一种带分子标签引物序列的磁珠及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种带分子标签引物序列的磁珠，表面修饰连接链霉亲合素,磁珠表面连接DNA条形码序列。及其制备方法，包括以下步骤：S1、合成DNA条形码序列：分别合成差异性序列和非差异性序列；S2、表面修饰链霉亲合素的磁珠与非差异性序列相连；S3、差异性序列与非差异性序列通过酶连反应连接；S4、差异性序列与差异性序列通过酶连反应连接。本合成方法简单易操作，准确率高，效果好，灵活性高，可应用于单细胞或者其它的测序技术中。

【技术实现步骤摘要】
一种带分子标签引物序列的磁珠及其制备方法
本专利技术涉及一种生物试剂制备方法，尤其涉及一种带分子标签引物序列的磁珠及其制备方法。
技术介绍
单细胞测序是以单细胞为单位对全基因组或者全转录组进行扩增与测序的技术。在单细胞的建库和测序过程中，每次会对成百数千个细胞同进行测序，为了区别每个细胞的基本信息，通过将单个细胞与带有分子标签的单个微珠或者磁珠以一一对应的方式分离，在细胞裂解后，通过微珠或者磁珠上的分子标签，在单细胞的反转录与扩增过程中,给每个单细胞甚至每条mRNA贴上其独特的标签添加不同的分子标签是单细胞测序的关键步骤,因此每个磁珠都需要携带不同标签的引物序列。目前国内一般只能购买Chemgenes公司的BarcodeoligoDtPrimerONBeads(货号为120917)，但是这个微珠在国内并没有现货，从国外预定存在着货期长，成本高,不同批次不稳定等诸多问题，严重影响公司的产品研发进度，消耗企业的研发成本。上述产品为Dropseq的微珠，合成方法要经过12次的磷酸化合成，用到比较昂贵的合成仪器，制作成功率比较低，导致实验准确率下降，这本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种带分子标签引物序列的磁珠，其特征在于，磁珠表面修饰连接链霉亲合素,磁珠表面连接DNA条形码序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种带分子标签引物序列的磁珠，其特征在于，磁珠表面修饰连接链霉亲合素,磁珠表面连接DNA条形码序列。


2.根据权利要求1所述的一种带分子标签引物序列的磁珠，其特征在于，所述的的DNA条形码序列分为差异性序列和非差异性序列，所述的非差异性序列与磁珠表面连接，所述的差异性序列非差异性序列与相连接。


3.根据权利要求2所述的一种磁珠，其特征在于，所述的磁珠表面连接表面所述的非差异性序列为1条，所述的差异性序列含有2个以上96条差异序列。


4.根据权利要求3所述的一种带分子标签引物序列的磁珠，其特征在于，所述的差异性序列含有3个96条差异序列。


5.根据权利要求1所述的一种带分子标签引物序列的磁珠，其特征在于，所述的磁珠为30微米。


6.一种带分子标签引物序列的磁珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、合成DNA条形码序列：分别合成差异性序列和非差异性序列；
S2、表面修饰链霉亲合素的磁珠与非差异性序列相连；
S3、差异性序列与非差异性序列酶连反应连接；
S4、差异性序列与差异性序列通过酶连反应连接。


7.根据权利要求6所述的一种带分子标签引物序列的磁珠的制备方法，其特征在于，所述的步骤包括检测步骤：通过单细胞转录组测序方式检测。


8.根据权利要求7所述的一种带分子标签引物序列的磁珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：所述差异性序列为N条96差异序列，所述N大于等于2；所述的S3中酶连反应次数为M次；所述的M为N-1或N。


9.根据权利要求6所述的一种带分子标签引物序列的磁珠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、合成DNA条形码序列：分别合成差异性序列和非差异性序列；所述的非差异性序列为磁珠-1引物；所述的差异性序列为磁珠-2引物、磁珠-3引物,磁珠-4引物；
S2、表面修饰链霉亲合素的磁珠与非差异性序列相连：
用BWBuffer溶解引物，磁珠-1引物终浓度为50μM,其它引物终浓度为50μM；
将1x1...

【专利技术属性】
技术研发人员：李涛，方南，杨柳，朱文奇，
申请(专利权)人：新格元南京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32