甘草酸铵0.1-0.5%、1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑/马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物0.5-1.5%、非糖基单元的亲水性高分子聚合物0.8-1.5％，余量为无热源的去离子水。


2.根据权利要求1所述的一种动物淋巴细胞分离液，其特征在于，所述非糖基单元的亲水性高分子聚合物选自聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯醇中的至少一种。


3.根据权利要求1所述的一种动物淋巴细胞分离液，其特征在于，所述1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑/马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸/聚乙二醇单烯丙基醚共聚物的制备方法，包括如下步骤：将1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑、马来酰亚胺-三(乙烯乙二醇)-丙酸、聚乙二醇单烯丙基醚、引发剂溶于高沸点溶剂中，在氮气或惰性气体氛围，65-75℃下搅拌反应4-6小时，后旋蒸除去溶剂，得到所述1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑...

【专利技术属性】
技术研发人员：向兴力，
申请(专利权)人：成都吱吖科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51